Vk wgb: «Ариант» — крупнейшая группа компаний, объединяющая производственные центры полного цикла винодельческой и мясной продукции.

Что означает WGB? -определения WGB

Вы ищете значения WGB? На следующем изображении вы можете увидеть основные определения WGB. При желании вы также можете загрузить файл изображения для печати или поделиться им со своим другом через Facebook, Twitter, Pinterest, Google и т. Д. Чтобы увидеть все значения WGB, пожалуйста, прокрутите вниз. Полный список определений приведен в таблице ниже в алфавитном порядке.

Основные значения WGB

На следующем изображении представлены наиболее часто используемые значения WGB. Вы можете записать файл изображения в формате PNG для автономного использования или отправить его своим друзьям по электронной почте.Если вы являетесь веб-мастером некоммерческого веб-сайта, пожалуйста, не стесняйтесь публиковать изображение определений WGB на вашем веб-сайте.

Все определения WGB

Как упомянуто выше, вы увидите все значения WGB в следующей таблице. Пожалуйста, знайте, что все определения перечислены в алфавитном порядке.Вы можете щелкнуть ссылки справа, чтобы увидеть подробную информацию о каждом определении, включая определения на английском и вашем местном языке.

Что означает WGB в тексте

В общем, WGB является аббревиатурой или аббревиатурой, которая определяется простым языком. Эта страница иллюстрирует, как WGB используется в обмена сообщениями и чат-форумах, в дополнение к социальным сетям, таким как VK, Instagram, Whatsapp и Snapchat. Из приведенной выше таблицы, вы можете просмотреть все значения WGB: некоторые из них образовательные термины, другие медицинские термины, и даже компьютерные термины. Если вы знаете другое определение WGB, пожалуйста, свяжитесь с нами. Мы включим его во время следующего обновления нашей базы данных. Пожалуйста, имейте в информации, что некоторые из наших сокращений и их определения создаются нашими посетителями. Поэтому ваше предложение о новых аббревиатур приветствуется! В качестве возврата мы перевели аббревиатуру WGB на испанский, французский, китайский, португальский, русский и т.д. Далее можно прокрутить вниз и щелкнуть в меню языка, чтобы найти значения WGB на других 42 языках.

вне конкуренции GECID.com. Страница 1

21-12-2016

Страница 1 Страница 2 Одной страницей

В одном из прошлых обзоров мы рассмотрели бюджетный игровой графический адаптер NVIDIA GeForce GTX 1050, который ориентирован на широкое сообщество любителей киберспортивных дисциплин, MMO- и MOBA-игр. Также он может подойти нетребовательным пользователям, способным пожертвовать визуальным качеством картинки ради прохождения любимой игры. Конкурентом для него является модель AMD Radeon RX 460, доступная в 4-гигабайтном и 2-гигабайтном исполнении, что позволяет AMD реализовать более гибкую ценовую политику.

Данный обзор как раз и посвящен 2-гигабайтной AMD Radeon RX 460 в исполнении компании ASUS. На момент написания средняя стоимость

ASUS DUAL Radeon RX 460 2GB OC (DUAL—RX460-O2G) в отечественных онлайн-магазинах составляла $129, хотя еще в начале осени она держалась на уровне $195. Для сравнения: стоимость 4-гигабайтной ASUS ROG STRIX RX 460 составляет $157, а 2-гигабайтной ASUS Expedition GeForce GTX 1050 – $156. То есть для нетребовательных и стесненных в средствах пользователей именно 2-гигабайтная AMD Radeon RX 460 может стать проводником в столь заманчивый мир игр. Конечно, при условии, что падение производительности по сравнению с 4-гигабайтной версией будет не столь существенным.

Спецификация

Модель	ASUS DUAL Radeon RX 460 2GB OC (DUAL-RX460-O2G)
GPU	AMD Polaris 11 (AMD Baffin)
Микроархитектура	4-е поколение AMD GCN
Техпроцесс, нм	14 (FinFET)
Количество потоковых процессоров	896
Количество текстурных блоков	56
Количество растровых блоков	16
Динамическая тактовая частота GPU, МГц	1224 («Gaming») / 1244 («OC»)
Тип видеопамяти	GDDR5
Объем, ГБ	2
Эффективная частота памяти, МГц	7000
Ширина шины памяти, бит	128
Пропускная способность памяти, ГБ/с	112
Внешние интерфейсы	1 x DVI-D 1 x HDMI 2.0 1 x DisplayPort
Минимальная рекомендованная мощность блока питания, Вт	400
Дополнительный разъем питания PCIe	—
Размеры с официального сайта, мм	204 х 115 х 42
Драйверы	Свежие драйверы можно скачать с сайта компании ASUS или сайта производителя GPU
Сайт производителя	ASUS

Упаковка и комплект поставки

Привычная и достаточно стильная упаковка видеокарты ASUS DUAL Radeon RX 460 2GB OC характеризуется неплохим информационным наполнением, но назвать его полным все же нельзя. На разных сторонах обозначены ключевые особенности дизайна и некоторые технические характеристики, однако частотной формулы GPU и видеопамяти не хватает для полноты знакомства. Хотя для особо любопытных есть QR-код, который ведет на официальную страницу со спецификацией. Особое внимание следует обратить на возможность активации до 30 января 2017 года инвайт-кода игры World of Warships для получения премиумного крейсера «Диана» и 15 дней премиум-доступа.

На одну из боковых сторон вынесены рекомендованные производителем системные требования, которые традиционно подобраны с запасом. В частности, мощность блока питания не должна опускаться ниже 400 Вт, а линия +12В должна выдерживать нагрузку 42 А, что вообще характерно для 500-ваттных источников питания. При этом энергопотребление самого видеоускорителя не превышает 75 Вт.

Комплект поставки включает в себя бумажную документацию и диск с драйверами.

Внешний вид

Видеокарта ASUS DUAL-RX460-O2G обладает снежно-белым дизайном, который гармонично сочетается с некоторыми фирменными материнскими платами. Заявленные размеры корпуса составляют 204 х 115 х 42 (214 х 113 мм согласно собственным измерениям), что обеспечивает широкую совместимость со многими корпусами.

Полностью снять систему охлаждения нам не разрешили, но на фото можно разглядеть 4-фазную подсистему питания под управлением ШИМ-контроллера DIGI+ VRM ASP1206CGQW. Рядом с ним можно увидеть три разъема для прямого измерения ключевых напряжений. Традиционно упоминается об использовании отборных компонентов Super Alloy Power II и автоматизированной технологии производства ASUS AUTO-Extreme Technology. Все это вселяет уверенность в надежность и стабильность работы графического адаптера.

Пластины жесткости на обратной стороне ASUS DUAL Radeon RX 460 2GB OC не оказалось. А на одном из крепежных винтов радиатора присутствует бумажная пломба, повреждение которой ведет к потере гарантии.

Все необходимое питание ASUS DUAL-RX460-O2G получает исключительно посредством слота PCI Express x16, поскольку дополнительный 6-контактный разъем PCIe не установлен (хотя место под него предусмотрено).

В наборе внешних интерфейсов присутствуют следующие порты:

• 1 x DVI-D
• 1 x HDMI 2.0
• 1 x DisplayPort

Максимальное разрешение может достигать 5120 х 2880.

Утилита GPU-Z позволяет узнать производителя микросхем GDDR5-памяти, коим является SK hynix. Общий их объем составляет 2 ГБ, а эффективная частота – 7000 МГц, что при 128-битной шине дает пропускную способность в 112 ГБ/с. Также обратите внимание, что программа корректно определила использование лишь 8 линий интерфейса PCI Express x16. В свою очередь графический процессор AMD Polaris 11 (AMD Baffin) работает в режиме «Gaming» с динамической частотой 1224 МГц.

В утилите ASUS GPU Tweak II имеется еще один профиль с заводским разгоном – «OC». В случае его активации скорость возрастает до 1244 МГц. Напомним, что эталонный показатель динамической частоты составляет 1200 МГц.

Система охлаждения

Система охлаждения видеокарты ASUS DUAL Radeon RX 460 2GB OC использует достаточно простую конструкцию, уместную в доступных и энергоэффективных моделях. Она состоит из алюминиевого радиатора (173 х 80 х 18 мм) и двух осевых 74-мм вентиляторов, закрепленных на пластиковом кожухе. Основание радиатора напрямую контактирует с GPU и накрывает микросхемы памяти, хотя между ними остается небольшая воздушная прослойка. Оптимальным решением с точки зрения эффективности теплоотвода было бы использование термоинтерфейса для передачи тепла от GDDR5-чипов на радиатор. В свою очередь элементы подсистемы питания вообще лишены дополнительного радиатора.

При желании можно отсоединить кожух для удобной очистки кулера от пыли. Это позволило нам взглянуть на маркировку пропеллеров – «FirstD FD7010h22x» (4,2 Вт, 12 В при 0,35 А). Последний символ закрывает рамка, но наверняка это буква «S», указывающая на применение подшипника скольжения – типичный вариант для бюджетных моделей.

Для проверки эффективности работы системы охлаждения использовалась утилита ASUS GPU Tweak II. При автоматическом регулировании скорости вращения лопастей вентиляторов, в режиме максимальной нагрузки, графическое ядро нагрелось до 62°С, а сами пропеллеры работали достаточно тихо при 39% (1496 об/мин) от своей максимальной мощности.

Сразу же напрашивается сравнение с протестированной ранее ASUS ROG STRIX RX 460, которая использует кулер DirectCU II с двумя никелированными медными тепловыми трубками. В аналогичном режиме она смогла удержать температуру GPU на отметке 63°С, но при этом его тактовая частота была выше (1236 против 1115 МГц).

При запуске игры DOOM (2016) в автоматическом режиме работы кулера температура графического процессора не поднималась выше 56°С. Скорость работы пропеллеров достигала 1476 об/мин, то есть никакого существенного шума не было. Любопытно, что именно игра смогла поднять частоту GPU до заявленных 1224 МГц, а вот выполнение синтетического теста проходило при меньшей скорости.

Принудительная установка скорости вращения лопастей на максимум (3340 об/мин) позволила уменьшить температуру GPU до 51°С. Шум при этом превысил средний уровень и перестал быть комфортным.

В аналогичном режиме кулер DirectCU II продемонстрировал схожую эффективность (53°С), но для более высокой частоты графического процессора (1236 против 1091 МГц).

Наконец, при отсутствии нагрузки частоты графического ядра и памяти автоматически снижались, позволяя уменьшить энергопотребление и тепловыделение видеоускорителя в целом. В таком режиме температура GPU не превышала 27°С, а вентиляторы работали при 39% (1482 об/мин) от максимальной мощности. Кулер DirectCU II в аналогичном режиме вообще приостанавливал вентиляторы.

В целом видеокарта ASUS DUAL Radeon RX 460 2GB OC (DUAL-RX460-O2G) работала вполне стабильно. Компания AMD не обозначила максимальную температуру используемого GPU, поэтому сложно сказать, насколько комфортными являются продемонстрированные показатели. Но традиционно критическими считаются температуры выше 90°С, поэтому полученные 56-62°С можно считать весьма достойными. К тому же в автоматическом режиме система охлаждения отличается тихой работой, а на протяжении тестирования не были замечены никакие посторонние звуки в виде высокочастотного писка дросселей. 

Настя Писова ВКонтакте, id27220633

CLIQUE
CLIQUE — это поп-культурное оружие c полным магазином патронов. 24 часа в сутки и 7 дней в неделю мы хищно следим за гениальным, приносим в зубах актуальное и делаем из крутого популярное. 18+

ATL ACIDHOUZE
Правила группы: за оскорбление участников, спам, рекламу сообществ — пожизненная блокировка. Видео для поддержки треков на Telegram-канале: t.me/acidhouze Дискография: (2012) #FCKSWG vk.cc/85D2of (2013) #FCKSWG MMXIII vk.cc/85FNTJ (2014) Кости vk.cc/85D2X1 (2014) Центр Циклона vk.cc/85D385 (2014) ACIDHOUZE vk.cc/877j6u (2015) #FCKSWG × ЗА УПОКОЙ vk.cc/877kcL (2015) #FCKSWG × TRILLOGY vk.cc/85D3P0 (2015) Марабу vk.cc/87wqHm (2016) Карма × Кома vk.cc/85D54H (2017) Лимб vk.cc/85D5dW (2017) Дисторшн vk.cc/7m1YWP (2019) Кривой эфир vk.cc/ab8yxZ (2021) DRUMTAPE (Drum Mix) vk.cc/bX4zwC

Давай лучше дома посмотрим

ARCHITECTS
Sam Carter — Vocals Josh Middleton — Guitars Dan Searle — Drums Alex Dean — Bass Adam Christianson – Guitars UK, Brighton

«Медуза»
Все, что вам нужно от новостей.

BBC Radio 1 / Dance
Добро пожаловать в сообщество посвященное музыкальному формату британской радиостанции BBC Radio 1.

Новые Альбомы
Наш канал в Telegram: t.me/na_repitee

PAVEL DOVGAL | TUSABOY
Pavel Dovgal (Павел Дóвгаль) Tusaboy Участник Red Bull Music Academy Bass Camp 2013 Saint-Petersburg. Участник фестиваля SKIF 2013. Номинант Премии Сергея Курехина (Этно-Механика) 2013 Основатель лейбла – «Monoclockmusic». Креативный директор тату студий SASHATATTOOING STUDIOS Основатель корпорации Saint Unique Inc. Продюсирование : SUNSAY — «V» (2014) Совместные работы с такими артистами как : Blu (Johnson Barnes) , Sunsay, Assai, Mujuice, Robot Koch , Long Arm, Ta-Ku, Graciela Maria, Ruslan Gadzhimuradov, John LaMonica, Synergy Orchestra и др. Жанр : Electronic music, Downtempo, Hip-Hop , Broken Beat, Bass , Techno, Ambient По вопросам сотрудничества: [email protected] Ссылки: https://www.instagram.com/paveldovgal/ Tweets by PAVELDOVGAL

HDB
[club164832393|HDB Restart] В паблике вы можете услышать следующие жанры/субжанры музыки : 2step abstract ambient atmospheric bass dark deep downtempo dnb dubstep experimental electronic hip-hop house idm garage grime juke liquid techno trip-hop wonky etc.

E:\music\
Сеть музыкальных пабликов

BOILER ROOM
Boiler Room — это крупнейшее сообщество поклонников андеграундной музыки. За последние девять лет мы провели передачи из более 100 городов по всему миру, от Стокгольма до Шанхая с регулярными трансляциями из Лондона, Нью-Йорка, Берлина, Москвы, Сиднея, Сан-Паоло, Токио, Пекина и Лос-Анджелеса. В среднем мы проводим около 30-35 новых передач каждый месяц. Boiler Room — это музыкальное телевидение цифровой эпохи.

#deeper
for reference only

7t-wgb / 7twgb фото авиации на JetPhotos

Если вы ищете фотографии конкретного типа самолета, воспользуйтесь этим меню.
Обратите внимание, что из-за нехватки места это меню включает только некоторые из наиболее востребованных самолетов в нашей базе данных. Если самолет, который вы ищете, отсутствует в этом списке, используйте поле «Ключевые слова» ниже в меню поиска.

Некоторые пункты меню включают общую модель самолета, а также более конкретные варианты этого авиалайнера.Эти варианты обозначаются знаком — перед названием самолета.

Например, если выбрать «Boeing 747», отобразятся результаты со всеми самолетами Boeing 747 в нашей базе данных, а при выборе «- Boeing 747-200» будут показаны все варианты Boeing 747-200 в нашей базе данных (Boeing 747-200, Boeing 747- 212B, Boeing 747-283F и др.)

Если вы ищете фотографии конкретной авиакомпании, воспользуйтесь этим меню.

Обратите внимание, что из-за нехватки места в это меню включены только авиакомпании, 10 или более фотографий которых есть в нашей базе данных.Если искомой авиакомпании нет в этом списке, используйте поле «Ключевые слова» ниже в меню поиска.

Авиакомпании перечислены в алфавитном порядке.

Если вы ищете фотографии, сделанные в определенной стране или в конкретном аэропорту, используйте это меню.

Все страны, представленные в нашей базе данных, включены в это меню выбора, которое автоматически обновляется по мере роста базы данных.Прежде чем этот аэропорт будет добавлен в этот список, в базе данных должно быть не менее 20 фотографий из определенного аэропорта.

Используйте эту опцию, чтобы включить в поиск только фотографии, сделанные определенным фотографом.

Это раскрывающееся меню, в дополнение к каждому фотографу, доступному в качестве ограничителя поиска, также показывает количество фотографий, находящихся в настоящее время в базе данных для каждого конкретного фотографа, заключенное в скобки.Например, вариант:
— Пол Джонс [550]
.. означает, что в настоящее время в базе данных содержится 550 фотографий, сделанных Полом Джонсом.

Примечание. Общее количество фотографий, заключенных в скобки, обновляется четыре (4) раза в час и может быть немного неточным.

Фотографы должны иметь 100 или более фотографий в базе данных, прежде чем их имя будет включено в это меню выбора.
Выбор «Все фотографы» является выбором по умолчанию для этого параметра.

Если вы ищете определенную категорию фотографий, используйте это меню.

Вы можете выбрать отображение фотографий только из определенных категорий, таких как «Особые схемы окраски», «Фотографии летной палубы» и т. Д. В этот список постоянно добавляются новые категории.

Поле «Ключевые слова», пожалуй, самое полезное поле в нашей поисковой системе.
Используя это поле, вы можете искать любое слово, термин или их комбинации в нашей базе данных.
Каждое поле с фотографиями охвачено программой поиска по ключевым словам.

Поле «Ключевые слова» идеально подходит для поиска такой специфики, как регистрация самолетов, имена фотографов, названия конкретных аэропортов / городов, определенные схемы окраски (например, «Wunala Dreaming») и т. Д.
Чтобы использовать поле «Ключевые слова», начните с выбора поля поиска Keyworld. . Вы можете выбрать либо конкретное поле базы данных (авиакомпания, самолет и т. Д.), Либо сопоставить ключевое слово со всеми полями базы данных.

Затем выберите ограничитель ключевых слов. Вы можете выбрать один из трех вариантов:
— это точно
— начинается с
— содержит
. Выберите соответствующий ограничитель для вашего поиска, затем введите ключевое слово (а), которые вы хотите найти, в поле справа.

В поле поиска по ключевым словам регистр не учитывается.

Используйте эту опцию, чтобы включить в поиск только фотографии, сделанные в определенном году.

В этом раскрывающемся меню, помимо каждого года, доступного в качестве ограничителя поиска, также отображается количество фотографий в базе данных для каждого конкретного года, заключенное в скобки. Например, вариант:
— 2003 [55000]
.. означает, что в настоящее время в базе данных содержится 55 000 фотографий, сделанных в 2003 году.
* Примечание. Общее количество фотографий, заключенных в скобки, обновляется четыре (4) раза в час и может быть немного неточным.

Кроме того, в этом меню доступны диапазоны декад (1990–1999 и т. Д.). При выборе диапазона десятилетий будут отображаться все фотографии, соответствующие другим критериям поиска, из выбранного десятилетия.
Выбор «Все годы» является выбором по умолчанию для этой опции.

safa journal

dI d_v_ u

5Ou u_U U) w? U_ UEM jC oKF du? W R WM b dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififfifififififififififififififififififififfififififififififififififififififififififififififfifififfifififififififififififififififififififfifififfifif часные WGB WOuLF UR * WOK) УУЛ ВбКу_ пК УМ? U 5 WIUD * jC? OKF du w R W? M b dfififififififififififififififififififififififififi dOQ Uu W WGB WOuLF UR * WOK; УУЛ WbK 5 DZB Фос WOL

дБ Вт V `интерфейс д? л SUJ WKD Н OKF д? л ш R _ дю с dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi UA

WOKb Вт? НУ) 5dUM * ZU? д UE Jc OKF? dL w R? _ Дю с dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi 5 5OUL SBD б UUfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi W WLJ, U UA Wd `UH WLzU

Bf fififififififififi UG wbMN бу * U WOU DŮM Н OKF ди ш R Bf DS DWF {BU * U WOK Wou 5 DŮM H нормально?? Р ди ш R B? F DS dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi Zd

дю WOU УЛ WFL WM б

мкл б дю Wou WuNLK Wld BZD WH

дО бу * U ВОК WOU 5dUM Н OKF ди ш R BF DS dfifififififififififififif ifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WOduUJO

WOKb fififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi UBU WOL ок

WOU * fifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi дб WOLfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififif ififififififififififififififififififififififififi дБ Wou WOLfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi Вок WoZ WOLfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi V_ Wb сек 5ii WOLfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi Wou Wb сек 5ii WOL

fifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififif ifififififififi ВКБ WoZ WOLwU) УЛ термометр ультрафильтрация

fififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi U BMN WOLfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi `U 5bMN WOL

Wod 5bMN б U * U WO? К WOU 5dUM Н OKF их? ж R Wod D S dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WO WOJLK WUI Bnf * U 55bMN б U * U WO? К WOU 5dUM H OKF дю? ж R Wod D S dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WO WOJLK WUI Bnf * U sbU5KK б? u * U WOK WOU? 5dUM H oKF? du w R WOd? D S dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WO WOJLK WUI Bnf * U

ДЕЛАТЬ B U * U ВОК WOU 5dUM? Н OKF ди ш R W? Od д ы dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WO WOJLK WUI Bnf * U WOduUJO

Qim у Fk гр? У ВК ВУБ * У? oKF dL? w R qIM WO? U * ds dUHdF U9 OIM WIKF * U w WR * tK `ds wu * WU Wdfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififif-i-WOu WU-wu * wKLF s-ub-ds-WBK * rus-WU-WU * dL w? R WUIF RA Wb? D s dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififые WOJK * bIH W w nM s 5O u

rOd w? M R WUIF RA Wb? д ы dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WUIF WOJK * Vd W W Nm сек 5O ¯u

qOGA Wmn * SUJ ш у стержневых Wmn U H OKF дл ш R qOGA Wmn * SUJ д ы dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi qOGA Wmn * SUJ у WUH wzUB Wd NMB SB U * U WOK? dUM H oKF dL? ш R qOGA Wmn * с? мкДжем DS dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi SBU 5bMN

и- стержневого Wm? НУХА OKF d? L ш R qOGA Wmn * с? мкДж DS dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi дБ VU Wd нм сек 5Ou

и- стержневого Wm? НУХА OKF d? L ш R qOGA Wmn * с? мкДж DS dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi VJ Wd нм сек 5Ou

и- стержневых Wm? НУХА OKF d? L ш R qOGA Wmn * s? мкДж DS dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififif ifififififififififififififififififififififififififififififififififififififi s Wd nM s 5Ou

WH du WOu WuNLK wLd bzd b

WOuLF WB cU b dUM? H oKF du w R? WUF ROKF WOULF? WB д s dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififличные WbOB w 5O000 u2000 u2000? aU qO? Q oKF? дю ш? R WOuL? F WB d? с dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi Сю Qu uKLF WOuLF ВБК `U WUOsbU б DŮM H OKF ди ш R WUF rOKF WOuLF ВБ д ы ш dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WbOB 5OFU 5OzUHAsbd б U * U WOK? DŮM Н OKF дл ш R WO? УНЧ WB DS dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi 5 5OULfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WOuLF ВБК d2 Wd rNOd Lī подкожно и- WLzU

WUF rOKF Vk УБК УУ Ub UE Jc OKF дл ш R WUF rOKF DS dfififififififi фу DBk VK_ Bnf * Ubm ш WOB U ж * WBB UOKF УБК WOMu РАС

U fififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi `UC о IuH OKF дл ж RU DSD

WUI 5ULF 5bMN бу * U WOU dŮM Н OKF дл, ш R WUI DS dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififif ififififififififififififififi дК WMU Bnf * U

УУ

и * fifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WU WUI U BMB u_ Wu *

сла — реальность методы непонятом для высококачественного methylome масштабе исследования ассоциации

РЕЗЮМЕ

Большинства methylome ширины ассоциативные исследования (MWAS) были выполнены с использованием коммерчески доступных технологий на основе массивов, таких как массивы Infinium Human Methylation 450K и Infinium MethylationEPIC (Illumina).Хотя эти массивы предлагают удобную и относительно надежную оценку исследуемых сайтов, они позволяют исследовать только 2-4% всех сайтов CpG в геноме человека. Секвенирование метилсвязывающего домена (MBD-seq) является альтернативным подходом для MWAS, который обеспечивает почти полное покрытие метилома при тех же затратах, что и технологии на основе массивов. Однако, несмотря на публикацию множества положительных оценок, использование MBD-seq для MWAS часто подвергается резкой критике. Здесь мы обсуждаем ключевые особенности метода и развенчиваем заблуждения с помощью эмпирических данных.Мы пришли к выводу, что MBD-seq представляет собой отличный подход для крупномасштабных MWAS и что более широкое использование, вероятно, приведет к большему количеству открытий, расширению биологических знаний и ускорению клинического перевода результатов исследований в области метиломов.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Эпигенетика, метилирование ДНК, секвенирование метилсвязывающих доменов, MBD-seq, исследование ассоциации в масштабе всего метилома (MWAS), исследование ассоциации в масштабе всего эпигенома (EWAS), программное обеспечение RaMWAS

Введение

Бисульфитное секвенирование всего генома (WGB-seq), где после превращения бисульфита весь геном секвенируется для оценки статуса метилирования каждого сайта метилирования, часто считается «золотым стандартом» в исследованиях метилирования ДНК.Поскольку WGB-seq остается слишком дорогостоящим для крупномасштабных исследовательских проектов, большинство исследований ассоциаций на основе метиломов (MWAS) было выполнено с использованием коммерчески доступных технологий на основе массивов, таких как Infinium Human Methylation 450 K и Infinium MethylationEPIC (Illumina). это анализирует сайты CpG 450 К и 850 К соответственно. Эти технологии массивов также полагаются на бисульфитную конверсию ДНК, но вместо секвенирования всего генома они используют заранее разработанные зонды для выбранных сайтов метилирования.Хотя эти массивы предлагают удобную и относительно надежную оценку исследуемых сайтов, они позволяют исследовать только 2-4% всех сайтов CpG в геноме человека.

Секвенирование метил-связывающего домена (MBD-seq) — это альтернативный подход для MWAS (см. Схематический обзор ^{, рис. 1,} ), который обеспечивает почти полный охват метилома CpG при тех же затратах, что и технологии на основе массивов [ ¹ — ³ ]. Однако, несмотря на это весьма желательное свойство, MBD-seq часто подвергается резкой критике.Поскольку выбор хорошего анализа является ключом к успешному MWAS, здесь мы обсуждаем ключевые особенности, включая ограничения, MBD-seq и развенчиваем частые заблуждения, используя эмпирические данные.

Обзор рабочего процесса MBD-seq.

Шаг 1) Геномная ДНК произвольно фрагментируется с помощью ультразвуковой обработки. Этап 2) Метилированные фрагменты захватываются белком с высоким сродством к двухцепочечной ДНК, несущей метилированные CpG. Неметилированные фрагменты ДНК вымываются. Этап 3) Элюируется захваченная часть метилома.Этап 4) Фракция, обогащенная метилированием (элюент), используется для создания библиотек секвенирования со штрих-кодом. Шаг 5) Библиотеки со штрих-кодами объединяются с одинаковой молярностью. 6) Пул библиотеки секвенируется и выравнивается по эталонному геному. Шаг 7) Выровненные считывания анализируются с помощью подходящего программного обеспечения, такого как RaMWAS, которое было специально разработано для крупномасштабных исследований ассоциации метиома.

Результаты и обсуждение

MBD-seq требует тщательно оптимизированного протокола — ИСТИНА

Часть негативного восприятия MBD-seq могла возникнуть из-за использования недостаточно оптимизированных лабораторно-технических протоколов, которые, вероятно, привели к неэффективному обогащению, что, в свою очередь, приводит к плохому охвату CpG.Доступно несколько коммерчески доступных наборов для обогащения метилсвязывающего домена, которые в основном различаются белками, используемыми для обогащения. Благодаря своей высокой аффинности и специфичности к метилированным CpG на двухцепочечной ДНК, белок человеческого метил-связывающего домена 2 (MBD2) [ ⁴ ] оказался эффективным для надежного захвата метилирования с минимальным фоновым шумом [ ¹ ]. Используя компоненты набора MethylMiner ™ (Invitrogen), в котором используется белок MBD2, мы дополнительно тщательно оптимизировали лабораторно-технический протокол [ ² , ⁵ ], в результате чего были получены надежные и высококачественные данные о метилировании, которые могут быть получены с помощью очень небольшие количества геномной ДНК в качестве исходного материала [ ⁵ ].В этом оптимизированном протоколе уменьшение количества вводимой геномной ДНК до 15 нг не привело к значительному снижению качества данных метилирования. При количествах исходного материала в диапазоне 5–10 нг наблюдалась некоторая потеря качества [ ⁵ ]. Это можно сравнить с 250 нг — 1 мкг геномной ДНК, что обычно является рекомендуемым количеством исходного материала для широко используемых протоколов профилирования метилирования на основе массивов. Оптимизированный протокол MBD-seq может выполняться вручную или на стандартных роботизированных платформах для работы с жидкостями, что обеспечивает гибкую масштабируемость для MWAS.

Оптимизированный протокол включает несколько важных адаптаций [ ² , ⁵ ]. Например, для обеспечения последовательного и эффективного обогащения важно поддерживать соотношение ДНК и гранул, захватывающих MBD, на оптимальном уровне (0,02 мкл приготовленных гранул MBD-seq на 1 нг введенной ДНК, что соответствует 7 нг белка на нг ДНК) для всех исследованных образцов [ ⁵ ]. Эти точные настройки в сочетании с промывками высокой жесткости обеспечивают эффективное обогащение метилированной фракции генома, которая может использоваться для последующего высокопроизводительного секвенирования.Полную информацию об оптимизированном протоколе MBD-seq можно получить по адресу https://bpm.pharmacy.vcu.edu/resources/.

MBD-seq эквивалентен MeDIP-seq — FALSE

Другая вероятная причина негативного восприятия может заключаться в том, что MBD-seq часто путают с иммунопреципитацией метилированной ДНК с последующим секвенированием (MeDIP-seq) [ ⁶ ]. Хотя в рабочем процессе есть общие черты, MBD-seq и MeDIP-seq заметно отличаются друг от друга. MeDIP-seq использует аффинный захват на основе антител, который не специфичен для метилирования CpG и требует одноцепочечной ДНК.Предыдущие отчеты показывают, что MeDIP-seq страдает более низкой производительностью и большим смещением последовательности, чем MBD-seq [ ² , ⁷ — ¹⁰ ]. Это наблюдаемое смещение указывает на внутренние свойства антител против метилцитозина, используемых в MeDIP-seq для его дефицита.

MBD-seq сопоставима по стоимости с обычно используемыми матрицами метилирования — ИСТИНА

Фракция, обогащенная метилированием, может быть секвенирована с любой конфигурацией, но короткие односторонние чтения предпочтительны для оптимального разрешения и снижения затрат.Для правильной оценки степени метилирования в любом конкретном локусе критически важно знать распределение размеров фрагментов для каждого образца. При считывании с одного конца распределение фрагментов по размеру не наблюдается, но может быть эмпирически оценено из считываний, охватывающих изолированные CpG (т.е. CpGs далеко от других CpG), как подробно описано ранее [ ¹¹ , ¹² ]. Короче говоря, для каждого изолированного локуса CpG эмпирическая оценка использует информацию о расстояниях между каждым началом чтения и положениями изолированных CpG для оценки длины фрагмента.Оценивая это расстояние для всех считываний, расположенных в непосредственной близости от изолированных CpG, можно оценить распределение длин фрагментов. Таким образом, использование коротких односторонних чтений является наиболее экономичным способом секвенирования фракции, обогащенной метилированием. При такой конфигурации стоимость реагента MBD-seq (при стандартной настройке 60 миллионов односторонних чтений по 75 п.н.) сопоставима со стоимостью обычно используемых массивов метилирования и приводит к очень большой экономии затрат по сравнению с полногеномным. бисульфитное секвенирование (для MBD-seq потребуется только последовательность 5.2% оснований секвенировали с помощью бисульфитного секвенирования всего генома при стандартном 30-кратном охвате).

Разрешение MBD-seq низкое — ЛОЖЬ

В то время как бисульфитные анализы дают оценки метилирования (в процентах) для каждого отдельного сайта, методы обогащения позволяют количественно определить общее количество метилирования (сумма) в локусе. Эта количественная мера метилирования называется CpG-оценкой (ранее также называвшейся охватом CpG) [ ¹¹ , ¹² ]. Размер локусов равен или меньше размера захваченного фрагмента.Чем больше чтений присутствует в локусе, тем большее разрешение может быть получено. В худшем случае, когда два CpG находятся на противоположном конце фрагмента, и только один фрагмент покрывает область, размер детектируемого локуса будет равен размеру фрагмента (~ 150 п.н.). Действительно, это отсутствие разрешения единой базы может снизить разрешение ассоциативных сигналов. Однако разрешение MBD-seq по-прежнему остается высоким в масштабе генома и обычно обеспечивает достаточное разрешение для MWAS.

Следует отметить, что даже несмотря на то, что WGB-seq в принципе обеспечивает разрешение по одному основанию, статус метилирования соседних CpGs имеет тенденцию быть сильно коррелированным [ ¹³ ]. Это особенно верно в регионах с множеством CpG. Используя данные WGB-seq [ ² ], ^{Рисунок 2} отображает наблюдаемые корреляции между соседними CpG как функцию их расстояния друг от друга. На рисунке показано, что корреляции между CpG, расположенными в пределах интервала размера фрагмента, как обнаружено с помощью MBD-seq, часто сильно коррелированы.Например, парная корреляция между CpG, которые находятся на расстоянии 150 п.н. и имеют 9 других CpG между ними (отставание 10 в ^{, рис. 2,} ), в среднем составляет 0,92. Следовательно, подобно неравновесию по сцеплению в исследованиях SNP, которое создает биологический барьер для точного картирования, часто может быть невозможно значительно улучшить разрешение MBD-seq даже с использованием бисульфитных методов. Для непосредственно соседних CpG (лаг 1), которые находятся на расстоянии 150 п.н. друг от друга, средняя парная корреляция выше 0,45. Однако в этих ситуациях редкость CpG, включающая только один или несколько CpG на фрагмент, по-прежнему позволяет точно определить конкретные CpG и, таким образом, на разрешение MBD-seq существенно не влияет.

Корреляция между расположенными рядом CpG.

Используя данные WGB-seq [ ² ], расчетная корреляция (ось y) наносится на график в зависимости от расстояния (bp) между CpG. Типичный диапазон разрешения (150 бит / с) MBD-seq указан горизонтальной полосой в верхней части графика. Попарная корреляция между соседними CpG с лагом 10 (корреляция между CpG 1 и CpG 11; CpG 2 и CpG 12 и т. Д.) И лагом 1 (корреляция между CpG 1 и CpG 2; CpG 2 и CpG 3 и т. Д.)) представлена ​​штриховой и сплошной линиями соответственно.

Тем не менее, если в конечном итоге желательно одно базовое разрешение, можно использовать недорогие целевые методы на основе бисульфита для отслеживания основных результатов MBD-seq. Такой рекомендуемый дизайн исследования приводит к скринингу практически всех CpG в метиломе, где впоследствии достигается одноосновное разрешение для наиболее интересных локусов.

Только метилирование CpG может быть обнаружено с помощью MBD-seq — ИСТИНА

MBD-seq специфичен для метилирования CpG (mCG).Таким образом, он не будет идентифицировать метилирование вне контекста последовательности CG (mCH) или гидроксиметилирования (hmC). Для большинства тканей человека, где> 99,9% всего метилирования составляет mCG [ ¹⁴ ], отсутствие обнаружения других типов метилирования не вызывает беспокойства. Однако мозг человека содержит значительные уровни как mCH, так и hmC [ ¹⁵ ] в дополнение к mCG. Чтобы изучить эти типы метилирования в контексте исследования ассоциации, MBD-seq может быть дополнен подходами обогащения для mCH (MBD-DIP [ ² ]) и hmC (hMe-Seal [ ¹⁶ ]).

Исследуется только небольшая часть CpG в геноме — ЛОЖЬ

Заблуждения, предполагающие, что только небольшая часть CpG в геноме анализируется с помощью MBD-seq, вероятно, возникла в результате исследований с использованием неоптимальных протоколов обогащения, которые действительно обычно смещены в сторону относительно небольшой части генома, где отдельные сайты метилирования сильно метилированы и плотность CpG высока. Однако при использовании должным образом оптимизированного протокола MBD-seq [ ² , ⁵ ] опрашиваются почти все CpG в метиломе, даже включая значительную часть метилированных изолированных CpG (CpG, расположенных на расстоянии более одного фрагмента от любого другого). CpG), которые составляют 2.4% CpG в геноме и являются наиболее сложными для обнаружения CpG методами обогащения. Более конкретно, после исключения сайтов, расположенных в регионах, которые сложно выровнять [ ¹⁷ ], 27,551,768 аутосомных CpG оценивают с помощью оптимизированного протокола MBD-seq. Используя данные из дубликатов WGB-seq в качестве эталона, доля метилированных сайтов, правильно определенных как метилированные с помощью MBD-seq (т.е. относительная чувствительность MBD-seq), составила 0,94 со сравнимыми уровнями специфичности (доля неметилированных участков). сайты обнаружены правильно) [ ² ].Другими словами, 94% всех сайтов, которые продемонстрировали доказательства метилирования с помощью WGB-seq, также были метилированы с помощью MBD-seq.

Количество сайтов, проанализированных с помощью MBD-seq, резко контрастирует с ~ 850 000 сайтов, проанализированных с помощью массива Infinium MethylationEPIC — последней версии массива метилирования Illumina. Даже если предположить, что каждый зонд в этом массиве выявляет метилированные сайты с идеальной точностью, максимальная чувствительность массива относительно WGB-seq составляет около 0.03, это означает, что только ~ 3% сайтов метилирования, наблюдаемых с помощью WGB-seq, возможно, могут быть изучены с помощью современных подходов на основе массивов.

MBD-seq не предоставляет количественной информации — ЛОЖЬ

Поскольку количество чтений, покрывающих CpG, пропорционально уровню метилирования, происходящего в его локусе, баллы CpG [ ¹¹ , ¹² ] оцениваются на основе MBD-seq количественные. Однако MBD-seq не дает абсолютных уровней метилирования (например, мы не можем сказать, что конкретный локус метилирован на 80%).Несмотря на то, что были разработаны методы оценки абсолютных уровней метилирования на основе данных обогащения [ ¹⁸ , ¹⁹ ], мы не рекомендуем предпринимать попытки такой нормализации для MWAS. Поскольку статистика теста MWAS основана на стандартизированных различиях между группами в одном и том же локусе, относительные измерения статуса метилирования приводят к тем же результатам, что и анализ абсолютных уровней метилирования. Таким образом, для ассоциативного тестирования нормализация не требуется.

Чтобы проиллюстрировать количественное свойство MBD-seq, мы коррелировали его с общими количествами метилирования в локусах размером с фрагмент, оцененными по данным WGB-seq в человеческом мозге [ ² ].Учитывая все CpG в геноме, мы оценили, что корреляция между данными MBD-seq и WGB-seq колеблется от 0,73 до 0,86 (средняя корреляция 0,79, SD = 0,045) [ ² , ⁵ ]. Как уже упоминалось, в то время как MBD-seq анализирует только mCG, оценки WGB-seq искажены hmC, который обнаруживается в> 15% модифицированных CpG в мозге человека [ ³ , ¹⁵ ]. Таким образом, сообщаемые корреляции были рассчитаны после вычитания количества hmC, обнаруженного с помощью бисульфитного секвенирования с помощью TET, из WGB-seq [ ⁵ ].Таким образом, оценочное согласие является надежной, но консервативной нижней границей корреляции.

Покрытие последовательностей должно соответствовать стандартам бисульфитного секвенирования — ЛОЖЬ

В исследованиях WGB-seq, которые оценивают процент метилирования в отдельных CpG, количество считываний, покрывающих каждую базу, и частота ошибок в вызовах оснований являются критическими детерминантами точность оценок метилирования. Например, если основание секвенировано с 10-кратным охватом в WGB-seq, его уровень метилирования можно оценить с шагом 10%, поскольку статус метилирования в CpG является бинарным для любой данной молекулы ДНК.

Однако при секвенировании на основе обогащения охват сам по себе является измерением метилирования, где точность определяется общим числом секвенированных фрагментов. Чем выше уровень метилирования в данном сайте (т. Е. Процент клеток, в которых метилирован сайт), тем больше вероятность, что он будет захвачен с помощью раскрывающегося списка белков MBD. Таким образом, после стандартизации общего числа прочтений, которое является произвольным фактором, контролируемым исследователем, люди с более высокими уровнями метилирования в конкретном локусе получат больше прочтений, чем люди с низкими уровнями метилирования в том же локусе.С другой стороны, сайты CpG, которые неметилированы во всех клетках, не захватываются во время раскрытия и, следовательно, не представлены в библиотеке секвенирования. Таким образом, ожидается отсутствие покрытия для этих неметилированных CpG, и это не является следствием плохой производительности секвенирования.

Для этого подхода к различению метилированных локусов и неметилированных локусов критически важно, чтобы фрагменты с метилированными сайтами удалялись вниз, а фрагменты без метилированных сайтов — нет.Таким образом, вместо среднего числа чтений, охватывающих CpG, критическим параметром контроля качества является эффективность обогащения [ ¹² ]. Эффективность обогащения может быть измерена отношением среднего балла в местах, которые не могут быть метилированы, потому что они не содержат CpGs (так называемые nonCpGs), и средним охватом в CpGs [ ¹¹ ].

Например, в недавнем крупномасштабном исследовании образцов крови 1132 человек [ ²⁰ ] мы получили среднее значение 59.4 миллиона (SD = 11,2 миллиона) считываний на выборку. Это привело к среднему соотношению баллов без CpG к CpG [ ¹² ] 0,010 (SD = 0,005). Низкое соотношение показывает, что средний сигнал CpG высокий, а уровень фонового шума не CpG исключительно низкий, что позволяет обнаруживать различные метилированные области. Обратите внимание, что, поскольку не все CpG метилированы, это соотношение является недооценкой эффективности обогащения.

MBD-seq и WGB-seq предоставляют сопоставимую информацию о метиломе — TRUE

MBD-seq и WGB-seq предоставляют очень сопоставимую информацию о метиломе.Чтобы проиллюстрировать это, мы используем данные о метилировании отсортированных нейронов и глии, выделенных из человеческого мозга [ ² ] . ^Фиг.3. визуализирует различия в метилировании, обнаруженные с помощью WGB-seq, MBD-seq и MeDIP-seq между двумя типами клеток по длине всей хромосомы ( ^{Рисунок 3 (a} )). Результаты показывают, что профили в целом похожи на разных платформах. Однако устойчивые области специфического дифференциального метилирования клеточного типа более точно выявлялись с помощью MBD-seq по сравнению с MeDIP-seq (^{, рис. 3 (b} )). ^{Рисунок 3 (b} ) также показывает расположение зондов из часто используемого массива метилирования HM450K Illumina, который анализирует ~ 450 000 CpG. Наличие зондов матрицы в этих критически важных с биологической точки зрения областях очень мало.

MBD-seq и WGB-seq обеспечивают сопоставимые профили метилома.

Разница (Δ) в метилировании между нейронами и глией вдоль хромосомы 17. Метилирование анализировали в отсортированных нейронах и глии из образца человеческого мозга с помощью WGB-seq, MBD-seq и MeDIP-seq.Положительные значения указывают на более высокое метилирование нейронов. (а) Хромосомный след различий между нейронами и глией в метилировании вдоль chr17. Для облегчения визуализации построено простое скользящее среднее значение Δ-метилирования размером 10 т.п.н. Выделенная область указывает расположение увеличенной области, отображаемой на нижней панели. (b) Увеличенная область вдоль chr17: 77 090 000–77 096 500 (hg19), демонстрирующая очаговое Δ-метилирование между нейронами-глией. Выделенная область указывает местоположение специфичного для клеточного типа дифференциального метилирования, которое обнаруживается в WGB-seq и MBD-seq, но не в MeDIP-seq.Расположение сайтов Infinium HumanMethylation 450K также показано для иллюстрации.

Для другой иллюстрации мы использовали данные MBD-seq и данные WGB-seq из основной ткани мозга из одного и того же образца ДНК [ ² ] и показали, что два типа данных имеют очень похожие профили метилирования по геномным характеристикам. После классификации локусов как метилированных по сравнению с неметилированными, мы рассчитали отношения шансов для изучения того, метилируются ли сайты, расположенные в различных геномных признаках, с большей вероятностью по сравнению с сайтами, не входящими в этот признак.Результаты, представленные на рис. 4 , показали, что профили метилирования были очень похожи для обоих методов по множеству биологических характеристик. В целом, эти результаты свидетельствуют о том, что обе технологии собирают сопоставимую информацию о метиломе.

Профили обогащения генома по биологическим характеристикам сопоставимы для MBD-seq и WGB-seq.

Профили метилирования по геномным особенностям. Красная линия представляет профили обогащения WGB-seq, а синяя линия — MBD-seq.Ось абсцисс показывает протестированный геномный признак, а ось ординат — log10 отношения шансов, рассчитанного из таблиц 2 на 2, в которых локусы классифицированы как метилированные по сравнению с неметилированными и геномные признаки как присутствующие или отсутствующие.

Доступен подходящий инструмент анализа для данных MWAS на основе секвенирования — ИСТИНА

Еще одной причиной отсутствия энтузиазма в отношении MBD-seq может быть плохое понимание того, как внутренние особенности данных влияют на анализ и интерпретацию.Что касается всего анализа ассоциаций, надлежащий анализ данных MBD-seq требует проверки и контроля технических артефактов. Это включает в себя потенциальные пакетные эффекты, встроенные в любой рабочий процесс, количество высококачественных считываний для каждого профиля метилирования образца, а также оценку эффективности обогащения и чувствительности, называемую «пиком» [ ¹² ]. Без учета этого пика обогащения в анализе сравнения между выборками, вероятно, будут сильно смещены. Контроль таких артефактов не является уникальным для данных MBD-seq.Недавние публикации предполагают, что контроль технических артефактов [ ²¹ — ²⁴ ] также имеет решающее значение для исследований на основе массивов. Например, было показано, что расположение как «чипа», так и «строки» вносит эффекты в данные массива, которые, если их не контролировать, могут привести к появлению ложных ассоциаций в опубликованной литературе.

Недавняя доступность RaMWAS [ ¹² ], инструмента анализа, специально разработанного для использования преимуществ уникальных свойств данных MBD-seq, обеспечивает эффективный инструмент для анализа данных метилирования.По сравнению с основным альтернативным программным обеспечением QSEA [ ¹⁹ ], RaMWAS превзошел альтернативу [ ¹² ] и позволяет пользователям эффективно обрабатывать, контролировать качество и анализировать очень большие объемы данных, которые генерируются для MWAS на основе секвенирования. Хотя инструмент RaMWAS был специально разработан для обработки данных MBD-seq, он также обеспечивает эффективное решение для исследования других типов данных, включая данные метилирования на основе массивов.

(PDF) Экспериментальное и модельное исследование дефторирования воды с использованием гранулированного кирпича в непрерывном неподвижном слое с восходящим потоком

Ziad T.Абд Али и Зайнаб З. Исмаил

8

доза 3 г / 100 мл при pH 8 и времени контакта 90 мин. Адсорбция

следовала модели изотермы адсорбции Фрейндлиха с эффективностью определения со-

0,9565. Результаты испытания колонны

показали, что производительность неподвижного слоя WGB для удаления фторида

увеличивалась с увеличением толщины слоя. Наблюдалось очень хорошее совпадение

между предсказанными и измеренными значениями.Это исследование

расширено для изучения: (1) потенциального подхода к регенерации

отработанного фторсодержащего адсорбента, (2) применения

предложенного адсорбента для удаления фторида из реальных образцов

подземных и сточных вод. .

Благодарности

Авторы благодарны сотрудникам Министерства науки и

Technology за техническую поддержку. Для этого исследования не было получено никакого фонда или специального гранта

.

Вклад авторов

Z.T.A-A (доцент) провел часть экспериментальной работы

, провел моделирование с помощью программного обеспечения COMSOL,

и участвовал в написании рукописи. З.З.И (профессор) предложил

разработал технический план исследования, выполнил часть экспериментальной работы экс-

, написал рукопись и отредактировал ее.

Ссылки

1. Мобин Н., Кумар П. Методы дефторирования — критический обзор

.Asian J. Pharm. Clin. Res. 2017; 10: 64-71.

2. Yousefi M, Ghalehaskar S, Asghari, FB, et al. Распространение загрязнения фторидом

в источниках питьевой воды и здоровье

Оценка риска

с использованием географической информационной системы, северо-запад

Иран, Регул. Toxicol. Pharmacol. 2019; 107: 104408.

3. Амини Х., Хагигхат Г.А., Юнесиан М. и др. Пространственная и временная изменчивость

концентраций фторидов в ресурсах подземных вод

регионов Ларестан и Гераш в Иране с 2003 по 2010 год.

Окружающая среда. Геохим. Здоровье. 2016; 38: 25-37.

4. Исмаил З.З., Абдлекарим Х.Н. Поглощение фторида из воды

с использованием переработанных сырых говяжьих костей как экологически чистых отходов

. J. Eng. 2013; 19: 1576-1585.

5. Бисвас К., Гупта К., Гош, Калифорния. Адсорбция фторида водным смешанным оксидом железа (III) — олова (IV)

из водных растворов

. Chem. Англ. J. 2009; 149: 196-206.

6. Картикеян М., Кумар К.К., Эланго КП.Исследования периодической сорбции

по удалению фторид-ионов из воды с использованием экологически безопасных

проводят в композитах полимер / биополимер. Опреснение

2011; 267: 49-56.

7. Суэйн С.К., Мишра С., Патнаик Т., Патель Р.К., Джа У, Дей РК. Эффективность удаления фторида

новым гибридным сорбентом

Zr (IV) -этилендиамина. Chem. Англ. J. 2012; 184: 72-81.

8. Mkongo FJ. Дефторирование воды для сельских районов, затронутых фторидом, в

населенных пунктах Танзании.В: 1-й международный семинар по профилактике флюороза и дефторированию воды

, Нгурдото,

Танзания. Международное общество исследований фторидов; 1995.

9. Дехгани М.Х., Хагигхат Г.А., Юсефи М. Данные о концентрации фторида

в ресурсах питьевой воды в Иране: тематическое исследование

провинции Фарс; Ларестанский район. Краткие сведения. 2018; 19: 842-846.

10. Дехгани М.Х., Зарейч А., Юсефи М., Асгари Ф.Б., Голам Али

Хагигхат, Джорджия.Загрязнение фтором подземных вод из

источников на юге Ирана и связанные с этим риски для здоровья человека.

Десалин. Водное лечение. 2019; 153: 95-104.

11. Бабу, Калифорния, Айенгар Б., Лал КБ, Амальрадж, Р.В. Удаление фторида

из отходов травления цирконием. Waste Manag. 1993; 13:

279-283.

12. Юнус Ц., Эсенгул К., Мустафа Э. Удаление фторида из водного раствора

с помощью красного шлама. Сентябрь Purif. Technol. 2002; 28:

81-86.

13. Агарвал М., Рай К., Шривастав Р., Дасс С. Дефлоридизация воды

с использованием модифицированной глины. J. Clean. Prod. 2003; 11: 439-444.

14. Ашиш К.Ю., Каушик К.П., Анил К.Х., Анкур К., Ниту Р.

Дефторирование грунтовых вод с использованием кирпичного порошка в качестве адсорбента

. J. Hazard. Матер. 2006; B128: 289-293.

15. Рани Б., Махешвари Р., Чаухан А.К., Бхаскар Н.С. Дефторирование

загрязненной воды с использованием кирпичного порошка в качестве адсорбента.

Внутр. J. Sci. Nat. 2012; 3: 78-82.

16. Ахамад К.Ю., Сингх Р., Баруа И., Чоудхури Х., Шарма М.Р.

Моделирование равновесия и кинетики адсорбции фторида на активированном оксиде алюминия, квасцах и кирпичной муке

. Грунтовые воды Sust.

Разработать. 2018; 7: 452-458.

17. Камбл С.П., Диксит П., Райалу С.С., Лабсетвар Н.К. Дефторирование

питьевой воды с использованием химически модифицированной бентонитовой глины.

Опреснение 2009; 249: 687-693.

18. Госвами А., Пуркаит М.К. Дефторирование воды кислым оксидом алюминия

. Chem. Англ. Res. Des. 2012; 90: 2316-2324.

19. Kumari U, Behera SK, Meikap BC. Новый кислотно-модифицированный адсорбент на основе алюминия

na с улучшенными свойствами дефторирования: кинетика, исследование изотермы

и применимость к промышленным сточным водам. J.

Опасность. Матер. 2019; 365: 868-828.

20. Кумар Ю.А., Аббасси Р., Дадашзаде М. Удаление фторида

из водного раствора и грунтовых вод с помощью пшеничной соломы, пилы

пыли и активированного угля из жмыха сахарного тростника.Ecol. Англ.

2013; 52: 211-218.

21. Рохас-Майорга С.К., Бонилья-Петрициолет А., Агуайо-Вильярреал, IA,

et al. Оптимизация условий пиролиза и адсорбционных свойств костного угля для удаления фторидов из воды. J. Anal.

Заяв. Пиролиз. 2013; 104: 10-18.

22. Джайн А., Сингх С.К. Дефторирование воды с использованием кирпичного порошка, импрегнированного квасцами

, и его сравнение с кирпичным порошком

. Int. Дж.Англ. Sci. Иннов. Technol. 2014; 3: 591-596.

23. Томар В., Прасад С., Кумар Д. Адсорбционное удаление фторида

из водной среды с использованием листьев Citrus limonum (лимона).

Microchem. J. 2014; 112: 97-103.

24. Исмаил З.З., АбдельКарим Х.Н. Экологичный подход к переработке

отходов баранины и куриных костей для удаления фторида из воды

с последующим повторным использованием фторсодержащих отходов в бетоне. Отходы

Манаг. 2015; 45: 66-75.

25.Будянто С., Куо И.Л., Лю Дж.С. Адсорбция и осаждение

фторида на наночастицах кальцита: спектроскопическое исследование.

Purif. Technol. 2015; 150: 325-331.

26. Фейсал А.А.Х., Абд Али З.Т. Защита подземных вод от загрязнения свинцом

с использованием гранулированного мертвого анаэробного биосорбента ила

в качестве проницаемого реактивного барьера. Десалин. Водное лечение. 2016; 57:

safa journal — [PDF-документ]

dI d_v_ u

5Ou u_U U) w? U_ UEM jC oKF du? W R WM b dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififfifififififififififififififififififififfififififififififififififififififififififififififfifififfifififififififififififififififififififfifififfifif часные WGB WOuLF UR * WOK) УУЛ ВбКу_ пК УМ? U 5 WIUD * jC? OKF du w R W? M b dfififififififififififififififififififififififififi dOQ Uu W WGB WOuLF UR * WOK; УУЛ WbK 5 DZB Фос WOL

дБ Вт V `интерфейс д? л SUJ WKD Н OKF д? л ш R _ дю с dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi UA

WOKb Вт? НУ) 5dUM * ZU? д UE Jc OKF? dL w R? _ Дю с dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi 5 5OUL SBD б UUfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi W WLJ, U UA Wd `UH WLzU

Bf fififififififififi UG wbMN бу * U WOU DŮM Н OKF ди ш R Bf DS DWF {BU * U WOK Wou 5 DŮM H нормально?? Р ди ш R B? F DS dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi Zd

дю WOU УЛ WFL WM б

мкл б дю Wou WuNLK Wld BZD WH

дО бу * U ВОК WOU 5dUM Н OKF ди ш R BF DS dfifififififififififififif ifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WOduUJO

WOKb fififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi UBU WOL ок

WOU * fifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi дб WOLfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififif ififififififififififififififififififififififififi дБ Wou WOLfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi Вок WoZ WOLfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi V_ Wb сек 5ii WOLfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi Wou Wb сек 5ii WOL

fifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififif ifififififififi ВКБ WoZ WOLwU) УЛ термометр ультрафильтрация

fififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi U BMN WOLfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi `U 5bMN WOL

Wod 5bMN б U * U WO? К WOU 5dUM Н OKF их? ж R Wod D S dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WO WOJLK WUI Bnf * U 55bMN б U * U WO? К WOU 5dUM H OKF дю? ж R Wod D S dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WO WOJLK WUI Bnf * U sbU5KK б? u * U WOK WOU? 5dUM H oKF? du w R WOd? D S dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WO WOJLK WUI Bnf * U

ДЕЛАТЬ B U * U ВОК WOU 5dUM? Н OKF ди ш R W? Od д ы dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WO WOJLK WUI Bnf * U WOduUJO

Qim у Fk гр? У ВК ВУБ * У? oKF dL? w R qIM WO? U * ds dUHdF U9 OIM WIKF * U w WR * tK `ds wu * WU Wdfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififif-i-WOu WU-wu * wKLF s-ub-ds-WBK * rus-WU-WU * dL w? R WUIF RA Wb? D s dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififые WOJK * bIH W w nM s 5O u

rOd w? M R WUIF RA Wb? д ы dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WUIF WOJK * Vd W W Nm сек 5O ¯u

qOGA Wmn * SUJ ш у стержневых Wmn U H OKF дл ш R qOGA Wmn * SUJ д ы dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi qOGA Wmn * SUJ у WUH wzUB Wd NMB SB U * U WOK? dUM H oKF dL? ш R qOGA Wmn * с? мкДжем DS dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi SBU 5bMN

и- стержневого Wm? НУХА OKF d? L ш R qOGA Wmn * с? мкДж DS dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi дБ VU Wd нм сек 5Ou

и- стержневого Wm? НУХА OKF d? L ш R qOGA Wmn * с? мкДж DS dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi VJ Wd нм сек 5Ou

и- стержневых Wm? НУХА OKF d? L ш R qOGA Wmn * s? мкДж DS dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififif ifififififififififififififififififififififififififififififififififififififi s Wd nM s 5Ou

WH du WOu WuNLK wLd bzd b

WOuLF WB cU b dUM? H oKF du w R? WUF ROKF WOULF? WB д s dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififличные WbOB w 5O000 u2000 u2000? aU qO? Q oKF? дю ш? R WOuL? F WB d? с dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi Сю Qu uKLF WOuLF ВБК `U WUOsbU б DŮM H OKF ди ш R WUF rOKF WOuLF ВБ д ы ш dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WbOB 5OFU 5OzUHAsbd б U * U WOK? DŮM Н OKF дл ш R WO? УНЧ WB DS dfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi 5 5OULfifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi WOuLF ВБК d2 Wd rNOd Lī подкожно и- WLzU

WUF rOKF Vk УБК УУ Ub UE Jc OKF дл ш R WUF rOKF DS dfififififififi фу DBk VK_ Bnf * Ubm ш WOB U ж * WBB UOKF УБК WOMu РАС

U fififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi `UC о IuH OKF дл ж RU DSD

WUI 5ULF 5bMN бу * U WOU dŮM Н OKF дл, ш R WUI DS dfififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififif ififififififififififififififi дК WMU Bnf * U

UU

и * fifififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififififi Ву WUI U BMB u_ Ву *

Бизнес-новости, Экономические новости, новости рынка, доля рынка Новости, индийский фондовый рынок Новости Page 115

12 мая 2021 09: 32 AM IST

Среднесрочный план (3-5 лет) PCL также включает в себя превращение в производителя оригинального оборудования (OEM) для электромобилей.

12 мая 2021 г., 09:20 IST

В Мумбаи цены выросли до 98,36 рупий за литр, что на 24 пайса выше, чем в предыдущий день.

12 мая 2021 г. 08:45 IST

По данным официального сайта SBI — sbi.co.in, выплаты по счету заработной платы SBI включают страховые выплаты; Скидка по личному кредиту, жилищному кредиту, автокредиту, ссуде на образование и т. д.

12 мая 2021 г. 07:59 IST

Департамент телекоммуникаций Индии на прошлой неделе утвердил заявки телекоммуникационных компаний Reliance Jio, Bharti Airtel, Vodafone Idea и MTNL провести испытания 5G, но ни в одном из них не будут использоваться технологии китайских организаций.

12 мая 2021 г. 07:41 IST

Ранее в мае компания M&M перенесла плановую остановку на четыре рабочих дня на своих производственных предприятиях в шахматном порядке. Первоначально это было запланировано на июнь 2021 года.

11 мая 2021 года 21:25 IST

Они купили 17% акций Artivatic, чтобы получить большинство.

11 мая 2021 г., 19:59 IST

Однако центральное правительство считает, что осуществление установленных законом полномочий будет «контрпродуктивным» на данном этапе, и активно взаимодействует с глобальными организациями на дипломатическом уровне, чтобы найти найти решение в наилучших интересах Индии.

11 мая 2021 года, 19:58 IST

Европа достигла рекордного максимума в понедельник, но его перезапуск был красным, поскольку лондонский FTSE, франкфуртский DAX и CAC 40 в Париже упали примерно на 2%.

11 мая 2021 года, 19:55 IST

Victoria’s Secret и Bath & Body Works — более прибыльный бизнес — будут разделены на отдельные публично торгуемые компании, если разделение будет одобрено советом L-брендов.

11 мая 2021 г., 16:31 IST

Согласно данным, предоставленным ассоциацией дилеров Apex, только 8.В апреле было зарегистрировано 65 лакхов двухколесных транспортных средств, что намного меньше, чем в среднем в 1,2–1,3 миллиона единиц, проходимых в месяц.

11 мая 2021 г., 15:36 IST

Фирма рассчитывает достичь целевой структуры путем разделения упомянутого Бизнеса MIS на недавно зарегистрированные компании, то есть Kyndryl и Ocean India.

11 мая 2021 г. 14:42 IST

Корпорации предоставляют ряд мер по облегчению персонала, начиная от проведения вакцинации, поиска медицинских учреждений, а также эмоциональной поддержки.Отпуск для поддержки членов семьи, вакцинация и выздоровление от COVID — вот некоторые из других шагов.

11 мая 2021 г. 13:55 IST

Государственная корпорация Bharat Petroleum Corp сократила импорт сырой нефти на 1 миллион баррелей в мае и сократит закупки на 2 миллиона баррелей в июне, сообщил агентству Reuters представитель компании

11 мая 2021 г. 13:37 IST

В рамках своей «Миссии HO2PE» HUL отправит 4000 концентраторов в наиболее пострадавшие города, включая Дели, Лакхнау, Бангалор и т. Д.

11 мая 2021 г. 13:25 IST

Страховые компании говорят, что коэффициенты убытков превысили 110 процентов, и предпринимаются некоторые шаги для удержания требований под контролем; принятие всех восстановленных страхователей по той же цене нанесет ущерб фирмам, говорят они.

11 мая 2021 г. 12:23 IST

Автомобильные компании активизировали усилия по борьбе с пандемией после этого.Министерство по корпоративным делам выпустило циркуляр, который теперь позволяет тратить средства на импровизированные больницы COVID-19, временные лагеря помощи и другие инициативы в рамках деятельности по КСО.

11 мая 2021 12:18 IST

Восстановление внутреннего воздушного движения сильно пострадало из-за второй волны COVID, в результате чего брокерские конторы значительно снизили свои оценки доходов в авиационной отрасли на 2021 финансовый год. 22.

11 мая 2021 г. 11:38 AM IST

Хотя оценка будет оптически дорогой, инвесторам следует использовать текущую слабость, чтобы поддержать рост, например, L&T Infotech, чтобы воспользоваться многолетним циклом обновления технологий

мая 11, 2021 11:34 AM IST

Любимая криптовалюта Dogecoin главы Tesla SpaceX и Tesla Илона Маска в этом году выросла более чем в 130 раз.

11 мая 2021 г., 11:15 IST

В результате увеличения капитала Softbank получит долю чуть менее 10% в THG, ранее известной как The Hut Group, которая разместилась в Лондоне в прошлом году.

11 мая 2021 г. 10:26 утра IST

Завод Foxconn в южном штате Тамил Наду производит iPhone специально для Индии, лидера в мире.2 рынок смартфонов.

11 мая 2021 г. 07:40 утра IST

Новости о коронавирусе Обновления в прямом эфире: по данным Министерства здравоохранения Союза, совокупное количество доз вакцины против COVID-19, введенных в Индии, превысило 17,27 крор.

10 мая 2021 г., 21:00 IST

Верховный суд в своем постановлении от 30 апреля отметил, что центральное правительство может рассмотреть возможность использования своих полномочий в соответствии с разделами 92, 100 или 102 Закона о патентах для увеличения производства основных лекарственных средств до удовлетворить спрос.

10 мая 2021 г., 18:47 IST

Для целей квалифицированного институционального размещения (QIP) банк установил минимальную цену на уровне 35,51 рупий за акцию.

10 мая 2021 г. 17:57 IST

Исполнительный директор BioNTech Угур Сахин сказал в апреле, что вакцина работает против индийского варианта.

انون 101 لسنة 2012 — [PDF Document]

WMuL) WU)

bF lU

UNOM sL

WM d; v UB WM dL ou *

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

bF Uu

WOdF дБ WuNL fOz d

WdC uU UJ iF qbF WM r uUIU d

iF? дд ???? Я WM? у? U ??? IU? U ??? B? qb v? K

W? O? U? L ?? Wb? F o? O? I?% V W? LU? * W? O? D? C d? O ?? O?

vdC dN? U sb (

WUF WdC uU UJ iF qbF WM r uUIU d

WM r uUIU UB UFO * vK

WdC uU UJ iF qbF WM r uUIU d

WM r uUIU UB v 9 W? OM * UIF ? d {uU? UJ iF qb? F WM? r uUIU d?

WM r uU? IU UB W? Gb

u? U? I UJ? iF qbF ?? WM r uU ?? IU d?

5u? * 5FzU? Q? V WM r

uU ?? I UJ i? F qb? F? WM? R uU? IU? D?

WU? F WUEM Q? V WM r

WHB r

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

WOdF дБ WuNL fOz d WM r uUIU

WM r uUIU UB qb wK WdC uU UJ iF qbFWOUL WbF oOI% w WLU * i ddC dOO000 (9 ddC dOO000) 9 ddC dOO WuNL ‘f} z

dd s aU UB ub vK bF U s aU UB ub vK

fD s aU UB ub vK dLu s aU UB ub vK

WM r uUIU UB WGb Wd {uU vK WM q uUIU vK VzdC uU vK WbK WOU * u * WOLM r QA WM r uUI vK

WM r uUIU UB qb vK WdC uU vK VzdC _ eU ddI WM r uUI ud * vK

u fK WIu bF d

tB v uUI

v_ U *

dI cN qLF aU? s U tFb mK s b? eU uL * `M1uJ v ?? с? U ????? v ?? uU ?? IUN bu v tOK W? I * _ W VzdC bO? sp WM eU (Ub? uL * UU? d_ W? OU? {mU * d? OQ? qUI? jO? I d

UNM eb

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

U? I? u? L * U? e? U? H? O ?? W? K? B? LK b? v mU? * U U? u V? Od uJ vK UL U * c UJ_

W} zUCI W UdB * lM * su; VzdC

WI * VzdC dOQ qUI

rv? d ?? l U? b ?? eK v? Vzd ?? C? vK e ?? U ??? (c `M d ??? U? F? B U? EM U? I? W? D ?? CU ?? X% qO? B ??? rB?) UEM U ?? I? Ubu Ubu U? N? KO? B ?? e? K? * lM * se ?? (UEM? U? I? Ubu rv? W? b? I * uU? s U? * s W? OU? d ?? I? H rJ 5? U?

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

WU WdA tOM v tOM sd

WFd WdA tOM uOK b tOM v tOM sd

WU) WdA tOM uOK bsd

q UNOM dA d_ WdC U bM

q UNOM dA d_ WdC U bM

q UNOM dA d_ WdC U bM

qb

vUL? BMB s qu? LQ? AM * bb ‘U? DA * s oI? V U_ UF U vB b dL * U * v quL c W bv WOLMKs b ?? uM f? L? B * p? T ? OM? Nu ??? L ?? U ?? U0 uM`? Ds

u_ VU b UAM We aU 90 004

bMB s WuL * UMO uM UL vEU0 U? I v UdALK WMU tOM n WzULL vB b UH uJ WOLMK vUL

dL * U * d uBI * bb du s d bB

bM U

U? v? ЖЕНЩИНА? УУ? Я в 5КУ? U? CQ? sb? O? I * d (sN * U ?? dW? d? CU u? eK d? (sN * We? aU? s uM b * p rN? B? B? b? U? N? OU? U ? C? Dc? WH? UU? H? B? U? C? I vU? D? N? A s U ??? Ub? BOM W? UF Wb?) D WMN * We uU? UNKD v sd? LWM v U? H? d? I * b * iH? WMN * We? b aU? W? OU XU? UO ?? UU dA WL sd? td vK vC b U d _ WMN * es * b

dHM WMN * uL * e vdC UHU lLK dA u_ lOL v

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

U

vd ?? B? W ?? L ?? O? vU ?? L ?? vK iO ?? H? D ?? O? G? [D? F ?? W ?? d? {D ?? HWU? BF UN? U UN? OK дБ? VB u UN? OK UMK v {_ WOM * U? IFtM WOMJ ? b tM e? tK UI? FU? d? B c U? u U? NOK P? AMXU? u? dO? GK u? L? LK W? uK2 vK W? U? I? QA? M * XU? upd? O?

WMb * d U q lI UIF c XU u dNA dO dNA

v UI? F vu Ud? B WdC c? N WF? {U) Ud? B s vM? U v W? OMO WB ? U? IF.bI pc? dO * bM UN? U tu? s to X

uM fL b * UN WKUI * rN_ v дБ b dA WLU * Ud

дБ aU s Uu 5 WdC b дБ * eK

W ?? d? C q? O? B ??% U? I ?? F d? N ?? A VUJ? vK uJ U ?? d? B ?? d ?? N? WU ?? v- b? s? J r U? d ?? N? A aU s? U? U 5 ?? Взд? C W ?? КБ? v? Ubu

aU c q VzdC WKB v WdC b

d? O? G W ?? NU d? B? W? D? CK U? F? {U? U? ДБ? d ?? F U * c? UJ oO? D ввК быть? b * d? O ?? Q U ?? I? F vK? ЭМ-М-М?? o dd ?? I d? H _ u ?? _ W} zU? C XU? W Wd? ‘ uO? Wd? CK UF? {U Ud? B d? F U? U 5? LW? DCK U? F? {U U? D? B d ?? F UL? 5? К? WU? F WF? HMLK W? OJK * e pc? WU ??? U ?? _ W? OK; б? W? UJK W ?? NU d ?? U d? B?

UF lHM UdA * WUF

vU ?? u? O s U ???? uU? I s U? * U d? I * d? O ?? Q? qU? I ?? d? U * c s WFd WU 5dIHU b; b * UN

v uL * vK W? I? * VzdC vUL s W? dC c s b — U? rB uUI c s U * s bM oOD WU

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

U

d? F W? dCK lC? q U? NOM d? A d? v Wd? C U d? I WuM U_ vU s

fu ?? UM W ???? O U lC ?? W ?? IU ?? d ?? I ?? H v u d ?? F ?? s UM ???? U lC? U? L? d? F? W? D? CK e? D * pM d ?? K W? U? F Wd? B * W ?? O? N

[dF WdCK UNU UG d s Y Ud

bM U

U? B? U * u? uU ?? I U? I ?? Q? A? M * U? L ????? oUM U ?? Fu U WOU * _ v UL vK UNUA dBI v WM r uUIU

WUF We) bM Wu b v bOI * bM bzU UdO

W? dC? K lC d ?? U ?? h? A vuU? I qJA d? OO? G WU? v UU ?? b U ?? p v U0 rO ?? O ?? I ?? U ?? s W ?? & UM W ?? OU ?? L ?? d U_ WO U (vuUI qJA v dOOG s bF Uu WUJ rOI

d 5LOI 5d Ub

WLOI Wd l WLOI dO Wd Ub

d 5d v WLOI Wd rOI

du Wd vu Wd u% u Wd v U Wd u%

u Wd v U hu%

qJA dOOG b? l rOOI U s W&U WOU? LU oI% WU vU_ U ??? v U_ cr U ????? h? AK vu? U? Iu? _ rO? vK W? d? C d? _ U ?? r vK dzU ??) U s W? & UM dzU?) U bF U? C WU ( cv rO? OI U? q

WOU uM v UNKOd u UL rOOI

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

U

U bM

WLzb Q? AM * VOB Ub) qU? I qO sd ? F Ub?) QUI bMv d WUd U? DB W UdB * sd? B v WKUFQ ?? AM * U bb ??% bM V? U?) V? v? O? zd Ue ?? d? У ?? НКЛ ???? WU? D Ud? B? W Ud? B * sL? {BL? F? U быть W? LzbvU? s vK U?) v v? O? zd e? d * U? NKL ?? v d? c b v W? KL; Уд? B * sLC? vK QAMLK vd? C `d.б? я? d? A d ?? U ??? ты? u? L ?? бзу ?? U W W ??? M

WIu bLF vOzd ed * UU Vd s UN

dO_ dIH

U * c s v? _ DI? H v UN? O UA? * UN? ‘ U? _ PAM * e? K WUB oUM * uU UJ_ UI WUI * dH PAM * UdA p v U0W? D ?? C b? I ?? е ??? d? (oUM * UE? MW? U? I? * U? d? A * p? c? W? U ??) W? F? O ?? D

WdC e tO — c uOK U qL uv WKB * v Ubu WI *

U

bzu W? dCK lC d 5u? v dI WO? d {UH Q? b l dF? uM s do? ed * pM `U? B WOU * Ub? B v bMbI? e U? NOK qB? s bzuF c l eK nO? UJ rB pu v W? B?

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

c l e ?? K W? E?) B? M bzu ?? d? F ?? W ?? d ?? C c l? C? U ?? L ??

Ед кв? u v W? B?

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

s 5L? O? I * d? O? u? LO? I * U? N? I? I? v U_ vK t? O U? A * W? d? C d?

rO? I? делать? час? UN? JK1 WL? Z QAM W | W? U ?? U? _ 5O? F? OD? U? _

WHK?

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

dJ U

UA * uUI s U * s sbM v UNOK uBM * UN’ vK

U? N W ?? uKL * sU? d ?? Q ?? * s U? N? KB?% v U? v? K W ?? nO ?? C t? O

UdA? uQ Ub? W б.bI UN? O lOMB U? bF *

v W ?? d? C? U ??? X% p qO ?? B ??? г? c U ?? l U ?? NKO? B ??%

sdQ * R vK o

dJ U

d v? U u UA? M t U? M * lK du s d? I b%

l oH? U? 0 U? N ?? U? {R v? W ?? M pc? W ?? d? CU ?? (W? U? {UE? U? N? OK

b * mU * s U U0 UA q WFO

dJ dJ U * s sbM v UNO UA * UN ‘vK

v W? I ???? * W? d? CU ?? X% t? K? B? U? W? L? O? bu uU? I? d? I cs

vKO? BH U? O l U qs? DUM du? TOu q? Dd U? B b? Uv W? KB *

U ?? {? U ?? I ??? p W ?? IU ??? d ?? N ??? W ?? ??? u2 qs? XC ???? v? mU ??? * U

du sd Ubb bB v d_

dJ U

WdCK WF {U) dO PAM * vK WdC UX% WU {UJ d

U ?? N? e ?? l U ?? H? u ?? C?) b ?? г ??? ? п? uU? I v? C ??? I0 U? N? M U? H ?? F *

W? U? {UE UJ_ U? I U? N? F? qU? F v? U) UD? I PAM? * W? MU W? U? {U

U * c dJ dJ dJ u * v UNO UA *

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

dJ U

b ? I * W ?? d? CW? L? O? с? qQ vd? C d ?? v W? d? C mK ?? u? L *

с WU? q sd b ?; W? M UF W?} ZUNM W? DCK vU? {MK Q e? K UOzU? N

WOU U (W? B * W? D? C 5 d? HU? U? N? Rrv W? D? C s

b ??? I ?? s? Vs U ??? FW ???} zU ??? NM W ??? d ??? C 5 d ??? U

W} zUNM WdCW? b * W? d? C 5 d? HU? U? N? rrv W? d? C s

b? I s? vsd? U? FW?} zUNM? Wd? C 5 d? U

W} zUNM WdCW? b * W? d? C 5 d? HU? U? N? rrv W? d? C s

W? d? C? b? I? ssd ?? U? F? W?} zU? NM W? D ?? C 5 d? U

W} zUNMU ?? NQ ??? A oD v? U ?? (U Wc ??? O ?? HM b ?? u ??? IU d ?? du? b ?? B

v QD? b ?? U ?? U ?? NM? U * cv U ?? N ?? O? K u ?? BM * U ??? d ?? G

W ? I? UM vK Ud? OQ h? H f iF qb? FU? OO? D

d.bI bM bLF sJ rv dzU) qOd U pc

bM U

uUI s U * s WU dIH v UNOK uBM * uUH rOK bb

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

*

dU ?? смешной? tK vK W? I ?? * W? d? C mU ?? смешной? с ч? q vH? Ftd tU? L r tUL? WL? O XU? U UF? O * vK W? UF W? DCc? N qL ?? F aU vK W? IU ?? W? O? D? C d ??? H s p uM t ?? vU? VzdC pK jd? U q s pc vHF? WOdC d? H c b U? U uUI

5O 5dA du WU v UdO WOU {Wd {Ud dOQ qUI sqJ _ lC? вд? {д? t1b? I t? KO ?? о? h? A uJ q W? d {WdB? * VzdC W? KB q s? WOd? C WF? D * UJ s

UFO Wd {aU s d? N? dA? vM? W? B?

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

WOdF дБ WuNL fOz d

WM r uUIU

UFO * wK WUF WdC uU UJ iF qbF

WMB r dUIU4 | U UB ub vK bF U sa | U UB ub vK

fD s aU UB ub vK dLu s aU UB ub vK

WM r uUIU UB UFO * vK WUF WdC uU vKvK W? U? FW? D? C? uU? UJ iF qb? F? WM? r uU? I vK

tO UA * UFO * Wb? K W? UF? W? U? * J? D W? M? ты? У? Я? vK

WOU * WMKW ??? d ?? C uU ??? UJ i? F qb ?? F ??? WM? r uU ??? I u ?? d? * vK

UFO * vK WUF u fK WIu bF

d

tB v uUI

v_ U *

vK W ?? U ?? F? W ?? d ?? C uU ?? s U? * U u u ???? * n? d ?? F ?? б ?????? v ndF WM r uUIU UB UFO *

WOU? M lK d? O? U uI? uMF? vFO? hqu ?? * dO s dG UU WdCK WF {UU) s Ub

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

WOU U *

uUIU UB U? FO * vK WU? F WdC uU s U * hM б? v hM WM r

W? d? C s lK iF U? H? час?

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

WU) U *

uUIU UB UFO * vK WUF WdC uU s U * hM b v hM WM r

s d? N vK V? UF d? uU U? N vC? I b Wu? I? Q б? lq s qI WdG uM fL U & dN W s qI bf (U WdC5KU ?? H? vK rJ? 5u ?? I ?? F 5U? b ?? SW ?? d ?? C vK ??? U ?? & W ?? d ?? C

WOU {WdC WdCU 5MUC WuIF WHUC u uF WU v

UF t vK rU; v UNU bM dN UUC dEM WU U *

UJ iF ?? b ?? F * WM ru? U ? IK o? D * rb? ‘C ?? W? H UF? O * vK WU? F Wd? CK tu lK lC WM? R uUIb’ vq? IM U? K * b U? LO? WLO? I s

UNM q sd u UHU uUIK od * r WFU U *

ru? U? IK? Od? * B ‘s? Rq? K? * H? M b ???????? v hM WM r uUI UJ iF bF * WM

e?) b? 5 su? K (c fUD oO? Bs WFMB * U ?? M * lOL? WdCK UF dFK UNuC l tu lOL

WMU U *

ru? U ?? IK? Od * rb ??? ‘s vL? ?? 5K? K * qI? M rb ???? ‘v W? M r? UU ???? I UJ? IF ???? b ???? F * WM?

UNM q sd W { u * UHU

WM dL v lU bF WOLd bd ‘

WFU U *

U? FO? * vK WUF W? d? CW ?? H UM? K bb? sb? O? U? C? l? C p nU rJ q vGK lu

dUF U *

U? K * hM b ?? U? B UF? O? * vK W? U? F Wd? C uU? I od * rb? ‘s

v hM WM r uUIU

.