Кто такой Замай — самый ненавидимый русский рэпер прямо сейчас
Ответы на этот вопрос найдутся в большом интервью Замая для The Flow. Молодость в Бишкеке, знакомство с Гнойным, два десятка релизов, зачем в 30 лет кричать «Антихайп!» и почему всем надо бороться против Юрия Дудя — такой круг тем был нами охвачен.
— Чем закончился ваш спор с Дудем?
Дудь в конце очень испугался, когда его покинули операторы — они пошли грузить аппаратуру. Он оглянулся: “А? Что? Я один?”. И быстро ретировался. Хотя мы его не планировали пиздить, мы вообще не такие люди.
— Как вы разошлись вообще? Врагами?
Да нет. Как с Оксимироном — потыкали друг в друга палками: живой или неживой. Он очень был рад, когда узнал, что видели его выпуски, и даже попросил обняться с ним. Это странно вообще, я ему так и сказал: “Мы знаем, о чем говорим. Ты не знаешь”. Мы знаем, кто такой Дудь, а он не до конца понимает нас, на мой взгляд.
— Про тебя в интернете ноль информации. Известно только, что ты из Бишкека. Долго там жил?
С рождения до 2010 года. Все мои предки жили на территории Средней Азии. Я знаю, что такое Империя! Потом взял и переехал — делать-то нечего там в принципе.
— Бишкек скучный город?
Нет, он достаточно большой, миллионник. Но там другая, нерусскоязычная картина мира. Скорее, постсоветская среднеазиатская. Там русских до сих пор живет достаточно — но если раньше в городе Фрунзе жило 75% русских, то теперь 10% всего.
В Киргизии круто — если ты путешественник, то съезди. Там хорошая природа, 96% территории — горы. Это самая малонаселенная страна в Средней Азии, но там можно много где путешествовать. Всегда всем советую.
— Ты учился в Кыргызском Национальном Университете. Гуманитарный факультет?
Нет, факультет физики. Я инженер микроэлектроники по специальности.
— Работал по профессии?
Малое количество времени и не прямо по специальности. Ты должен был на заводе работать, но в Киргизии по сути мало заводов. Мне не довелось попасть туда.
— Сразу же после универа ты уехал в Питер?
Да. Сначала приезжал посмотреть, как там. Потом поехал, там надо было гражданство получить, все такое.
— Чем занимался, когда перебрался?
Работал много где. Курьером, фотографом, в пиар-агентстве. Много разного, много интересного. По области тоже ездил, но не как Слава.
— Вы с ним на почве баттлов познакомились?
Да, я еще в Киргизии судил какой-то онлайн-баттл — уже в статусе местного рэп-авторитета — и там был чувак с ником Слава КПСС. Я его сразу запомнил, он прикольно наваливал. Он вроде до финала там дошел. Призом была поездка на Иссык-Куль, но в итоге не отдали ее, конечно.
А потом мы в Питере с группой Ежемесячные выступали на концерте Ленина Пакет. Это была общая андеграундная тусовка вокруг ЛП. Одно время, в 2012-13 году была такая сцена абстракт-хип-хопа. Сейчас кто такой хип-хоп представляет? Да никто. Найтивыход только если. А раньше много такого было — ЛП, Эхопрокуренныхподъездов, Гнойный.
— Который сейчас Овсянкин?
Да, настоящий, не фальшивый (смеется). Овсянкин сказал: “Кто-то же должен быть Гнойным”. Это просто по фану получилось. Хороший ход, мне понравился. Потом люди много путали, гадали — сравнивали голоса и так далее.
— А кто тебе придумал никнейм Хан Замай?
Слава придумал. У меня был альбом “Rep Gad”, и все биты сделал мой друг, у которого никнейм KHAN. Там сверху было написано KHAN, а ниже — Замай. И Слава стал угорать, что мне надо назваться “Хан Замай”. Он много что придумал, он вообще талантливый человек.
— У тебя более 20 релизов выпущено. Когда ты понял, что тебя слушают?
Ой, мне вообще не близка была такая позиция. Самое страшное — когда человек осознает, что у него есть аудитория и он чем-то ответственен перед ней. Я не думаю об этом вообще.
Безусловно, чем больше аудитория, тем больше нормальных людей среди долбоебов, даже в процентном соотношении. Но проблема же в том, что нет нормальной критики, что не происходит осмысления релизов. Все поверхностно. Поэтому многие люди слушают и не понимают ничего, для многих это на уровне аудиокомпозиции, им даже слова не важны. Поэтому разделять на “до” и “после” глупо. Вот Оксимирон достиг этого — и что с ним стало? Кукухой поехал!
— С кем ты впервые вышел на баттл?
На Лиге Гнойного против Мц Медвежи, был такой известный рэпер. Рэперы же между собой часто баттлятся под пивко, это как спорт. Или когда ты в школе говоришь какому-то мудаку: “Ты мудак” — это же тоже баттл.
— Зачем нужны баттлы между коллегам по лейблу? Это же неинтересно, у них конфликта нет.
Да это же круто! Вот представь — мне немного странно предполагать, что в системе развлекательной может быть настоящий конфликт. Вот Oxxxymiron и ST — это же максимально нелепо: какие-то мужики выходят и выясняют отношения. Это все существует в рамках формы развлечения — где-то она более свободная, а где-то более серьезная. Но представлять, что у рэперов может быть реальный конфликт, глупо. Это просто одна из сфер творчества. Можно баттлить и со своими, это нормально.
— Тебе 30 лет, верно?
Да.
— Зачем человеку в 30 лет это все — рэп, баттлы, “Антихайп”?
А зачем Jay-Z в 40 с чем-то лет это все? Это же творчество, форма того, как ты существуешь. Я бы спросил: зачем 15-летнему делать рэп? Он же ничего не может рассказать, он ни в чем не уверен. Наоборот: чем старше, тем угарнее должно быть, тем более четко сформулирована позиция.
— Ты считаешь себя леваком?
Да мне кажется, вся планета — леваки. Все за справедливость, за равноправие, за равный доступ к благам цивилизации, к средствам донесения себя до масс. Сейчас даже правые большевистским методом работают.
— Чем ты сейчас зарабатываешь деньги?
Лейбл “Антихайп”! У нас есть выступления, у нас есть мерч, у нас есть какие-то внутренние штуки. Плюс у меня в принципе есть какие-то деньги — я же взрослый человек, у меня есть деньги. Ты же существуешь внутри круговорота финансов в природе.
— Насколько успешно финансово предприятие “Антихайп”?
Да хрен его знает. Мы же не для того это делали, чтобы на нас ходило больше людей. А чтобы оформить наши общие интересы в одну идею. Как бывает — ты что-то оформляешь, а оно потом уже без тебя существует. Вот нам чувак из регионов писал, что ему за майку “Антихайп” дали пизды.
— Это хорошо или плохо?
Конечно же, не очень хорошо — человек пострадал. Но некая идея, сформулированная нами, привлекает каких-то других людей, вот я о чем.
— Ок, какая у вас идея?
“Наш манифест тут — пошел нахуй”. Мне кажется, максимально круто сформулировано.
— Вы себя противопоставляется остальным, так?
Кому “остальным”? Это странно, как будто мы мамкины революционеры. Мы против условного Юрия Дудя, против человека, который знает “как”. Он точно знает, как хорошо и как плохо. Вот против таких людей стоит бороться всему человечеству. Против ограниченности и самоуверенности. Которая лезет и говорит: “Это плохо, это не так”.
Нет, чувак, может быть бесконечное количество вариантов. Вот все знают, что музыку нужно делать “качественно”. В смысле? Сейчас все самые угарные исполнители зарубежные — они по DIY. Lil Pump, Smokepurrp, XXXTentacion. Это же андеграунд, им не нужно качество, у них есть своя внутренняя энергия. Бабангида говорил: “Сидя дома в кресле, я создал свой стиль и всех вас спасу”.
— Бабангида для тебя герой?
Мне, в первую очередь, творчество его нравится, а не то, что его никто никогда не видел. У него много точных строк. Вот мой любимый трек “Гей и гейша”. Начинается угарно: “Она была гейша, он был пидор”. Это гениально. Он может быть разным — веселым и серьезным.
— Какие альбомы тебя перевернули?
Когда я рэп стал плотно слушать, то первые два альбома, которые очень сильно понравились — “Blueprint” Jay Z и “Stillmatic” Nas. Тогда я понял, что рэп — стильная штука.
— Сколько тебе было лет?
Это 2001 год. Лет 15
— “Замай и Слава КПСС — это Schokk и Окси”. Корректно ли такое сравнение?
Мы даже случайно один раз закосплеили фотографию, как у них, хотя девушка-фотограф никогда не слышала их рэп. Я думаю, людям легче всего искать аналогии в том, что когда-то было. А почему Schokk и Окси, а не St1m и Drago? Они же тоже вдвоем всех диссили, а потом расстались.
Отвечая на вопрос — нет, никаких сходств нет. Хотя теперь, когда Слава стал новым Окси, я могу быть “новым Schokk’ом” (смеется). Хотя Schokk и старый в порядке. Окси нет, а Schokk да.
— Ты выступал миротворцем в конфликте Славы с чеченцами?
Не выступал, просто был на связи с людьми, которые нам тогда писали. Это была наша общая ситуация — Слава мой товарищ, и странно было бы его не поддержать. Он сам все сделал, извинился.
— В интервью Дудя он говорил, что ты ему посоветовал извиниться.
Мы обсудили все по-товарищески и пришли к такому выводу. Я думаю, если бы это не было близко ему, он бы не стал этого делать.
Это был нормальным решением, я считаю. Если кто-то кого-то обидел, извиниться не западло. Русский человек всегда может извиниться (смеется).
— Чему эта история вас научила?
Оказалось, что до всего можно докопаться — до любых слов, до любых строк. Было бы желание.
— Как ты в 30 лет справляешься с хейтом школьников в интернете?
Да нормально справляюсь. Думаю: “Ну вот, человек написал, потратил время, подумал обо мне”. Хейт лучше, чем похвала. Рэперов хвалят — а что они могут из этого извлечь? А ненависть может родить дискуссию. О том, “что такое хорошо и что такое плохо”. Похвала неконструктивна — “Бля, круто”, а ненависть может быть на чем-то основана.
— На чем основана ненависть к тебе?
На непонимании. Я не знаю, должны ли люди вообще меня понимать. Юрий Дудь, безусловно, должен, как должен знать про группу Ежемесячные, которая является основой творчества Славы.
— Что надо прочитать или проштудировать, чтобы начать понимать твою музыку?
Начитанность вообще переоценена. Вот Луперкаль много книжек за свою жизнь прочитал, но рэп его говенный. Ему это не помогает. Я уверен, что нормальному человеку надо прочесть определенное количество книг, а потом отвергнуть их. Вступить с ними в противоборство. Сказать: “Я много книг читал, и это полная хуйня”.
— С хейтом понятно, а самое яркое проявление фанатской любви? Девочки просили расписаться на сиськах?
Было такое, кстати, да. Как обычно, набегают, требуют селфак, орут: “Антихайп”. Но ничего безумного не случалось. Возможно, потому что у меня такой недемократичный образ и многие боятся.
— Ты сейчас самый ненавидимый рэпер в русском рэпе. Согласен?
Наверное, да. Вот знаешь, когда я с Хованским поругался, там школьники набежали ко мне. А с Дудем даже круто вышло — пришла некая, в кавычках, культурная общественность. Ненависть тоже должна иметь удельный вес. Пусть культурная публика меня ненавидит! Нахуй похвалу!
— Спрашивал у коллег, за что они не любят Замая. Один сказал: “У него в инстаграме слишком много селфи”. Почему?
Хер его знает! Я вообще не самовлюбленный человек. Но вообще, это хороший критерий ненависти (смеется). Буду теперь кого-то ненавидеть за то, что у него слишком мало селфи в инстаграме!
— Последний вопрос: что стало с МДМАшкой?
Юра съел ее.
— Ты шутишь!
Нет, съел. Съел и ушел. Она же гостевая была.
Замай и Слава КПСС (Zamay & Slava KPSS) – Все что мне нужно (All I need) Lyrics
[Текст песни «Все что мне нужно»]
[Интро: Слава КПСС & Замай]
А, у, чокопай, эти рэперки чё-то опять стонут
Залетают в ров, как косяк дронов, еее
Обла, иди нахуй (Е бой, е бой)
Ты знаешь, кто мы такие (Е)
Носороги
[Припев: Замай]
Всё, что мне надо — это notepad и Winamp
И твоё одобрение — награда? Парень, я рот ебал!
Я тут давно и могу себе позволить всё, чё хочу
Я босоногий крестьянин, избалованный, как Барчук (Ещё раз)
Всё, что мне надо — это notepad и Winamp
И твоё одобрение — награда? Парень, я рот ебал!
Я тут давно и могу себе позволить всё, чё хочу
Я босоногий крестьянин, избалованный, как Барчук
[Куплет 1: Замай]
Ха, они думают, что я такой, как все
Что мне нужна слава, деньги и их блядей
Но у меня никогда не было проблем:
Девки заебали, денег больше, чем в Москве
Я живой мем, и не думал стать бы мне кем!
Я буду никем, как ёбаный Кен
Красивый, модный, молодёжный
Андеграунд-рэп-манекен, пиздец!
Я это тыщу раз повторял и уже порядком заебался
Ведь Антихайп — это будто лезгинка в ритме вальса
Одно и то же, из года в год
Биток убогий, тупой тексток
И столько строф, что столько строк
Сведут твой анусок в острог
[Припев: Замай]
Всё, что мне надо — это notepad и Winamp
И твоё одобрение — награда? Парень, я рот ебал!
Я тут давно и могу себе позволить всё, чё хочу
Я босоногий крестьянин, избалованный, как Барчук (Еще раз)
Всё, что мне надо — это notepad и Winamp
И твоё одобрение — награда? Парень, я рот ебал!
Я тут давно и могу себе позволить всё, чё хочу
Я босоногий крестьянин, избалованный, как Барчук
[Куплет 2: Слава КПСС]
Наебал систему: вышел в топ и не являюсь попсом (Андерграунд)
Всё, что нужно: кэс и пара новых кроксов (Кроксы заебись, а)
Пробился в ящик, но я настоящий (I true!)
Что это значит? А хуй его знает
За неимением здесь авторов
В рус-рэпе одновременно отец и злая мачеха
Мои куплеты вылетают, как щуки из проруби
Браток, прости, но ёб твою, твои куплеты — голуби!
Знай, я как Дэвид Боуи: люблю бухать и глиттер (Е, ты знаешь)
И раньше Крида мутился с Филлипом
Нахуй твою фикло, цвет настроения травчик
Если пишу фит с бро, значит Хан Замай затащит (Замай)
Можно не стараться и читать ещё квадрат про книгу (Ебал вас)
Купил недвижку и теперь на всё насрать парнишке
Хули нам, босякам Хабаровским, икры в столовке
На чайной ложке недодали, мы сожрали золофт
Это Call Of Duty, pow, ебанутый PewDiePie
У, чокопай, у, у, чокопай
Рэпер прочитал про то, как любит он creampie
Негр кончил вам на спину — у, чокопай
Первый рэпер-чокопай, у, у, чокобой
Всем знакома твоя шляпа (У), ты чё, ковбой? (Ковбой)
Э-я-я-я-я, один и тот же припев
Э-я-я-я-я, Блэкстар совсем охуел
И ты такой типа: сделал с ними, а потом в отказ
Чё, один раз не пидорас? (Неплохо)
Дал интервьюшку, типа со мной плохо обращались (В жопу ебали)
Вообще меня ебали, но мне как-то не понравилось, а
[Бридж: Слава КПСС]
Ебись в рот, ты дрозд (Эй, парень)
Ебись в рот, ты дрозд (Чё, чё ты скалишь?)
Ебись в рот, ты дрозд (У, мой месседж)
Ебись в рот, ты дрозд
[Припев: Замай]
Всё, что мне надо — это notepad и Winamp
И твоё одобрение — награда? Парень, я рот ебал!
Я тут давно и могу себе позволить всё, чё хочу
Я босоногий крестьянин, избалованный, как Барчук (Еще раз)
Всё, что мне надо — это notepad и Winamp
И твоё одобрение — награда? Парень, я рот ебал!
Я тут давно и могу себе позволить всё, чё хочу
Я босоногий крестьянин, избалованный, как Барчук
ЗАМАЙ — Хуйня текст песни, слова
[Диалог Замая с хейтером]:— Дружище, Замай! Я абсолютно точно…
— Да, да, всё именно так!
— Чем искусство отличается…
— Ваш новый смысл — х*йня!
Х*йня — вот новый смысл.
Хочешь смысла — читай книжки, б*я!
[Припев, ЗАМАЙ]:
Мои тексты — х*йня, мои треки — х*йня
И мои бэтлы — х*йня и мои фэны — х*йня.
И мои деньги — х*йня, а моё кредо — х*йня,
Но посмотри, какая в тр*сах у меня, детка, х*йня.
Ещё раз.
Мои тексты — х*йня, мои треки — х*йня
И мои бэтлы — х*йня и мои фэны — х*йня.
И мои деньги — х*йня, а моё кредо — х*йня,
Но посмотри, какая в тр*сах у меня, детка, х*йня.
Пы-пыу!
[Куплет 1, ЗАМАЙ]:
Большой азарт, потом месяц май,
Хейтерам — смерть, но для девочек заек,
Почему тут такой ах*енный — я не знаю.
Может потому что, бейби — я из АнтиХайпа, а?
Каждый день, как по краю. Биполярка, привет.
Я в интернете самый богатый будто Марк Цукерберг!
Тут все лайки мои! Все зайчатки мои,
Хоть самый вырезаемый МС словно батя раввин.
[Куплет 2, ЗАМАЙ]:
Нах*й твои мемы, знают все — я гений,
Украинские гены, Миша Крупин — как вдохновение
Меня знает твоя мама, Дима Бамберг завещал.
Она видела по ТВ «Вечерний урган», Первый Канал.
Я предсказал, будет батлить Шнуров!
Ты меня плохо знаешь, прид*рок.
Я наведу на рэп игру революцию,
Как-будто Матура.
Нах*й слова, панчи, но форсе трип
И в новой школе самый старший, хоть Хип-Хоп старик!
Я хулиган на последней парте, вы*б Леху на батле.
Он порезался об мой х*й — жалкий! Твой альбом — это шляпа.
Источник teksty-pesenok.ru
Гнилая сущность, как Сережа Сеймур — л*х,
Как Обла в палёном шмоте. Ты просто пугало. Пошел нах*й!
[Припев:]
Мои тексты — х*йня, мои треки — х*йня
И мои бэтлы — х*йня и мои фэны — х*йня.
И мои деньги — х*йня, а моё кредо — х*йня,
Но даже у меня в тр*сах будет побольше х*йня.
Еще раз!
Мои тексты — х*йня, мои треки — х*йня
И мои бэтлы — х*йня и мои фэны — х*йня.
И мои деньги — х*йня, а моё кредо — х*йня,
Но посмотри, какая в тр*сах у меня, детка, х*йня.
[Финал, ЗАМАЙ]:
Молодой Сергей Жуков говорит,
Что он новый панк-рок.
Долбо*б, ты просто новая х*ня —
Учись у старших!
Нах*й АнтиХайп, ведь мы — новый панк-рок, с*ка.
Нах*й АнтиХайп, ведь мы — новый панк-рок, с*ка.
Нах*й АнтиХайп ведь мы — новый панк-рок
Каждый панч прямо в голову и х*й в *бло!
ЗАМАЙ feat. Слава КПСС, ЛСП, Young P&H, ЭПП, Заебатсу & Букер Д. Фред — Вейп-вейп-вейп Lyrics
Вейпим, вейпим, суки, вейпим, Вейпим, вейпим.
Один мальчик очень много вейпил, Как-то приходит он к бабушке, Типа, бабушка, у меня нет денег на вейп, Денег на жижу, поэтому, Ну мне нужна твоя пенсия. Бабушка, она вот, Своими слезящимися глазами посмотрела, И говорит, «Букер, опять ты за своей жижей пришел, Ты у меня вот тогда на прошлой неделе отнял уже пенсию, Тебе мало?» Букер только встал, пар ей в лицо выдохнул и всё. Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Так что Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Люблю Бонса, Фару, Джуба, только папа не сечет, В дэке крутятся Бутусов или Гарик Сукачёв. В паре днями напролет, словно Денди из Парижа, Брат как резаный орет, ведь я убил родных за жижу. И совсем бы бросил сижки, Но на вейпе жарить плюхи неудобно. Я на хайпе, словно я Тимур Юнусов. Моя туса — покемоны, моя чика — Пиджиотто, Жду её после уроков, пара клёвых ховербордов. По Арбату как по маслу катим на концерт Земфиры, Пара острых козырьков, словно лезвие секиры. Я богатый как Саркисов, у меня саркома, киса, И мой сплифф такой огромный есть на картах Дубльгиса. Ловим шайбы как Фетисов, я скрутил себе клубничный, Этот жирный джое отныне называют Глеб Клубничка. Он забит как моя личка, детка, сплюнь и убери, Ты же все-таки техничка в этом клубе, а не мы, детка. Я на ховерборде, золотые спиннерс, Ты не ты, когда голодный, я щас не про Сникерс. Sneakerhead, Джордан, Луи, Файны, Прада, Твои суки хуй мой светят явно как альбом от Фары. Они знают моё имя, легенда как восьмая миля. Я есть мода во плоти, банани именная жижа, бич. Ты вышел ловить покемонов, но поймал леща. Глянь, как заправил полный бак твоей суки, Это как мастер луки, тетра пак, сканка, крутость. Коловрат, стайл и группис. Хуй знает, что это такое, но звучит так модно. Надену в трэшес на витчрейв, и ебану намотку, Мой стиль это семьдесят на тридцать, Твой пятьдесят на пятьдесят. Я катаю на мехмоде этих хэйтеров в сетях, Твоя больная V-кепка на всего лишь пол лица. Жаль, что видно только губы, но я ей ватку поменял. Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Так что Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Я закапал русскую жижку и зачинаю новый текст, На мне розовые очки, будто я не Григорий Лепс. Рюмка водки на столе, чёрный бородинский сель, Готов писать, как жить в России плохо, как жить в России смерть. Я там, где всегда горе, Содом, Гоморра, экспедиция в ГУЛАГ, Ты думаешь, можно тут че то построить, наивный же ты дурак. На главной площади Зиккурат, доморощенный Мубарак, И репрессивный лишь парад, оу щит, пиздец, а-ха-ха, ха-ха. Но правда-то в том, что вокруг одни дебилы, и думать вам не дано, Тут либерал тупой идет войной на коммунизм, диван, патриот. Но это всё оттенки говна, я не разбираюсь, да и нахуй надо! Клал хуй на вас всех огромный, как на Стопхам, А хач на хаммере сранном. Ведь мои вейперы со мной и мы парим, где хотим, Стреляем на лонгбордах, сиги как бандиты Bloods и Creeps. В шляпах винс широкополых, будто двадцать первый палец. Здесь война гибридная на гироскутерах, наш коба Yanix. Я на флексе, этот санный клуб есть моя обитель, Мои пацаны со мной, альфа в поисках добычи. Эта сука, как Алиса, я как модный Кинчев, Мой дрес-скод код Давинчи разгадает эта киса. Мой кэш на кармане ты даже за год не скопишь. Вся моя жизнь, как трансляция в Перископе. Это стадо на танцполе скачет будто скопом, Это так нелепо, словно спутать Сашу Скулу с копом. А, с утра до ночи мой вейп Везувий, его пар безумен, Наши гаджеты мелькают во тьме как сотни злобных фурий. Ебать, он вейпит, но а хули ты хотела, блядина, Решай, кто я модник на ЗОЖе или хай-тек, мудила. На Алиэкспресс приобрел пиздатые педали Palace. С пацанами на ладе гранте мы пиздуем на красный, Блядь, это утро прекрасно, но нас встретит Икарус, Лучше бы я сдох от никотина, чем долбился в анус. Припев: ЛСП х Слава КПСС Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Так что Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. В моем покеболе покемоны, в моём вейпе вейп, На районе самый модный, зови меня вейви-вей. Гироскутер под ногами, кепка винс на волосах, И ты не видишь мою душу по накуренным глазам. В моем покеболе покемоны, в моём вейпе вейп, На районе самый модный, зови меня вейви-вей. Гироскутер под ногами, кепка винс на волосах, И ты не видишь мою душу по накуренным глазам. Люблю Блейзер и вдшку, обожаю слово кайф, Обоссу тебе твой трэшер, если сука ты не шаришь. Презираю всех в панамах и на плоских козырьках, Я на хайпе шарю мемы шарить мемы — Это хайф, это кайф, это так. Мои тексты — глубина, и мы тусуем это сквад, Да мы курим этот сканк,адик, Йоши Ямамото самый редкий на квартале, Я давно закончил школу, сука, нет, но обещаю. Я модный Мот, ты запости фотки, Мои татухи в твоём ноутбуке под мост. И худи-Stussy, Ральф Лорен поло, кепарик классный. Раф Симонс, в North Face′е, я в Хилфигер, Потом Palace, 95-ый Air Max и Insta Pump И не доебаться. Когда вырасту, хочу быть, как тот парень из Team Sesh’а, Она ссыится прямо в вэнсы от того какой я свежий. Полный фэшн, едем низко, она вейпит мою жижку, Зову эту бульбазавр, когда сквиртит дик. В моем покеболе покемоны, в моём вейпе вейп, На районе самый модный, зови меня вейви-вей. Гироскутер под ногами, кепка винс на волосах, И ты не видишь мою душу по накуренным глазам. В моем покеболе покемоны, в моём вейпе вейп, На районе самый модный, зови меня вейви-вей. Гироскутер под ногами, кепка винс на волосах, И ты не видишь мою душу по накуренным глазам. Пятый Куплет: эхопрокуренныхподъездов Два новых гироскутера, мы катим с Федей Букером, Под триловые звуки кушать крафтовое пивос рукколой. С нами наши суки, вмисти её в седак. И мои покеболы в кисти у неё всегда. В барбершопе попиваю фраппучино, Говорил ведь папа строгий должен выглядеть мужчиной. Два пинролла на штанах, только пар в облаках, Прочитал журнал Esquire — это мой альманах. Сочный чат в Телеграмме, с нами спутник и под мост, На неделе стал веганом, наблюдаю личный рост. Написал классный пост и Мирон поставил лайк, Я тусуюсь только там, где распыляется вай-фай. В чумовом ЛСД, на тусовку к ЛСП выдвигаемся, Ведь это лучший грайм из СНГ. А потом на тусэ вместе с Виктором СД, Куча охуенных вейпов и стэндап на ТНТ. Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Так что Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Вейпить это круто, просто и легко, Вейпит Миша Крупин, вейпит Саша Конь. Оставь табак Колумбу, я кальян хачу, Я без них совсем не парюсь, тупо парю, где хочу. В первый раз в Вечернем Урганте увидел это чудо, Понял сразу что, влюбился, мне нужна эта приблуда. Щас с друзьями в пиццерии поглощаю глицерин, Просто парим и молчим, ведь пиздеть особо нету причин. Теперь пользуюсь у телочек успехом, прикинь. Вейп — это забава обеспеченных мужчин, Вейпю, вейпю и не дую в хуй практически. Только если вейп в этот механический, но я не глиномес. Вместо уроков делаю самозамес. Нам с моей тёлкой вейп заменяет секс, ароматный целибат. Я потратил целый бак элитной жижи, Пока выжал этот текст из себя. Выпускаю колец больше всех из ребят. Тем невыветриваемый сладкий туман, Но и если снова станет модным жрать грибы, Буду жрать грибы, горе от ума. Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Так что Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой.
Замай — Хуйня | Текст (слова) песни
— Дружище, Замай! Я абсолютно точно…
— Да, да, всё именно так!
— Чем искусство отличается…
— Ваш новый смысл — хуйня!
Хуйня — вот новый смысл.
Хочешь смысла — читай книжки, бля!
[Припев]
Мои тексты — хуйня, мои треки — хуйня
И мои бэтлы — хуйня и мои фэны — хуйня.
И мои деньги — хуйня, а моё кредо — хуйня,
Но посмотри, какая в трусах у меня, детка, хуйня.
Ещё раз.
Мои тексты — хуйня, мои треки — хуйня
И мои бэтлы — хуйня и мои фэны — хуйня.
И мои деньги — хуйня, а моё кредо — хуйня,
Но посмотри, какая в трусах у меня, детка, хуйня.
Пы-пыу!
Большой азарт, потом месяц май,
Хейтерам — смерть, но для девочек заек,
Почему тут такой ахуенный — я не знаю.
Может потому что, бейби — я из АнтиХайпа, а?
Каждый день, как по краю. Биполярка, привет.
Я в интернете самый богатый будто Марк Цукерберг!
Тут все лайки мои! Все зайчатки мои,
Хоть самый вырезаемый МС словно батя раввин.
Нахуй твои мемы, знают все — я гений,
Украинские гены, Миша Крупин — как вдохновение
Меня знает твоя мама, Дима Бамберг завещал.
Она видела по ТВ «Вечерний урган», Первый Канал.
Я предсказал, будет батлить Шнуров!
Ты меня плохо знаешь, придурок.
Я наведу на рэп игру революцию,
Как-будто Матура.
Нахуй слова, панчи, но форсе трип
И в новой школе самый старший, хоть Хип-Хоп старик!
Я хулиган на последней парте, выеб Леху на батле.
Он порезался об мой хуй — жалкий! Твой альбом — это шляпа.
Гнилая сущность, как Сережа Сеймур — лох,
Как Обла в палёном шмоте. Ты просто пугало. Пошел нахуй!
[Припев]
Мои тексты — хуйня, мои треки — хуйня
И мои бэтлы — хуйня и мои фэны — хуйня.
И мои деньги — хуйня, а моё кредо — хуйня,
Но даже у меня в трусах будет побольше хуйня.
Еще раз!
Мои тексты — хуйня, мои треки — хуйня
И мои бэтлы — хуйня и мои фэны — хуйня.
И мои деньги — хуйня, а моё кредо — хуйня,
Но посмотри, какая в трусах у меня, детка, хуйня.
Молодой Сергей Жуков говорит,
Что он новый панк-рок.
Долбоеб, ты просто новая хуйня —
Учись у старших!
Нахуй АнтиХайп, ведь мы — новый панк-рок, сука.
Нахуй АнтиХайп, ведь мы — новый панк-рок, сука.
Нахуй АнтиХайп ведь мы — новый панк-рок
Каждый панч прямо в голову и хуй в ебло!
ЗАМАЙ — Х*йня текст песни
— Дружище, Замай! Я абсолютно точно…— Да, да, все именно так!
— Чем искусство отличается от не искусства?
— Ваш новый смысл — х*йня!
Х*йня — вот новый смысл!
Хочешь смысла — читай книжки, б*я!
[ЗАМАЙ]:
Мои тексты – х*йня! Мои треки – х*йня!
И мои баттлы – х*йня! И мои фэны – х*йня!
И мои деньги – х*йня! А мое кредо – х*йня!
Но посмотри, какая в тр*сах у меня, детка, х*йня!
Еще раз!
Мои тексты – х*йня! Мои треки – х*йня!
И мои баттлы – х*йня! И мои фэны – х*йня!
И мои деньги – х*йня! А мое кредо – х*йня!
Но посмотри, какая в тр*сах у меня, детка, х*йня!
[ЗАМАЙ]:
Большой азарт, потом месяц май
Хейтерам — смерть, но для девочек заек
Почему ты такой ах*енный? Я не знаю!
Может потому что, бейби, я из АнтиХайпа, а?
Каждый день, как по краю. Биполярка, привет
Я в интернете самый богатый, будто Марк Цукерберг
Тут все лайки мои, все зайчатки мои
Хоть самый вырезаемый МС словно батя Раввин
Нах*й твои мемы, знают все — я гений
Украинские гены, Миша Крупин — как вдохновение
Меня знает твоя мама, Дима Бамберг завещал
Она видела по ТВ «Вечерний урган», Первый Канал
Я предсказал, будет батлить Шнуров
Ты меня плохо знаешь, прид*рок
Я наведу на рэп игру революцию
Как-будто Матура
Нах*й слова, панчи, но форсе трип
И в новой школе самый старший, хоть Хип-Хоп старик
Я хулиган на последней парте, вы*б Леху на баттле
Он порезался об мой х*й — жалкий! Твой альбом — это шляпа!
Гнилая сущность, как Сережа Сеймур – л*х!
Как Обла в палёном шмоте. Ты просто пугало! Пошел нах*й!
[ЗАМАЙ]:
Мои тексты – х*йня! Мои треки – х*йня!
И мои баттлы – х*йня! И мои фэны – х*йня!
И мои деньги – х*йня! А мое кредо – х*йня!
Но посмотри, какая в тр*сах у меня, детка, х*йня!
Еще раз!
Мои тексты – х*йня! Мои треки – х*йня!
И мои баттлы – х*йня! И мои фэны – х*йня!
И мои деньги – х*йня! А мое кредо – х*йня!
Но посмотри, какая в тр*сах у меня, детка, х*йня!
[ЗАМАЙ]:
Молодой Сергей Жуков говорит
Что он новый панк-рок
Долбо*б, ты просто новая х*йня
Учись у старших!
Нах*й АнтиХайп, ведь мы — новый панк-рок, с*ка!
Нах*й АнтиХайп, ведь мы — новый панк-рок, с*ка!
Нах*й АнтиХайп ведь мы — новый панк-рок!
Каждый панч прямо в голову и х*й в е*ло!
Понравился текст песни?
Оставьте комментарий ниже
CMH — XXX FREESTYLE (Russian Village Boys, Pyrokinesis, Booker, Замай, Слава КПСС)
C#m А, йа Да, я гений, как Евгений Понасенков Если б батя был умнее ты б остался на салфетке Я бы взорвал даже в школе за партой Ты бы не взорвал с тротиловой шашкой Подписывайтесь на мой патреон За 3 бакса нормально как бы, но с пятерки Слава сам с пятерки начинал, щас уже на десятку перешел Ну, так… Ну насобирали, конечно, йе Я не видал никогда Айвана из Ленина Пакет Говорят, он носит по проспекту ленина пакет Говорят, у него в кармане немеренно галет Он Владимира Козырева перепел песню "Букет" Букер не знает, кто такой Айван Букер ведь панк, это стыд и срам Ведь Айван был первый, кто зачитал под гитар Кто выворил весь айвар и поел айва Плывут параходы - привет Айвану Летят паровозы, мы не наркоманы Мы веганы, но я только мясо ем Уважаю борьбу за кавказский балет Плюс у Айвана рюкзак, туда влезет море Там себе может найти кармашек себе и Глеб Морев Может быть там спрятался и Бабангида? Айван, выгони его оттуда насильно! Айван, Айван, губернатор Обнинска Ваня Айван, Ванюша родненький Все хотят соль [?] от Вани Айвана Слушать музончик и в ванне поплавать Айван, Айван, губернатор Обнинска Ваня Айван, Ванюша родненький Все хотят соль [?] от Вани Айвана Слушать музончик и в ванне поплавать Эй, подписывайтесь на мой патреон: Www точка patreon точка com слэш, это косая черта такая zamay86 Еще раз: за три бакса нормально, за пять уже можно тексты читать, десять - вы попадете в чат, за 15 - эксклюзивные онлайн-концерты, вот прям как щас, за 25 уровень "Юрий Дудь", скидки на билеты, ну, а за 100 в месяц мы вас примем в Антихайп Вот Слава пока не подкопил, но скоро подкопит Эй, эй, эй Айван, Айван, губернатор Обнинска Ваня Айван, Ванюша родненький Все хотят соль [?] от Вани Айвана Слушать музончик и в ванне поплавать Эй Братишка Братиш… Я на мефедроне с водкой, с водкой Запиваю водку бухлом Мам, я должен мыть мертвым, мертвым А что мне еще остается? Я на мефедроне с водкой, с водкой Запиваю транки бухлом Мам, я должен мыть мертвым, мертвым А что мне еще остается? Трахаюсь с сукой, словно я женат Извини, малышка, твои сиськи - ламинат Глажу твой лобок, он похож на мою шляпу Глажу твой лобок, ты как будто Павел Ясман Оу, заряжаю сразу автомат Я стреляю крепко, словно в глотке бутират Все мои строки - ядерные бомбы Все твои строки - сочные, как помповый дробовик Я стреляю тебе в жопу Заряжаю сразу, словно я Глоба Вижу по звездам: я буду с тобой Вижу по звездам, но прости, я голубой Я не трахаюсь с бабами, трахаюсь с крутыми Трахаюсь с такими, кто знает мое имя Замай Попробуй угадай: куда я засуну эти деньги? Попробуй угадай: зачем мне военник? Не ходил в армию, в армии есть Мой любимый прапорщик - автомат Жесть, как стелю, вижу, что ты селюк Весь твой стилек прилег ко мне на печку, лох Я на мефедроне с водкой, с водкой Запиваю транки бухлом Мам, я должен мыть мертвым, мертвым А что мне еще остается? Я на мефедроне с водкой, с водкой Запиваю транки бухлом Мам, я должен мыть мертвым, мертвым А что мне еще остается? Самый грустный, словно Леха Элджей Нету денег и нет друзей Я ходил в Эрмитаж-музей, там весит Ван Гог - бывает веселей Провожу время, когда хожу с блядями Зависаю и пью алкоголь на яме Иногда Yammy-Yammy, словно бы мишка Покупаю себе чековую сберкнижку у бомжей Со мной вместе молчаливый Джей Он никогда меня не выдаст Все мои строки - веганская пицца Слушай, давай веселиться, давай с тобой ебаться под треки Карла Маркса Йе, йе, я люблю, когда сладко, я люблю, когда со мной мулатка Мулатка Ольга, мулатка Сабрина, мулатка я знаю, что это имя Ты выдумала чтоб со мной ебаться Я люблю ебать так же своих пацов Пацы из Антихайпа Пацы из Антихайпа Ты знаешь, что наш город — это Хайфа Мы все жиды, но мы отдыхаем Запиваю бухлом Мам, я должен мыть мертвым А что мне еще остается? Я на мефедроне с водкой, с водкой Запиваю транки бухлом Мам, я должен мыть мертвым, мертвым А что мне еще остается? Пр-р-р Это Олег Майами
Оцените сложность:
Сложно
Средне
Легко
GIF-файлов Edm Memes | Tenor
Продукты
- GIF Клавиатура
- Android
- Mac
- Партнеры по контенту
Изучите
- Реакционные GIF-изображения
- Изучите GIF-изображения
FAQ
- Пресса
- Условия и конфиденциальность
- Лицензии на веб-сайт
- Свяжитесь с нами
API
- Tenor GIF API
- Документация по GIF API
- Unity AR SDK
-
rave
-
dance party
-
танцы
Наклейки
Посмотреть все наклейки- # Rainbow-Frog-Gif
- # Funny-Meme
- # Laddi-Memes
- # Animated-Text
- #flames
- #meme
- #memes
- # Fc-Bayern
- #fc b
- #bayern
- #munich
- #meme
- #pepe
- #goreng
- # Meme-Goreng
GIFs
- 000 # yookie #
- #yookie
- #nawty
- #nawtystep
- #edm
- # Divi-Project
- # Nick-Saponaro
- #divi Rights
- # Evacuate-The-Dancefloor
- #cascada
- #parrot
- #dance
- #celebrate
- #rave
- #maxon #maxon #zamay
- # Digi-Byte
- #dgb
- #meme
- #memes
- # Elon-Musk
- #digibyte
- #dgb
- #me 3
- #sussy
- #Gone
- #crab
- #rave
- #dancing
- #digibyte
- #dgb
- #lmao
— - -Messer Dab-Rave
- #Dab
- #euphorian
- #joat
- #dubstep
- #indefinite
- #lsd
- #doidao
- Make # Raves-9000-
- World-Go-Round
- # Sandy-B
- #meme
- #reflection
- #tv
- #computer
- #digibyte
- #dgb
- #alien #alien
- # Патляма-Деван
- # мемы
- #meme
- #dance
- #memes
- #dank
- # Meme-Party
- #dance
- -Is-Canceled
- #uk
- #ngl
- #crab
- # Crab-Rave
- #crabmaster
- #online
- #epicland
- #dank #normie
- # 4chan
- #party
- #dance
- #dancing
- #kid
- #meme
- #memes
- #memer
- #discord
- # Блэк-Кофейный
- # Kenn-Bosak
- #digibyte
- #dgb
- #meme
- #Dubstep
- # 2012
- 000 #Skrilillex
- 0005 #Skrilillex -Cant-Stand-It
- # Twenty4-Seven
- #memes
- #kermit
- #meme
- # I-Should-Study
- #digibyte
- #eggplant 005 #crypto
- # Илон-Маск
- #digibyte
- #dgb
- #pokemon
- #sandwich
- #chosename
- # 9riddim # 9riddim
- #ZD
- #EDM
- #Raves
- # Zeds-Dead
- #ZD
- #EDM
- #Raves
- #undertale
- # ansale-ansale
- #akuto
- #akutomusic
- #riddim
- #dubstep
- #mushroom
- # Super-Mario
- #digibyte
- #dgb
- 00 #dgb
- #memes
- #meme
- #dance
- #dancing
- #Dope
- #party
- #meth
- #rave
- #digibyte
- #dgb
- #meme
- #memes
- #asmongold
- #asmonbald
- # Mail-Muncher
- celebra0005 #parrot #parrot
- #digibyte
- #dgb
- #hashoshi
- #meme
- #changeangel
- #dance
- #dancing
- #memesteglitch
#zamay Tumblr posts — Tumbral.com
Следующий товар со скидкой 25% * на Тунидо, Санта-Марта (промокод не требуется) был впервые замечен на https://travelhelpguru.com/
Получить скидку
Промокод и информация об отеле
Название отеля: Tunido, Santa Marta
Адрес: Calle 12 # 3-57 Centro Historico, 470004 Санта-Марта, Колумбия
Город: Centro Historico, Санта-Марта
Страна: Колумбия
Описание: Отель Tunido удобно расположен в Санта-Марте. бар, бесплатный Wi-Fi и сад.К услугам гостей услуги консьержа и терраса.
Экономьте деньги: * Получите скидку до 25% в зависимости от дней недели, в которые вы бронируете номер, продолжительности вашего пребывания, текущей доступности номера, времени года и других факторов
Детали промокода: в настоящее время для экономии денег не требуется купон или промокод (любая доступная скидка будет применена автоматически)
Описание объекта (номера, цены, предложения и многое другое)
Отель Tunido удобно расположен в Санта-Марте. номера, бар, бесплатный Wi-Fi и сад.К услугам гостей услуги консьержа и терраса. К услугам гостей круглосуточная стойка регистрации, обслуживание номеров и обмен валюты.
Гости хостела могут насладиться завтраком по меню или вегетарианским завтраком.
Гости Tunido смогут заняться активными видами отдыха в Санта-Марте и его окрестностях, например, покататься на велосипеде.
Популярные достопримечательности рядом с отелем включают Музей золота Санта-Марты, парк Симона Боливара и собор Санта-Марты.Ближайший аэропорт — международный аэропорт имени Симона Боливара, расположенный в 18 км от Tunido, и отель предлагает платные услуги трансфера от / до аэропорта.
Краткие обзоры (на английском и других языках)
Персонал был очень дружелюбным и отзывчивым. Они постарались выполнить все наши пожелания и создали прекрасную атмосферу. В комнате уютно…
Очень красивый хостел: современный, в центре, с хорошей атмосферой и хорошими людьми, работающими там. Кровать была удобной, большой и приватной. Хороший завтрак …
Я был в 3 хостелах в Санта-Марте (приезжая и уезжая из разных мест), и мне было так грустно, что я нашел этот последний.Лучший хостел от…
Превосходный отдых — тихий, хороший завтрак, обмен книгами, чаевые для автобусов и т. Д.
— огромные кровати-капсулы с занавесками (1,40 м, я думаю) — хороший душ с горячей водой — действительно хороший завтрак — прохладная атмосфера (нет party hostel) — чили…
Еда нового шеф-повара была превосходной, комната была просторной и удобной, вешалкой для одежды, бесплатной водой, Wi-Fi был хорошим. Мы были немного обеспокоены…
Очень стильный, очень удобный, приятный персонал, отличное питание, хорошее расположение, бесплатная питьевая вода
Хотелось бы, чтобы все хостелы были такими! Чистые, удобные и красиво оформленные номера.Приветливый персонал и уважительные гости. 10/10
Расположение — посередине центра, но тихо для снаОбщее пространство большоеМаленький хостел
Рекомендуемые отели (дополнительные предложения)
Если вам нравится этот отель, вас также могут заинтересовать:
1. Отель Rochis House, Santa Marta
Отель Rochis House расположен в 1,2 км от собора Санта-Марта и в 1,4 км от порта Санта-Марта. К услугам гостей номера с кондиционером и собственной ванной комнатой в Санта-Марте.
Calle 26BIS # 7A-45 La Esperanza, 470006 Санта-Марта, Колумбия
2.Casa de Mony, Santa Marta
Отель Casa de Mony расположен в Санта-Марта, в 400 метрах от Белло-Оризонти. К услугам гостей открытый бассейн, бесплатная частная парковка, сад и принадлежности для барбекю.
Villas Trinitarias Calle 103 # 3-83 Pozos Colorados, 470006 Санта-Марта, Колумбия
3. Portal Atlante, Санта-Марта
Расположен в Санта-Марте, в 14 км от Кинта-де-Сан-Педро-Алехандрино и в 17 км от Санта-Марта Голд. К услугам гостей Museum, Portal Atlante номера с садом и бесплатная частная парковка…
Kilómetro 11.5 vía Riohacha, 470003 Санта-Марта, Колумбия
4. Shambhala Tayrona Spa, Santa Marta
Спа-отель Shambhala Tayrona расположен в Санта-Марте. К услугам гостей бесплатный Wi-Fi, ресторан, общий лаундж и сад.
kilometro 24.5, Avenida Troncal Del Caribe Via Parque Nacional Tayrona, Calabazo, 470007 Санта-Марта, Колумбия
5. Hotel Zamay Plus, Santa Marta
Отель Zamay Plus расположен в Санта-Марте, в 300 метрах от Родадеро. открытый бассейн, бесплатная частная парковка, бар и сад.
Cr 4 9 A 29 Lote 3 rodadero, 470007 Санта-Марта, Колумбия
Окончательный отзыв и детали для этого жилья
Бронирование проживания: когда вам нужно забронировать номер в этом отеле, вы также можете увидеть отзывы других людей ушли на это. Это поможет вам быть еще более уверенным в том, что вы делаете правильный выбор.
Ссылка на гуру туристической помощи №: travelhelpguruc1v5049
Zamay Signification Du Prénom? Que Signifie Zamay Nom
C’est fou:Des milliers ont ce don unestimable, mais ne le découvrent jamais.
Эссенция Seuls quelques-uns connaissent leur véritable.
Découvrez votre Noms Signification cachée
Сопровождающий! Retour à l’analyse de personnalité de Zamay
Enthousiaste, lumineux vous êtes une personne d’action et de communication. Voilà pourquoi vous avez besoin d’échanger, découvrir et apprendre ensemble avec les autres.
Curieux de nature il y a une soif insatiable de connaissances qui fait souvent vous repousser les limites et aller vers des горизонты инконнус.La concept de votre vie quotidienne avec un peu de fantaisie que vous êtes особенно творческий и интуитивно понятный.
Вывод?
Extravertie Общительный qui fait toujours des amis avec de nouvelles personnes. Une personne optimiste qui voit le bon côté des choses et Accepte la viemon elle vient, qui vous permet de profiter pleinement de celui-ci. Adaptable à toutes les nouvelles ситуаций que vous obtenez rapidement à la vitesse avec les gens. Cependant faites внимание в ne pas glisser dans la superficialité en raison d’un besoin de plaire, d’être relative et écouté.Né sous le numéro d’échange signifie que vous détestez les conflits ou les tensions qui choisissent de fuir plutôt que de les affronter.
Замай, значение lié au travail
Travailler pour vous значимость отношений и контактов или движения.Donc, il est nécessaire d’avoir des contact avec d’autres, de faire des rencontres passionnantes et enrichissantes for varier les plaisirs ou дисциплин. Doué d’un bon sens de la communication, vous êtes fait de travailler dans une équipe.Avoir de fortes Capcités Diplomatiques vous Exécutez convaincante vos projets ou idées en douceur. Поливалентный, vous pouvez exercer un определенное nombre de métiers et d’effectuer diverses tâches tout en adapting à merveille. соответствующие профессии: compétences en communication (ressources humaines, la publicité, en charge de la communication), l’audiovisuel (télévision, radio) métiers, activités artistiques (modérateur, peintre, danseur, créatif, Concepteur), la vente (toutes les formes ), le tourisme, le commerce activités, l’édition, le journalisme, l’astrologie, la Psyologie, la numérologie.
Qu’est-ce que le bien-être signifie Zamay?
Vous êtes une personne active qui a besoin de vivre pleinement quel que soit le coût monétaire.Ainsi vous donnez souvent un pourcentage центов. Si vous poz des questions, ils sont redument d’ordre existentielle parce que vous laissez-vous emporter par la vie en prenant toujours une bouchée à la fois. Vos points faibles sont: les mains, poumon, du larynx, du système nerveux, l’estomac.
Замай значение на финансисте плана
Вот связь с агентом, являющимся комплексным партией, который вам нужен, как наш быстрый помощник в поиске и поиске.La plupart du temps vous allz vivre selon vos désirs, mais alterne avec des périodes de frugalité!
Подход к селекции in Silico для разработки ДНК-аптамеров для субпопуляции стволовых клеток немелочной клеточной линии аденокарциномы рака легкого A549
Radiol Oncol. 2018 июн; 52 (2): 152–159.
, 1, 2 , 3 , 3 , 4 , 5 , 3 , 6 , 6 , *, 6 , * 1, 7Mateja Vidic
1 Кафедра генетической токсикологии и биологии рака, Национальный институт биологии, Любляна, Словения
2 Jožef Stefan International Postgraduate School, Словения, , Словения, , Словения,
3 Центр передового опыта в области биосенсоров, контрольно-измерительной аппаратуры и управления процессами, Центр биотехнологии, Айдовщина, Словения
Ника Янез
3 Центр передового опыта в области биосенсоров, приборов и управления процессами, Центр биотехнологий, Словения
, Айдовчина, СловенияMichael Blank
4 AptaIT GmbH, Мюнхен, Германия
Tomaz Accetto
5 Департамент зоотехники, Bi технический факультет, Университет Любляны, Любляна, Словения
Ян Маври
3 Центр передового опыта в области биосенсоров, приборов и управления процессами, Центр биотехнологии, Айдовщина, Словения
Isis C.Nascimento
6 Отделение биохимии, Институт химии, Университет Сан-Паулу, Сан-Паулу, Бразилия
Артур А. Нери
6 Отделение биохимии, Институт химии, Университет Сан-Паулу, Сан-Паулу Бразилия
Проф. Хеннинг Ульрих
6 Отделение биохимии, Институт химии, Университет Сан-Паулу, Сан-Паулу, Бразилия
Проф. Тамара Т. Ла
1 Отдел генетической токсикологии и биологии рака, Национальный институт биологии, Любляна, Словения
7 Кафедра биохимии, факультет химии и химической технологии, Университет Любляны, Любляна, Словения
1 Кафедра генетической токсикологии и биологии рака, Национальный институт биологии Любляны , Словения
2 Международная школа последипломного образования им. Йожефа Стефана, Любляна, Словения
9067 8 3
Центр передового опыта в области биосенсоров, контрольно-измерительной аппаратуры и управления процессами, Центр биотехнологии, Айдовщина, Словения4 AptaIT GmbH, Мюнхен, Германия
5 Кафедра наук о животных, Биотехнический факультет, Университет Любляны, Любляна, , Словения
6 Кафедра биохимии, Институт химии, Университет Сан-Паулу, Сан-Паулу, Бразилия
7 Кафедра биохимии, Факультет химии и химической технологии, Университет Любляны, Любляна, * Проф.Хеннинг Ульрих, Департамент биохимии, Институт химии, Университет Сан-Паулу, Av. Проф. Линеу Престес 748, Сан-Паулу, 05508-000 SP, Бразилия. [email protected]
* Профессор Тамара Т. Ла, Национальный институт биологии, Večna pot 111, 1000 Ljubljana, Slovenia
* Текущий адрес: Aptamer Group, York YO10 5NY, United Kingdom
** Фактический адрес: Компания Lek-Sandoz, Любляна, Словения
Поступила в редакцию 24 ноября 2017 г .; Принято 26 февраля 2018 г.
Copyright © 2018 Матея Видич, Тина Смук, Ника Янез, Майкл Бланк, Томаз Акчетто, Ян Маври, Исис К.Насименто, Артур А. Нери, Хеннинг Ульрих, Тамара Т. Ла, опубликовано Sciendo. Эта работа находится под лицензией Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 3.0 License.
Эта статья цитируется в других статьях в PMC.Abstract
Предпосылки
Обнаружение циркулирующих раковых клеток легкого с характеристиками, подобными раковым стволам, представляет собой улучшенный инструмент для прогноза заболевания. Однако современные методы на основе антител имеют некоторые недостатки, и поэтому клеточный SELEX (систематическая эволюция лигандов путем экспоненциального обогащения) был использован для разработки ДНК-аптамеров, распознающих маркеры клеточной поверхности немелкоклеточной карциномы легкого (NSLC).
Материалы и методы
Клеточную линию аденокарциномы человека A549 использовали для отбора в семи клеточных циклах SELEX. Мы использовали лейкоциты крови человека для отрицательной селекции и антитело, связывающее антитело CD90, маркер стволовых клеток легких, клетки A549 для положительной селекции.
Результаты
Полученные олигонуклеотидные последовательности после седьмого цикла SELEX были подвергнуты селекционному анализу in silico , основанному на трех независимых типах биоинформатических подходов, выбрав двух близкородственных кандидатов в аптамеры с точки зрения консенсусных последовательностей, структурных мотивов, аффинности связывания ( Kd) и устойчивости (ΔG).Мы выбрали и идентифицировали аптамер A155_18 с очень хорошими характеристиками связывания с клетками A459, отобранными для связывания антитела CD90. Рассчитанное филогенетическое дерево показало, что аптамеры A155_18 и известный аптамер S6 клеток A549 имеют тесное структурное родство. Анализ последовательности цМема показал, что они имеют два уникальных мотива, отсутствующих в других последовательностях.
Выводы
Новый аптамер A155_18 имеет сильную аффинность связывания с субпопуляцией линии клеток карциномы легкого A549, которая экспрессирует маркер стволовых клеток CD90, что указывает на возможную стволовость, характерную для линии A459, или субпопуляцию, присутствующую в этой клеточной линии.Этот аптамер можно применять в качестве диагностического инструмента для идентификации циркулирующих клеток NSLC.
Ключевые слова: аптамеров, клеточный SELEX, циркулирующие опухолевые клетки, немелкий рак легкого, вычислительная биология
Введение
ДНК-аптамеры приобретают третичные структуры олигонуклеотидов, которые позволяют им связываться с различными целевыми макромолекулами, такими как белки через нековалентное связывание. Аффинность связывания аптамера с эпитопами клеточной поверхности находится в диапазоне моноклональных антител. 1 , 2 Предполагается, что аптамеры, предназначенные для связывания со всей клеткой, связываются либо со специфическими белками, либо с другими сложными молекулярными структурами. Аптамеры с сильным связыванием отбираются с помощью метода отбора in vitro, в пошаговом процессе из начальной комбинаторной библиотеки из 10 15 случайных олигонуклеотидов с помощью процесса, называемого SELEX (Систематическая эволюция лигандов путем экспоненциального обогащения), обзор Шмука и Ульриха . 3 Вкратце, процесс SELEX включает пять основных этапов: связывание, разделение, элюирование, амплификация и кондиционирование повторяющимся и поэтапным способом, который сужается до гомогенной популяции последовательностей с высокой целевой аффинностью и селективностью. 4 Используемый здесь подход Cell-SELEX является модификацией оригинала исходного метода, в котором отбор аптамеров связывается с эпитопами клеточной поверхности клеток-мишеней, т.е. е. опухолевых клеток, следует этап отрицательной селекции против нецелевых клеток для удаления любых последовательностей, которые обычно связываются с эпитопами, экспрессируемыми обоими типами клеток. Окончательно полученные аптамеры должны быть селективными для желаемого типа клеток. 5 , 6
Хотя основные механизмы связывания мишени аптамера известны, теоретическое предсказание связывания отдельных олигонуклеотидов с клеточными поверхностями невозможно.Однако недавно были разработаны новые инструменты биоинформатики, которые могут различать уже выбранный набор аптамеров с самой низкой константой диссоциации и самой высокой энергией связи. При раке аптамеры были предложены для замены антител в основном в диагностических целях, поскольку они более надежны с точки зрения воспроизводимости, стабильности и стоимости производства 7 .
Обнаружение циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) в биологических жидкостях до или во время первого медицинского вмешательства представляет собой особую проблему для прогнозирования прогрессирования заболевания 8 .Две технологии, используемые для подсчета ЦКО, система поиска клеток ® , основанная на обнаружении маркеров белков мембран раковых клеток с помощью антител 9 , и платформа ISET (изоляция клеток эпителиальной опухоли по размеру), основанная на исключении размера клеток, сами по себе и не используются в качестве дополнительных компонентов для диагностики на основе ЦОК 9 , поэтому необходимы новые подходы. Заболеваемость раком легких и уровень смертности продолжают расти. Подгруппа НМРЛ, по-видимому, имеет самые высокие показатели заболеваемости и в большинстве случаев является местнораспространенной или метастатической на момент постановки диагноза. 10 Таким образом, мы использовали клеточную линию A549, полученную из первичной опухоли пациента с НМРЛ, для повышения уровня аптамеров. К настоящему времени было предпринято несколько успешных попыток воздействовать на клетки NSCL в кровотоке (ЦОК легких) с помощью специфических аптамеров. 11 , 12 , 13 Однако они не касались потенциальной стволовости ЦКО, которая, по-видимому, способствовала различению клеток с самым высоким канцерогенным потенциалом и, таким образом, более актуальна для агрессивного прогрессирования и худшего прогноза рак легких.Эти стволовые клетки рака легких (CSC) экспрессируют высокие уровни белка CD44 high и CD90 + . 14 Кроме того, было показано, что клетки CD90 + A549 также экспрессируют маркеры CSC, такие как Oct4, Sox2 и некоторые другие. 14 Эти клетки имели более высокую скорость пролиферации и онкогенную способность, и Yan et al . предположили, что среди пациентов с раком легких существует субпопуляция клеток CSC легких, которые могут быть обнаружены с помощью специфических аптамеров.Таким образом, целью этого исследования была разработка ДНК-аптамеров, которые также связывали бы биомаркеры раковой стволовой поверхности клеток и были бы подходящими для обнаружения подобных стволовых клетках ЦОК в кровообращении. Новизной в этом исследовании является более эффективная разработка связывания аптамера с поверхностью клетки-мишени, основанная также на отборе in silico с помощью новых инструментов биоинформатики, используемых впервые, и предлагает их применение в будущих идентификациях аптамеров.
Материалы и методы
Культура клеток и реагенты
Клеточная линия карциномы легких человека A549 (ATCC® CCL-185 ™, ATCC, Manassas, VA) при пассаже 60 культивировалась в среде DMEM (Millipore Sigma, Burlington, США) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, пока они не достигнут примерно 80% слияния.Клетки промывали для удаления остатков среды, а затем отделяли от бутылок с 2 мМ раствором EDTA (Millipore Sigma, Burlington, MA). Аутентификация клеточной линии была выполнена с использованием протокола аллеля IdentiCell STR и показала 100% совпадение с клетками A549 (IdentiCell, Департамент молекулярной медицины, Орхус, Дания).
Дизайн библиотеки Cell-SELEX
Случайная библиотека (5′-FITC-GCC TGT TGT GAG CCT CCT-N34-CGC TTA TTC TTG TCT CCC-3 ‘), содержащая 34 случайных основания, фланкированных константными областями для связывания праймеров во время реакции ПЦР-амплификации. 15 Прямой праймер представлял собой 5′-BBB-GCC TGT TGT GAG CCT CCT-3 ‘, где BBB указывает на 3 последующие части биотина, в то время как обратный праймер был помечен 6-FAM или изотиоцианатом флуоресцеина (FITC-5’- GGG AGA CAA GAA TAA GCG-3 ‘). Перед первым циклом отбора библиотеку амплифицировали с помощью реакции ПЦР (условия ПЦР, описанные в дополнительном материале), подвергали денатурации, и флуоресцентную одноцепочечную ДНК очищали денатурационным ПААГ. В начале цикла SELEX пул аптамеров в буфере для отбора денатурировали при 95 ° C в течение 10 минут, а затем сразу помещали на лед на 10 минут с последующей 20-минутной инкубацией при комнатной температуре.
Отбор аптамеров
После инкубации клеток с аптамерами применяли методику BRAZIL с центрифугированием смеси клеток и олигонуклеотидов через смесь дибутилфталат: циклогексан (9: 1 [об: об]; d = 1,03 г .ml-1) слой 16 .
Вкратце, клетки со связанными аптамерами собирали из осадка органической фазы и разделяли центрифугированием (13000 g в течение 10 мин (центрифуга Hettich Universal 32R, HETTICH Instruments LP, Беверли, Массачусетс).Осадок, содержащий аптамеры, экстрагировали фенолом / хлороформом (1: 1) для очистки полученной ДНК с последующей ПЦР, как подробно описано выше, и разделением цепей для следующего цикла SELEX. Чтобы выполнить отбор лигандов с более высоким сродством, строгость отбора постепенно увеличивалась в каждом цикле путем добавления 0,3 — 3 мг / мл тРНК для снижения неспецифического связывания и увеличения соотношения молекул ДНК по клеткам (10 6 -10 5 ячеек).
В седьмом цикле был проведен первый отрицательный отбор с клетками крови человека (эритроциты, лейкоциты и тромбоциты в количестве 10 7 клеток), за которым последовал этап положительного отбора против 10 5 клеток A549.Клетки крови отделяли от плазмы путем разделения в градиенте плотности. 17 Стадия отбора против клеток CD90 + A549 была проведена после очистки с сортировкой клеток этой субпопуляции.
Анализ проточной цитометрии связывания аптамера с клетками A549
Эти анализы проводили с живыми клетками A549, которые не обрабатывались фиксирующими агентами согласно Nascimento et al . (2016). 18 Пулы инкубировали в связывающем буфере (1.25 мМ HEPES, 0,27 мМ KCl, 0,14 мМ CaCl ( 2 , 0,06 мМ MgCl2, 7,19 мМ NaCl, 0,9% глюкоза) в течение 10 минут при 95 ° C, а затем сразу же помещают на лед на 10 минут и выдерживают в течение 20 минут при комнатной температуре. . Для взаимодействия между одноцепочечными молекулами ДНК и клетками раствор, содержащий аптамеры, осторожно смешивали с клетками (10 6 клеток / микропробирку) до конечного объема 100 мкл и концентрации аптамеров 200 пМ. Смесь инкубировали 30 мин при комнатной температуре при осторожном встряхивании.Смесь центрифугировали при 200 × g и супернатант отбрасывали. Промывали связывающим буфером, смесь снова центрифугировали и супернатант отбрасывали. Затем добавляли 500 мкл связывающего буфера с последующим анализом проточной цитометрии. Для анализа клеток с двойной меткой антитело против CD90 (1: 1000) добавляли к клеткам вместе с пулами олигонуклеотидов. Для сортировки клеток применяли ту же процедуру и определяли ворота для сбора клеток с двойной меткой для экспрессии CD90 и олигонуклеотидов аптамера.
Пул седьмого цикла содержал аптамеры с усиленным связыванием с субпопуляцией клеток A549, экспрессирующих CD90, что было обнаружено по усиленным сигналам флуоресценции. Поскольку идентифицированная субпопуляция продемонстрировала характеристики стволовых клеток 13 , сортировку клеток использовали для выделения идентифицированной фракции клеток. Была успешно собрана фракция из 2500 клеток, и аптамеры были очищены для амплификации ПЦР (данные не показаны).
Секвенирование
Аптамеры селекционного пула, полученные в каждом цикле, тестировали с помощью рестрикционного анализа (RFLP — Restriction Fragment Length Polymorphism) на наличие консервативных сайтов рестрикции.Были получены различные полосы, представляющие фрагменты ДНК с консервативными сайтами рестрикции, что свидетельствует о селективном обогащении определенных групп олигонуклеотидов во время SELEX (приложение).
Проточная цитометрия клеток, дважды меченных CD90 и аптамерами. (A) Проточную цитометрию проводили для FITC-меченых пулов аптамеров, сравнивая связывание со связыванием клеток A549 пула библиотеки), шестой цикл и пул после цикла отрицательной селекции против клеток крови. Графики плотности показывают, что не было разницы в процентном содержании меченых клеток для каждого из пулов.Наблюдалось смещение популяции на графике плотности и сдвиг положения на гистограммах для клеток, помеченных пулом, которые следовали за отрицательной селекцией против клеток крови, показывая популяцию клеток с повышенной интенсивностью флуоресценции по сравнению с клетками, помеченными как исходная библиотека или пул из 6 циклов -го . (B) Связывание CD90 и сортировка клеток: после регулировки клеточных ворот для немеченых клеток, CD90 +, библиотеки и пула после отрицательного отбора, клетки с двойной меткой, меченные для CD90 / библиотеки и CD90 / пула отрицательной селекции, были в сравнении.Здесь ворота были настроены для сбора наиболее сильно меченых клеток с пулом аптамеров после отрицательного отбора. Чтобы подтвердить профиль изолированной популяции, отсортированные клетки снова анализировали с помощью проточной цитометрии (пост-сортировка). Графики плотности показывают присутствие четко определенной вторичной популяции, которая была дважды помечена, что позволяет предположить, что аптамеры распознавали субпопуляцию CD90, которая была положительной для стволовых клеток в популяции клеток A549.
Последовательности из последних трех циклов были использованы для секвенирования по Сэнгеру и следующему поколению (дополнительный материал).Выбранные последовательности были дополнительно проанализированы с использованием различных биоинформатических подходов.
Биоинформатический анализ
Для обработки выбранных последовательностей использовались три различных процедуры отбора in silico : программное обеспечение CLC Genomics Workbench, сценарий Shell в сочетании с конвейерными программами использования для обработки нуклеотидных последовательностей — MEME 19 , MEGA6 20 и UnaFold 21 и программное обеспечение COMPAS (AptalT GbmH, Planneg, Германия). 22
Мы сравнили молекулярные эволюционные отношения (с программой MEGA6 20 ) и сходство мотивов (с набором MEME 19 ) выбранных четырех лучших кандидатов связывания (A155_18, A452_3, A373_4, A218_12) и уже опубликованного аптамера S6. связывание с клетками A549 (5′-GTG GCC AGT CAC TCA ATT GGG TGT AGG GGT GGG GAT TGT GGG TTG-3 ‘). 11
Проверка выбранных кандидатов
in vitroПриготовление аптамеров
Аптамеры растворяли до конечной концентрации 0,5 мкМ в связывающем буфере, содержащем 25 мМ HEPES (Millipore Sigma) 5,4 мМ KCl, 2,8 мМ CaCl 2 909 3,2 мМ MgCl 2 и 144 мМ NaCl в ddH 2 O, денатурировали при 95 ° C и ренатурировали при комнатной температуре, каждый по 20 мин. Далее клетки инкубировали в течение 20 мин при 25 ° C с 0,5 мкМ раствора аптамера, меченного 6-карбоксифлуоресцеином (6-FAM), в 200 мкл буфера для связывания при осторожном перемешивании.Затем клетки дважды промывали буфером для связывания перед анализом связывания клеткой A459 с аптамером проточной цитометрией. Для определения неспецифического связывания мы использовали олигонуклеотид 6’-FAM со случайной областью из 34 нуклеотидов. Чтобы определить, будет ли связывание между аптамером и клетками-мишенями зависеть от температуры, анализы связывания также проводили при 4 ° C и 37 ° C.
Связывание антитела CD90 с клетками A549
Для определения экспрессии белка CD90 в клетках A549 их инкубировали с антителом против CD90 / Thy1 (PE / Cy5) (ab95698) и для анализов отрицательного контроля с изотипическим контролем мышиного IgG1, каппа моноклональный (PE / Cy5) (ab67435), полученный от AbCam (Кембридж, Великобритания).Клетки отделяли 0,02% EDTA и фильтровали через сито 70 мкм, чтобы избежать дублетов. Клетки — 300 000 на анализ трижды промывали ледяным фосфатно-солевым буфером (PBS) и инкубировали в течение 30 минут при 4 ° C, а затем ресуспендировали в 500 мкл ледяного PBS перед анализом проточной цитометрии.
Подготовка клеток крови для отрицательного контроля
Поскольку целью разработки аптамеров было обнаружение клеток NSCL в крови в виде ЦОК, клетки крови были выделены от здорового донора (мужчина, 40 лет), лизированного буфером, содержащим 150 мМ NH 4 Cl, 10 мМ NaHCO 3 и 0.1 мМ ЭДТА и центрифугировали при 300 × g в течение 5 мин при комнатной температуре. Клетки крови ресуспендировали в связывающем буфере и использовали в качестве мишени для связывания на этапе отрицательной селекции с предварительно элюированной ДНК пула SELEX для разделения аптамеров, обладающих сродством к мишени опухолевых клеток, и для отбрасывания последовательностей, также связывающихся с контрольными клетками крови. Остальные последовательности, специфичные для клеток-мишеней, были дополнительно амплифицированы с помощью ПЦР, чтобы сформировать исходный пул для последнего раунда положительного отбора.
Проточная цитометрия
Мы измерили 30 000 событий на образец, используя прибор проточной цитометрии MACSQuant Analyzer 10 (Miltenyi Biotec GmbH, Бергиш-Гладбах, Германия) или проточный цитометр Attune (Thermo Fisher Scientific Inc., Уолтем, Массачусетс). Для установки ворот мы использовали немаркированные ячейки A459.
Для определения констант равновесной диссоциации (K d ) связывания аптамера с клетками A549 рассчитывались средние выбросы флуоресценции для каждой из семи различных концентраций (50, 100, 300, 500, 800, 1000 и 1200 нМ). Константы диссоциации рассчитывали с использованием неконкурентного связывания с одним сайтом; Регрессию нелинейной кривой выполняли с использованием GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc., Сан-Диего, Калифорния).Сортировку клеток выполняли на оборудовании FACSAria I / II (Becton & Dickinson, Franklin Lakes, NJ).
Результаты
Приготовление пула аптамеров для линии клеток A549 с помощью Cell-SELEX
Здесь мы стремились разработать аптамерные зонды, нацеленные на циркулирующие опухолевые клетки NSCLC, благодаря их потенциальной диагностической, прогностической и прогностической способности. Для разработки аптамеров, специфичных для NSCLC, мы выбрали наиболее часто используемые клетки аденокарциномы легкого человека A549 в качестве мишени для клеточного SELEX.Клетки крови человека были приняты в качестве отрицательного контроля для клеточного SELEX для повышения селективности генерируемых аптамеров к клеткам A459.
В процессе отбора культивированные клетки A549 сначала инкубировали с библиотекой синтетической одноцепочечной ДНК из 70 оснований. Последовательности ДНК, которые связывались с клетками A549, затем элюировали и разделяли с помощью метода BRAZIL, как описано в разделе «Материалы и методы».
Мы сравнили пулы аптамеров из исходной библиотеки, шестого цикла и отрицательной селекции.Что касается процентного содержания меченых клеток для каждого пула, существенной разницы не наблюдалось. Мы наблюдали, что популяция клеток, которые были положительны для пула аптамеров от отрицательного отбора, имела более высокую флуоресценцию, как показано сдвигом вправо на графике плотности и перекрытием гистограмм (). Кроме того, мы выполнили проточную цитометрию с использованием антител для обнаружения CD90 в клетках A549 и наблюдали четко определенную популяцию, которая была положительной по CD90 и аптамерам (). Эту популяцию клеток отсортировывали, связанные аптамеры элюировали и амплифицировали с помощью ПЦР.сообщает об увеличении мечения клеток шестого пула отбора после отрицательного отбора против клеток крови.
Полученный пул аптамеров после отрицательной селекции против клеток крови и сортировки аптамеров, связывающихся с субпопуляцией CD90 + , использовали для дальнейшего секвенирования с целью идентификации кандидатов в аптамеры с консервативными структурными мотивами.
Биоинформатический анализ
Секвенирование пула седьмого цикла с помощью технологии секвенирования следующего поколения Ion Torrent PGM привело к 239 713 считываний, из которых 151 814 считываний были уникальными. In silico Выбор аптамеров из данных NGS был выполнен с использованием трех различных процедур, как описано в дополнительном материале (таблица S1).
Используя программное обеспечение CLC Genomics Workbench, начальный пул из 239 713 считываний был сужен до 16 репрезентативных последовательностей, имеющих наибольшее количество членов последовательности, в диапазоне от 1 080 до 142 копий на репрезентативную последовательность. Их подвергали дальнейшей селекции на основании наличия консервативных мотивов последовательности.Аптамеры A786_1, A574_ 2, A278_8 были отобраны для проверки in vitro , каждый из которых несет уникальный мотив.
Во втором выборе аптамера in silico с использованием доступных онлайн программ обработки нуклеотидных последовательностей сначала отфильтровывали считывания, имеющие неоднозначные основания или неправильную последовательность библиотечных праймеров или ее отсутствие. В оставшемся наборе высококачественных последовательностей 80312 считываний были уникальными, и 81,7% считываний появлялись в наборе только один раз (без копий). Двадцать последовательностей с наибольшим числом копий (прочтений), от 786 до 138 копий, были ранжированы в отношении стабильности вычисленного сворачивания с использованием ΔG (ккал / моль) в качестве меры стабильности и стабильности предполагаемой петли в три самых стабильных вычисленных сворачивания по данным инструмента UnaFold.Аптамеры A155_18, A452_3, A373_4, A218_12 были выбраны для проверки in vitro .
В третьей процедуре выбора in silico , которая была выполнена с использованием программного обеспечения COMPASS, считывания сначала были сгруппированы в 998 семейств с определяющими шаблонами в области пространства петель. Каждая семья была представлена последовательностью (одна с наибольшим количеством повторений), и мы выбрали 21 наиболее частую из них для дальнейшего анализа. Группировка семей в соответствующие кланы зависела от сходства пространств петель — 12 из 21 наиболее часто встречающейся семьи располагались в 10 различных семейных кланах.Дополнительную оценку стабильности структуры применяли с точки зрения температуры плавления в дополнение к ранжированию структуры и аналогично второй процедуре отбора последовательности аптамеров, A155_18 и A452_3 снова были выбраны в качестве лучших кандидатов для связывания.
Отобранные кандидаты в аптамеры дополнительно сравнивали с аптамером S6. Построенная дендрограмма (дополнительный материал,) показывает кластеры кандидатов последовательности аптамера, где аптамер A155_18 и положительный контроль S6 сгруппированы вместе.Среди выбранных кандидатов в аптамер, A155_18 и S6 также являются единственными двумя, имеющими два одинаковых мотива: GGTGG / CG и GCCAGT; согласно предсказанной UnaFold вторичной структуре, мотивы помещаются в сопоставимые структурные последовательности между петлями (дополнительный материал). Возможность перекрестного заражения была исключена, поскольку седьмой пул SELEX был секвенирован перед приобретением положительного контроля S6.
In vitro проверка выбранных кандидатов
Отобранные и помеченные флуоресценцией четыре кандидата, A155_18, A452_3, A373_4, A218_12, вместе с известным связующим S6 и отрицательной контрольной последовательностью (последовательность с неизвестной случайной областью с длиной 34 нуклеотидов и фланкированы известными праймерами) были использованы в тесте связывания in vitro для определения характеристик связывания.Связывание с клетками A549 было продемонстрировано с помощью анализа проточной цитометрии. Все четыре выбранных аптамера () продемонстрировали повышенное связывание с клеточной линией-мишенью по сравнению с невыбранным контролем (CTRL_N34.012) в соответствии с процентным содержанием флуоресцентно меченых клеток, измеренным с помощью проточной цитометрии. Значения Kd всех четырех выбранных аптамеров находятся в наномолярном диапазоне ().
Предсказанные вторичные структуры четырех кандидатов в аптамеры, выбранные для экспериментов in vitro . Вторичные структуры последовательностей позволяли формировать комплементарную обертку вокруг своей мишени.Непарные основания были ответственны за события связывания, когда парные основания Уотсона-Крика обеспечивали стабильность аптамера. Прогнозируемые вторичные структуры были рассчитаны с помощью UnaFold, представленные — это структуры с наименьшим ΔG, т.е. наивысшей стабильностью (энергетические правила: ДНК, температура 24 ° C, 14,4 мМ NaCl, 3,2 мМ MgCl). Константы равновесной диссоциации Kd (нМ) рассчитывали с использованием GraphPad Prism 5 в рамках модели нелинейной подгонки, отношения неконкурентного связывания на одном сайте к флуоресцентной популяции при использованных концентрациях аптамера.Дополнительные сведения см. В дополнительных материалах.
По сравнению с контрольным случайным аптамером, самые высокие скорости специфического связывания 26% с клетками A549 были получены с A155_18. Гибкое связывание аптамеров при различных температурах может расширить спектр их применения. Поскольку отбор проводили при комнатной температуре (25 ° C), мы проводили анализы связывания также при 4 ° C и 37 ° C. Не наблюдалось разницы в связывании аптамера A155_18 (данные не показаны). Это особенно важно, поскольку клиническое применение аптамеров будет осуществляться в физиологических условиях.
Во время селекции клеток аптамеры специфически взаимодействуют с внешними мембранами плазматических клеток клеток-мишеней. В нашей селекции клеток-SELEX линия клеток-мишеней A549 была обогащена экспрессией маркера стволовости, мембраносвязанного белка CD90. Эту субпопуляцию отбирали методом проточной сортировки против CD90 в популяции клеток A549. Последнее указывает на способность аптамера распознавать CD90-положительные клетки, которые могут быть частью циркулирующих клеток, инициирующих опухоль.
Обсуждение
Лечение рака основано на суррогатных маркерах, отражающих прогрессирование опухоли и, после медицинского вмешательства, также ответ на терапию.Другая проблема, которая препятствует разработке новых терапевтических подходов для пациентов с раком легкого, связана с отбором репрезентативных образцов опухоли (легкого). 22 , 23 , 24 Циркулирующие опухолевые клетки (ЦКО) являются многообещающими, поскольку они обеспечивают легкодоступный жидкий образец биопсии для обнаружения микрометастазов в реальном времени. Помимо их перечисления и характеристики, анализ ЦОК предлагает возможность механистических исследований прогрессирования злокачественного рака 7 .Только недавно было обнаружено, что раковые стволовые клетки (CSC), находящиеся в периартериолярных нишах, претерпевают эпителиально-мезенхимальный переход и оттуда проникают в базальную мембрану сосудов, попадая в кровоток и превращаясь в CTC. Кроме того, накоплено большое количество доказательств пластичности РСК и внутриопухолевой гетерогенности, в основном из-за наличия РСК различных подтипов и степеней дифференцировки. Таким образом, было бы практически невозможно нацелить все эти субклоны одним событием.Таким образом, аптамеры, которые мы разработали здесь в качестве биомаркеров ЦОК NSCLC, будут распознавать по крайней мере один маркер стволовых клеток NSLC, и нам удалось разработать аптамер, распознающий субпопуляцию A459 NSCLC, экспрессирующую маркер CSC CD90 / Thy-1 13 . Действительно, после последнего цикла SELEX и сортировки на CD90-положительные клетки мы показали, что около 30% клеток являются положительными по этому маркеру среди популяции клеток A549.
Все предыдущие аптамеры, разработанные для нацеливания на НМРЛ, были отобраны на основе процедуры клеточного SELEX, начиная с библиотеки одноцепочечной ДНК и продолжая 25, 18 и 11 раундов по Zhao et al ., Хименес и др. . и Zamay и др. . 10 , 11 , 12 соответственно. Все отобранные аптамеры связываются со своими мишенями в наномолярном диапазоне Kd. Последовательности, выбранные Zhao et al . 10 , аптамеры S1, S6, S11e и S15, все обладали способностью связываться с клетками A549 и дифференцировать нормальные клетки легких и клетки карциномы. После предварительной обработки клеток-мишеней трипсином связывание выбранного аптамера исчезло, что убедительно указывает на то, что молекулы-мишени этих аптамеров были или были прочно связаны с мембранными белками; однако мы не анализировали их дальше.Мишень для отбора использовали Jimenez et al . 11 был клеточной линией аденокарциномы h33, хотя их лучшие связывающие вещества (аптамеры EJ4 и ADE1) также показали хороший потенциал связывания с клеточной линией A549. Однако они не были селективными по отношению к раку легких, поскольку они также распознали клеточную линию аденокарциномы толстой кишки TOV21G. В качестве возможной причины для этого эти аптамеры распознали более общий маркер клеточной поверхности карциномы человека, все тестируемые клеточные линии имели эпителиальное происхождение.Замай и др. . 12 отобранных ДНК-аптамеров для клеток аденокарциномы легких, полученных из послеоперационных тканей без предварительного знания белковых биомаркеров, заявив, что аптамеры, специфичные к поверхностному белку культивируемых клеток, могут не связываться с опухолевыми клетками в клинических образцах из-за разницы в экспрессии белка между культивируемые и первичные опухолевые клетки. Для Cell-SELEX эти авторы использовали образцы послеоперационной ткани и показали, что выбранные аптамеры не связываются со здоровыми клетками легких и клеточной линией аденокарциномы легкого A549.После успешного отбора они определили восемь биомаркеров-кандидатов, связанных с четырьмя отобранными аптаперами.
Мы выбрали опубликованный аптамер S6, специфичный для связывания клеток A549 с низким значением Kd, в качестве положительного контроля связывания 11 , имеющий высокую селективность в отношении NSCLC без потенциала связывания с SCLC и клетками плоскоклеточной карциномы. Его структура аналогична выбранному нами аптамеру, с 45 нуклеотидами в случайной области, фланкированной константными областями длиной 20 нуклеотидов на обоих сайтах.Как и ожидалось, аптамер S6 показал хороший потенциал связывания с клетками A549 также при использовании нашего протокола. Аптамер S6 был выбран после 25 раундов, тогда как в нашей процедуре SELEX потребовалось только семь раундов. Поэтому мы улучшили процесс отбора, сократив количество раундов отбора, используя подход биоинформатики. Аптамер S6 использовали в качестве контроля не только в отношении нуклеотидной последовательности, но и присутствующих структурных мотивов, поскольку они имеют решающее значение для связывания с выбранной клеткой-мишенью.
Отбор аптамеров in silico был проведен после седьмого цикла SELEX, включая отрицательный отбор против клеток крови, и дал удовлетворительное качество считывания секвенирования. Мы смогли отфильтровать несколько высококачественных считываний с использованием различных фильтров, от длины до базового состава (неоднозначные базы и библиотечные праймеры). Мы ожидали высокой вариабельности уникальных последовательностей, поскольку на клетках A459 имеется множество различных эпитопов (белков, гликопротеинов и т. Д.), Которые потенциально могут быть распознаны аптамерами.Низкое количество копий наиболее частых считываний было неожиданным, так как, например, при разработке другой клетки — SELEX, используя сложные бактериальные споры в качестве мишеней SELEX, мы получили в 10 раз больше копий (COBIK, неопубликованный). Основываясь на критериях, используемых для выбора кандидатов в аптамер, мы предполагаем, что физико-химические свойства вычисленного фолдинга (ΔG, Tm, состав оснований в петле) являются подходящим критерием для оценки олигонуклеотидов, полученных всего за несколько раундов SELEX.
В заключение мы выбрали аптамер A155_18, связывающийся с субпопуляцией линии клеток аденокарциномы легкого A549, экспрессирующий маркеры стволовости, такие как CD90.Эта последовательность аптамера с двумя очень похожими мотивами, указывающими на перекрывающуюся активность с положительным контролем (аптамер S6), обеспечивает доказательство принципа новых подходов. Методологически мы значительно улучшили воспроизводимость методологии Cell-SELEX в сочетании с инструментами биоинформатики. Мы также показали, что использование биоинформатики сокращает количество циклов выбора, что указывает на большой потенциал вычислительной биологии.
Благодарности
Мы благодарим проф.Доктору Тане Чуфер, доктору Ане Корен и профессору доктору Петру Корошецу, Университетская клиника легочных и аллергических заболеваний Гольник, Словения, за ценные обсуждения. Эта работа была поддержана Словенским исследовательским агентством (программа P1-0245 для TLT и стипендия молодых исследователей для MV) и совместным грантом Национального совета по научному и технологическому развитию (CNPq), Бразилия / Министерства высшего образования, науки и Technology (MHEST), Словения, проект № 4
Примечания
Раскрытие информации
О потенциальных конфликтах интересов не сообщалось.
Дополнительные материалы.
Ссылки
1. Shigdar S, Luczo J, Wei MQ, Bell R, Danks A, Liu K.и другие. Аптамерная терапия: волшебная палочка наномедицины 21 века. Open Conf Proc J. 2010; 1: 118–24. DOI: 10,2174 / 221028010100118. [CrossRef] [Google Scholar] 2. Бэрд Г.С. .. Где все аптамеры? Am J Clin Pathol. 2010. 134: 529–31. DOI: 10.1309 / AJCPFU4CG2WGJJKS. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Шмуц Т., Ан И.Ю., Ульрих Х .. Аптамеры нуклеиновых кислот как лиганды с высоким сродством в биотехнологии и биосенсорике. J Pharm Biomed Anal. 2013; 81-82: 210-7. DOI: 10.1016 / j.jpba.2013.03.014.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Ульрих Х., Ренджер С. Открытие аптамеров биомаркеров конкретного заболевания. Цитометрия. 2009; A75: 727–33. DOI: 10.1002 / cyto.a.20766. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Нери А.А., Ренджер С., Ульрих Х .. Распознавание биомаркеров и специфичных для клеток молекулярных сигнатур: аптамеры как агенты захвата. J Sep Sci. 2009; 32: 1523–30. DOI: 10.1002 / jssc.200800695. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ni S, Yao H, Wang L, Lu J, Jiang F, Lu A. et al. Химические модификации аптамеров нуклеиновых кислот для терапевтических целей.Int J Mol Sci. 2017; pii: E1683 DOI: 10.3390 / ijms18081683. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Ульрих Х., Тарнок А. Обнаружение циркулирующих опухолевых клеток проточной цитометрией: достижения и ограничения в качестве прогностических параметров. Цитометрия А. 2014; 85: 201–2. DOI: 10.1002 / cyto.a.22441. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9. Кребс М.Г., Хоу Дж.М., Слоан Р., Ланкашир Л., Прист Л., Нонака Д. и др. Анализ циркулирующих опухолевых клеток у пациентов с немелкоклеточным раком легкого с использованием эпителиальных маркеров-зависимых и -независимых подходов.J Thorac Oncol [Интернет] 2012; 7: 306–15. [PubMed] [Google Scholar] 10. Чжао З., Сюй Л., Ши Х, Тан В., Шангуань Д. Распознавание подтипа немелкоклеточного рака легких с помощью ДНК-аптамеров, выбранных из живых клеток. Аналитик. 2009; 134: 1808–14. DOI: 10.1039 / B- 6K. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Хименес Э., Сефах К., Лопес-Колон Д., Ван Симайс Д., Чен ХВи, Токман М.С. и другие. Получение ДНК-аптамеров аденокарциномы легких для исследований рака. PLoS One. 2012; 7: 1–7. DOI: 10.1371 / journal.pone.0046222. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12.Замай Г.С., Коловская О.С., Замай Т.Н., Глазырин Ю.Е., Крат А.В., Зубкова О.С. и др. Аптамеры, выбранные для послеоперационной аденокарциномы легкого, обнаруживают циркулирующие опухолевые клетки в крови человека. Mol Ther. 2015; 23: 1486–96. DOI: 10.1038 / mt.2015.108. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Ван П., Гао Кью, Суо З., Мунте Э., Сольберг С., Ма Л. и др. Идентификация и характеристика клеток со свойствами раковых стволовых клеток в клеточных линиях первичного рака легкого человека. PLoS One. 2013; 8: e57020. DOI: 10,1371 / журнал.pone.0057020. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] Отказано14. Янь X, Луо Х, Чжоу Х, Чжу Б., Ван И, Биан Х .. Идентификация CD90 как маркера стволовых клеток рака легких в клеточных линиях A549 и h546. Онкол Реп. 2013; 30: 2733–40. DOI: 10.3892 / или.2013.2784. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Дэниэлс Д.А., Чен Х., Хике Б.Дж., Свидерек К.М., Голд Л. .. Аптамер тенасцина-С, идентифицированный с помощью SELEX опухолевых клеток: систематическая эволюция лигандов путем экспоненциального обогащения. Proc Natl Acad Sci U S A.100: 15416–21. DOI: 10.1073 / pnas.2136683100. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 16. Джордано Р.Дж., Кардо-Вила М., Лахденранта Дж., Паскуалини Р., Арап В. Биопэннинг и быстрый анализ селективных интерактивных лигандов. Nat Med. 2001; 7: 1249–53. DOI: 10,1038 / нм1101-1249. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Телез А., Рубинштейн П. Быстрый метод разделения клеток крови. Переливание. 1970; 10: 223–5. DOI: 10.1111 / j.1537-2995.1970.tb00733. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Nascimento IC, Nery AA, Bassaneze V, Krieger JE, Ulrich H.. Применение аптамеров в проточной цитометрии и визуализации. Методы Мол биол. 2016; 1380: 127–34. DOI: 10.1007 / 978-1-4939-3197-2_10. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20. Тамура К., Стечер Г., Петерсон Д., Филипски А., Кумар С. MEGA6: Анализ молекулярной эволюционной генетики, версия 6.0. Mol Biol Evol. 2013; 30: 2725–9. DOI: 10,1093 / molbev / mst197. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Маркхэм Н.Р., Цукер М. .. UNAFold: Программное обеспечение для укладки нуклеиновых кислот и гибридизации. Методы Мол биол.2008; 453: 3–31. DOI: 10.1007 / 978-1-60327-429-6_1. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Бергманс Т., Пасло Ф., Паесманс М., Бондюэль Ю., Кадранель Дж., Тот IC. и другие. Суррогатные маркеры, прогнозирующие общую выживаемость при раке легких: рекомендации ELCWP. Eur Respir J. 2012; 39: 9–28. DOI: 10.1183 / 0
- 36.001 . [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Eberhard DA, Giaccone G, Johnson BE .. Биомаркеры ответа на ингибиторы рецепторов эпидермального фактора роста в рабочей группе немелкоклеточного рака легкого: стандартизация для использования в условиях клинических испытаний.J Clin Oncol. 2008. 26: 983–94. DOI: 10.1200 / JCO.2007.12.9858. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Refroidissement éolien (Température du vent)
Le refroidissement éolien , parfois aussi appelé facteur vent dans le langage populaire, désigne la sensation de froid produite par le vent sur un organisme qui dégage de la chaleur, alors que la température ambientelle de l’ abaisse pas.Поль Сипль и Чарльз Ф. Пассель разработали концепцию фактического переоборудования (en langue déolien, le wind chill ) как раз перед входом в Объединенные государства в Seconde Guerre mondiale lors d’expériences en Antarcériences. Le concept s’est gradient répandu ensuite grâce au service météorologique des États-Unis. Environnement Canada et d’autres services nationaux de météorologie l’utilisent afin de pouvoir quantifier la température perçue, en cas de froid интенсивный, par le corps humain en combinant la vitesse du vent et la température extérieure. Tableau de Calcul de l’indice de refroidissement éolien (° C)
Risques sur la santé selon l’indice de refroidissement (échelle canadienne)
Примечание: les risques de gelures peuvent survenir plus rapidement en cas de vents soutenus supérieurs со скоростью 50 км / ч. Источник: Википедия: Le refroidissement éolien |
10.1 ° C | 17 ° С | 22.1 ° C |
siret, TVA, adresse, bilan gratuit …
28.07.2020Radiation du RCS
Комментарий: Radiation du Registre du Commerce et des Sociétés
Entreprise (s) émettrice (s) de l’annonce Dénomination: 3 ZAMAY : 79 42 Юридическая форма: Société à responsabilité limitée Капитал: 8 200,00 €
Annonce légale publiée dans le Bodacc n ° 20200144 du203 28/06/2020 d’une Предвидение роспуска
Источник:
12208373 LEPUBLICATEUR ЮРИДИЧЕСКОЕ НАЗНАЧЕНИЕ: ZAMAY TRANS.Форму: S.A.R.L. Sociéte en ликвидация. Капитал: 8.200 €. Siège: 66, rue Marcelle, 93500 PANTIN. 799 107 842 RCS Bobigny. Aux termes d’une décision en date 31/12/2019, L’associé unique a décidé la роспуск, ожидаемый de la société à compter du 31/12/2019. M. Djamel GHERMAH, 66, rue Marcelle 93500 Pantin a été nommé liquidateur et lui a conféré les pouvoirs les plus étendus. Le siège de la liquidation est au siège, adresse où doit être посланник по переписке. Залить авис.
Mandataires sociaux: Nomination de M Djamel GUERMAH (Liquidateur Amiable)
Дата выпуска: 31/12/2019
Annonce publiée dans Echos (Les) / Le Publicateur Légal ° 99780 от 16.06.2020
16.06.2020Clôture de la Dissolution 30663
Источник:
12208378 LEPUBLICATEUR LEGAL Наименование: ZAMAY TRANS.Форму: S.A.R.L. sociéte en ликвидация. Капитал: 8.200 €. Siège: 66, rue Marcelle, 93500 PANTIN. 799 107 842 RCS Bobigny. Aux termes d’une décision en date 31/12/2019, L’associé unique a approuvé les comptes de liquidation, donné quitus au liquidateur M. Djamel GUERMAH 66, rue Marcelle, 93500 Pantin et prononcé la clôture de la société . La société sera radiée du RCS du Bobigny. Le liquidateur
Дата выхода: 31/12/2019
Annonce publiée dans Echos (Les) / Le Publicateur Légal — La Vie Judiciaire n ° 99780 du 16.06.2020
23.05.2014Modification du Capital social
Источник:
ZAMAY TRANS Au capital de 2 000,00 € Социальная сеть: 66 rue Marcelle 93500 PANTIN 799 107 842 RCS BOBIGNY L’A.G.E. 10/05/2014 объявлено об открытии столицы сомнительной суммы в размере 6200 евро за номер в размере 8200 евро. Упомяните SERA faite au RCS de BOBIGNY. 2014/03577
Капитал: 8 200,00 €
Дата выплаты: 10.05.2014
Annonce publiée dans Echo d’Ile de France n ° 99638 du 23.05.2014
Où je me tiens: «Je crois que les temps ont changé et que ma communauté a besoin de s’adapter à ce change»
Ибрагим Хамава, бывший шеф-повар Ламидо Замай Кантон, район в регионе Экстрем Север Камеруна.Традиционный шеф-повар 63 и дежа, номинированный на женскую премьеру Лаваль (Повар деревни), и поощрение участия женщин в принятии решений в соответствии с традициями Совета. Si les femmes d’autres платит peuvent faire de bons лидерам, pourquoi ne devraient-ils pas dans sa communauté, il conteste.
Дата: марта 14 мая 2019 г.
Ибрагим Хамава.Фотография: ONU Femmes / Teclaire Same
.Le manque d’éducation reste le plus grand défi qui empêche l’égalité des sexes, car les femmes sans manual, manquent d’auto affirmation et les hommes sans manual Trouvent difficile de changer leur mentalité et d’accepter l’égalité entre les hommes et les femmes.
Le «Club de mari» de Zamay, où je suis président, организовать регулирование объединений сенсибилизации членов сообщества по вопросам сексуальной ориентации полов, сексуального насилия, образования детей и браков. forcés et précoces и т. д.
Après être devenu Lamido [шеф-повар], участвуйте в дополнительных сеансах формирования и сенсибилизации по вопросам, связанным с сексуальным насилием, сексуальным насилием и женским бракосочетанием. организации autres humanitaires организации. Je crois que le monde évolue, et ma communauté — это чейнджер с темпами и адаптерами.
J’ai réalisé que nous avons de bonnes femmes, лидеры dans d’autres pays, alors j’ai décidé de faire la même выбрала в коммуне в достойной Мамах Киагаме с Лаваль (шеф-повар сообщества) де Майо Тсака, l’un des village qui composent le Kanton de Zamay.
Le Lawal été nommé en fonction de sa compétence et de son intégrité morale. Cette Initiative de nommer une femmecom Lawal — это априори по большинству, mais nous sommes toujours противостоит определенному сопротивлению людей, живущих в сообществе. Quand les hommes de son village la contournent et lui apportent leurs plaintes, je les renvoie à elle.
Elle est une bonne dirigeante et a déjà amélioré les choses dans son village и вклад в искоренение преступлений.Je crois que cette décision de nommer Lawal mamah Kiagama va changer la perception des femmes dans notre région, et aussi d’autres domaines. Назначение renforcé la confiance en soi de beaucoup de femmes dans la communauté. Les femmes se sentent maintenant plus à l’aise de s’exprimer et de porter leurs plaintes au Conseil Традиционная. Lawal Kiagama — это ассоциация женщин, помогающих сенсибилизировать и автономно занимающихся женщинами и пропагандой полов.
Je suis en train de nommer trois autres femmes для участников традиционного совета Замая и сторонников процесса принятия решений в сообществе.
Notre communauté a connu beaucoup de changements positifs, tels que la réduction du divorce abusif, des mariages forcés et précoces, et l’élioration de l’éducation des filles. Разумный марш в жанре, созданный для женщин ONU, вносит свой вклад в экономическую автономию женщин в сообществе, предлагая своим женщинам-продавщицам собственное пространство и безопасность для продавцов французской продукции и всех их любимых вещей.