Что такое скрин важных в вк
Скриншот – это снимок экрана компьютера или мобильного устройства. Его используют, чтобы показать другому человеку происходящее на мониторе, сохранить часть важных данных или переписки и т.п. В материале ниже предоставим инструкцию, как сделать скрин в ВК с компьютера или смартфона. В OC Windows действие может быть выполнено встроенными средствами системы или при помощи установленной программы.
Создание скриншота на компьютере
Сделать скрин ВКонтакте с ноутбука или настольного компьютера получится двумя методами. Каждый содержит свои преимущества и недостатки. Рассмотрим их подробнее.
Сохранение снимка без программ
Чтобы создать скриншот экрана не устанавливая в систему стороннее программное обеспечение необходимо:
- Открыть страницу в браузере, снимок которой требуется сделать.
- На клавиатуре отыскать и нажать клавишу «Print Screen».
- Выбрать диалог для отправки, поставить курсор в поле ввода текста и нажать сочетание клавиш Ctrl+V. Произойдет загрузка изображения на сервера ВК.
- Отобразится миниатюра скриншота. При необходимости, перед отправкой ее можно отредактировать. Для этого нужно кликнуть по картинке, навести курсор на ссылку «Еще» и выбрать требуемое действие:
- Фоторедактор – позволит добавить текст на изображение, обрезать его до нужных размеров, наложить фильтр и т.д.
- Поворот вправо или влево – развернет картинку в выбранном направлении.
- Указать место – позволяет отметить локацию на карте.
- Открыть оригинал – с помощью этой опции картинка сохраняется в памяти компьютера. После того как она откроется в новом окне, нужно нажать по ней правой кнопкой мышки и выбрать пункт «Сохранить как…».
- Когда все необходимые изменения выполнены, скриншот можно отправить собеседнику.
Такой метод хорош тем, что работает на любом ПК под управлением Windows и не требует затрат времени на установку дополнительной программы. Однако если требуется отправить только определенную область экрана, придется использовать встроенный редактор ВК.
Сохранение снимка через программу
Вариант предполагает скачивание и установку специальной программы. Алгоритм действий:
- Перейти по ссылке http://joxi.ru/.
- На главной странице сайта нажать «Скачать Joxi».
- Выбрать место для сохранения установочного пакета. Когда скачивание завершится – запустить файл и следовать инструкциям установщика.
- После интеграции в систему, в правом нижнем углу экрана появится значок программы. После нажатия на него, необходимо зажать левую кнопку мышки и указать область для сохранения скриншота. Дальше появится панель редактирования изображения, в которой присутствуют опции добавления текста, выделения фрагментов, установки нумерации и т.д.
- Когда все готово, следует нажать на галочку, расположенную рядом с панелью редактирования. Изображение загрузится на сервер программы, а в буфер обмена будет скопирована ссылка для доступа к картинке.
- Осталось открыть диалог ВКонтакте и нажать сочетание клавиш Ctrl+V. Собеседник получит ссылку на скриншот. Если нужно сохранить картинку в память ПК, то достаточно открыть ссылку в браузере и повторить действия пункта 4.4 предыдущего списка.
Несмотря на то, что метод требует установки программы, он обеспечивает больше свободы при сохранении скрина: можно сразу выделить нужную область, а не сохранять весь экран. Кроме того, присутствует панель редактирования, благодаря которой получится быстро указать на важную часть изображения, вписать текст, обвести элемент и т.д. Для каждого добавленного объекта допустимо изменение размера и цвета.
Создание скриншота в телефоне
В современных смартфонах функция создания скриншота интегрирована в операционную систему. Чтобы ею воспользоваться требуется только нажать нужное сочетание физических клавиш, расположенных на корпусе. Поскольку комбинация зависит от версии ОС, имеет смысл рассмотреть вопрос детальнее.
В смартфонах на Андроиде
Для телефонов, работающих на базе Android, существуют следующие варианты создания изображения экрана:
- Зажать кнопку «Домой» и «Питание». Обычно применяется на ранних смартфонах Samsung.
- Одновременно нажать и несколько секунд удерживать кнопки выключения телефона и понижения громкости. Порой последнюю следует заменить на клавишу повышения громкости.
- Довольно редким вариантом является одновременное нажатие кнопки «Домой» и «Назад». Обе расположены под экраном смартфона.
- В некоторых новых моделях мобильных устройств скриншот создается посредством жеста. Ребром ладони нужно провести над дисплеем слева направо.
Чтобы скинуть полученное изображение в чат ВКонтакте – открыть диалог и прикрепить изображение, выбрав в качестве источника память телефона.
В смартфонах Apple
Методика создания и отправки скриншота в iOS схожа, а комбинация клавиш зависит от модели смартфона:
- В iPhone X и прочих новых моделях работает такое сочетание: нажать и удерживать клавишу «Питание», затем нажать «Повышения громкости», после чего отпустить обе кнопки.
- Для iPhone 8 и более ранних моделей применяется комбинация кнопок «Домой» и «Питание».
- В планшетах iPad скриншот создается так: нажимается и удерживается верхняя клавиша, затем нажимается «Увеличение громкости», после отпускаются обе кнопки.
Справка. Созданный снимок сохраняется по такому пути: «Фото» > «Альбомы» > «Снимки экрана». Отправка в социальную сеть выполняется как в системе Андроид.
Подведем итоги. При необходимости создать скриншот, можно воспользоваться несколькими вариантами выполнения задачи. На компьютере более удобен вариант с применением специальной программы, а на смартфонах снимок сохраняется нажатием соответствующих клавиш.
Здесь тоже все просто. Давайте сделаем снимок экрана, на смартфоне линейки Samsung Galaxy. Открываем нужную страницу в вк. Теперь одновременно зажимаем клавиши «Домой» и «Питание» .
После этого будет создан скриншот экрана. Найти его вы сможете по следующему пути:
Видео урок: как сделать скриншот вконтакте
Заключение
Снимки экрана могут очень пригодиться. Яркий пример — вы отправляете жалобу на пользователя вконтакте, чтобы его заблокировать (см. как заблокировать друга вконтакте). И нужно приложить картинки, на которых явно видно, что пользователь занимается запрещенными делами. Вот тут то и пригодится скриншот. А как его делать, вы только что научились.
Вам помогла эта информация? Удалось решить возникший вопрос?
Пожалуйста, задайте свой вопрос в комментариях, с описанием возникшей проблемы
Мы и наши пользователи, регулярно обсуждаем возможные неполадки и сложности. Вместе мы разберемся с Вашей проблемой.
Запрос о том, как сделать скрин в ВК, весьма популярен у пользователей. Через скриншот можно сохранить важную часть переписки. Кроме того, данная опция нередко используется организаторами конкурсов и розыгрышей при подведении итогов.
Скриншот в ВК через PrintScreen
Сохранение картинки с ноутбука через клавишу PrintScreen — способ простой, но не слишком удобный, поскольку он не позволяет выделить для снимка нужную часть изображения, загружая в буфер обмена полностью весь экран. Поэтому картинку придется обрезать в одном из графических редакторов. Вот подробная инструкция:
- Вывести на экран изображение, которое следует сохранить.
- Найти в верхней правой части клавиатуры клавишу Printscreen (PtrSc) и нажать на нее.
- При необходимости открыть графический редактор. В нашем случае, это Paint3D, который входит в базовую версию ОС Windows.
- В редакторе создать новый документ, куда вставить изображение из буфера обмена.
- С помощью соответствующего инструмента обрезать лишнюю часть картинки, выделив нужную. Сохранить.
- Открыть раздел «Сообщения» в ВК, найти и раскрыть требуемую переписку. В новое сообщение вставить полученное изображение.
Таким образом, скрин можно сделать и отправить адресату с компьютера посредством социальной сети ВКонтакте.
Программа для скриншотов
Гораздо быстрее и удобнее делать скрины в специальной программе. Именно таким софтом является Screenshot Creator, которая «весит» всего 494 КБ. Предлагаем небольшое руководство по скачиванию и установке:
- Перейти по ссылке http://www.softportal.com/software-5454-screenshot-creator.html
- Сохранить установочный файл на своем компьютере, кликнуть вкладку «Скачать».
- Распаковать rar-архив и установить программу стандартным способом.
Теперь можно приступать непосредственно к созданию скриншота. Программа может делать снимки всего экрана, только определенных участков или активного окна. Для того, чтобы ознакомиться с рабочими сочетаниями клавиш нужно перейти в меню настроек. Сделать это можно, кликнув правой кнопкой мышки по иконке запущенной программы (находится около часов).
Если нет желания держать в голове все настройки, можно поступить так:
- Одновременно нажать клавиши Ctrl+PrtSc.
- Мышкой выделить интересующую часть экрана.
- Нажать клавишу Enter.
- В диалоговом окне установить формат сохраняемого изображения: *.jpeg.
Теперь снимок экрана будет отправлен в буфер обмена, откуда его можно вставить в любое удобное пользователю место.
Скриншот с телефона
Сегодня на рынке представлено бесчисленное множество моделей смартфонов от самых разных фирм и производителей. Большинство из них можно разделить на две группы по типу используемой операционной системы:
Они имеют некоторые особенности, которые и объясняют различия в процессе сохранения скриншотов.
Скрины на Android
Снимок важных моментов переписки в ВК можно сделать с мобильных устройств, работающих на Android. В зависимости от модели, нужно одновременно зажать две клавиши:
- «домой» и «питание»;
- «питание» и «громкость вниз»;
- «домой» и «назад».
Буквально пара секунд, и снимок экрана будет сохранен в памяти устройства.
Некоторые новые модели обладают функцией «Скриншот движением». Чтобы сделать на них снимок, нужно просто провести по экрану ребром ладони справа налево.
Скриншот на iPhone
Скинуть картинку экрана можно и с Айфона. Для этого нужно одновременно нажать на кнопки «питание» и «домой».
Внимание! Удерживать клавиши не нужно. Снимок сохраняется в память устройства мгновенно.
Скриншоты активно используются юзерами социальной сети ВКонтакте. Они нужны для сохранения важных моментов в переписке, фиксации победы в конкурсах и розыгрышах призов, а также во многих других сферах виртуальной жизни.
Все ходы записаны: как скриншоты из интернета помогают в судах | Статьи
Заверенные нотариусами скриншоты переписок и другой информации, передаваемой посредством мобильного телефона, ноутбука или других современных средств связи, все чаще используются в качестве доказательств в судебных делах. Статистика, опубликованная Федеральной нотариальной палатой, говорит о росте такой практики на 12%: услугу по нотариальному заверению снимка экрана получили 13,5 тыс. человек с начала года. О том, как правильно оформить такие доказательства и с толком использовать во время процесса, «Известиям» рассказали практикующие юристы.
Не вырубишь топором
Сегодня для многих людей интернет стал практически средой обитания. Дистанционно идет работа вне офиса, без встреч и рукопожатий подписываются сделки. Все это, разумеется, часто создает почву для недопонимания между сторонами, а иногда, увы, и для мошенничества. Поэтому никогда не лишне сделать скриншот важной переписки, а затем заверить его нотариально. Этот же прием помогает привлечь к ответственности организаторов кибербуллинга, нарушителей авторских прав. Пользуются новым механизмом оформления доказательств не только граждане, но и госорганы, например налоговики.
«Не так давно к нотариусу обращалась ИФНС, которой в рамках выездной налоговой проверки потребовалось подтвердить факт наличия в ассортименте интернет-магазина одной из компаний товаров определенного бренда», — сообщается на сайте Федеральной нотариальной палаты. По статистике, чаще всего заверяют данные из сети москвичи, жители Санкт-Петербурга и Краснодарского края. Очень часто граждане просят зафиксировать переписку в соцсетях, по электронной почте или в мессенджере. В качестве примера ФНП приводит пример, когда такого рода общение помогло ресторану доказать факт законного использования снимков уволившегося фотографа. Он пытался вчинить бывшему работодателю иск за использование своих фотографий в оформлении меню. В переписке четко говорилось о том, что изображения являлись результатом исполнения трудовых обязательств сотрудником и ресторан был вправе их использовать.
Фото: ТАСС/Владимир Астапкович
Документальное подтверждение оформляется протоколом осмотра интернет-страниц, не имеющим срока давности. Там указано, когда и по каким ссылкам переходил нотариус, к документу прикладывается скриншот.
«Удаление или редактирование публикаций в интернете, которые изначально были зафиксированы с помощью нотариуса, уже не спасет правонарушителя от ответственности. Как и любой другой нотариальный акт, протокол осмотра веб-страниц наделен повышенной доказательственной силой, а значит, не требует дополнительных подтверждений для суда», — пояснили в ФНП.
Сила слова
«Известия» поинтересовались у юристов, насколько успешно скриншоты помогают сторонам защищать свои интересы в суде.
— В настоящее время закон содержит категорию «иных доказательств», к которым и относятся все электронные улики. Переписка в мессенджерах, электронной почте признается доказательством в суде при соблюдении ряда требований: она должна быть относимой, допустимой и достоверной, — объясняет адвокат Виктория Данильченко.
Под соблюдением первого требования подразумевается, что сообщения должны касаться предмета спора (или правонарушения), содержать указания на определенные действия или события, подтверждающие или опровергающие совершение спорных действия.
Фото: РИА Новости
— Кроме того, должны быть четко установлены отправитель и получатель сообщения. На сегодняшний день многие мессенджеры привязаны к номеру телефона. Если этот номер зарегистрирован на лицо, которое реально вело данную переписку, то проблем не возникнет. Но если номер принадлежит другому лицу или организации, то приобщение переписки к доказательствам может быть весьма проблематичным, — говорит Данильченко.
В переписке люди часто используют сокращения, сленг, допускают ошибки, искажающие смысл, и это еще одна сложность в суде. Та же автозамена, которая по умолчанию используется в смартфонах, может внести существенные коррективы, отмечает собеседник.
— Достоверность переписки означает, что сообщения не только должны относиться к существу дела, но и содержать достоверную информацию, не обрывочную и не носящую предположительного характера. Для определения степени достоверности проводится сопоставление переписки с показаниями, вещдоками, протоколами и иными уликами, — объясняет адвокат.
Допустимость означает законность ее получения.
— Для получения доступа к переписке в сервисе, который сохраняет все текстовые сообщения на сервере, нужно направить запрос его владельцу. Переписка, полученная путем взлома аккаунта, не будет принята в качестве доказательства. Важную роль при предъявлении переписки в суде играет способ ее оформления. Есть два основных способа — обеспечение доказательств у нотариуса либо самостоятельное закрепление доказательств. Первый способ более надежный, поскольку составленный нотариусом протокол будет соответствовать всем формальным требованиям как доказательство. Но его недостаток — в дороговизне, — говорит адвокат.
Фото: ИЗВЕСТИЯ/Михаил Терещенко
Самостоятельное закрепление доказательств не требует затрат, в этом случае суду обязательно необходимо будет представить непосредственно сам телефон с перепиской.
— Если телефон утерян или сломан, то возможность приобщения этой переписки полностью исключается, — говорит Виктория Данильченко.
По словам адвоката, сегодня инструмент фиксации используется практически во всех областях судопроизводства. В практике Данильченко был процесс, когда суд, опираясь на переписку бывших супругов, вынес определение о проживании детей с отцом. Мать в тексте высказывала намерение увезти общих детей и незаконно лишить бывшего мужа общения с ними. В другом бракоразводном процессе адвокату с помощью заверенной у нотариуса переписки удалось защитить имущественные права своей клиентки. Муж написал супруге, что купленную в период брака квартиру он оформил на третье лицо. В итоге жилище было признано совместно нажитым имуществом.
Доверяй, но проверяй
По словам сотрудника адвокатского бюро «S&K Вертикаль» Максима Стрильченко, к фиксации прибегают в случаях наличия риска утраты доказательства (например, может быть удалена переписка по электронной почте и в мессенджерах, скорректированы статьи в интернете и т. д.)
— Ситуации, при которых применяют нотариальное обеспечение доказательств в уголовной практике, можно разделить на две группы: это обращение в правоохранительные органы с заявлением о преступлении и защита по уголовному делу, — говорит адвокат Стрильченко.
Фото: ТАСС/Сергей Шлеюк
В первой ситуации заявитель стремится зафиксировать факт наличия письма, сообщения, публикации и их содержание, ведь в противном случае нарушитель, как только узнает о проведении в отношении него доследственной проверки, может принять меры по уничтожению информации.
— При производстве проверки по сообщению о преступлении, сотрудник правоохранительных органов больше доверяет нотариально заверенному документу, не сомневаясь в его достоверности. В ходе следствия информация (при ее сохранности) будет дополнительно зафиксирована с помощью следственных действий. Тем не менее рекомендуется сразу фиксировать информацию с помощью нотариуса, это повысит шансы на возбуждение уголовного дела, и такие документы в дальнейшем могут получить статус доказательства по уголовному делу, — говорит собеседник «Известий».
Страховка для обвиняемого
Если информация такого рода предоставляется в интересах защиты, адвокату следует быть особо бдительным.
Адвокат Стрильченко считает, что не стоит сразу отдавать для осмотра следователю мобильный телефон, на котором может содержаться важное для уголовного дела сообщение. Как показывает практика, устройство может перестать функционировать, сообщение на нем может пропасть, и доказательство будет утрачено.
— Если обвиняемый принесет следователю скриншот такого сообщения без заверения, то у последнего могут возникнут сомнения, так как не установлен источник получения доказательства, а само сообщение могло быть фальсифицировано, — говорить Стрильченко. В подобных случаях он считает фиксацию у нотариуса дополнительной страховкой.
Фото: Depositphotos
— В таком случае происхождение и достоверность доказательства ни у кого не вызовут сомнений. В случае утраты из материалов уголовного дела такого доказательства его можно будет без особого труда восполнить. Так же и с содержанием страницы сайта в интернете: иного способа фиксации доказательства у стороны защиты может и не быть, ведь следователь самостоятельно направляет ход расследования и принимает решение о производстве следственных действий. Значит, ходатайство стороны защиты об осмотре сайта может быть оставлено без удовлетворения, а без фиксации информация может быть утрачена, и только нотариус в этой ситуации может помочь, — говорит адвокат.
Максим Стрильченко обратил внимание на то, что следователь самостоятельно может приобщить доказательство, составить протокол осмотра и зафиксировать информацию. Стороне обвинения помощь нотариуса, таким образом, не нужна.
Стоит отметить, что с 29 декабря текущего года вступают в силу положения закона, которые позволяют осуществить ряд нотариальных действий удаленно. В их число входит и обеспечение доказательств в интернете (так официально звучит название услуги).
Скрины в контакте. Как сделать и отправить скриншот вконтакте на компьютере, ноутбуке, с телефона
Пользователи социальных сетей часто задаются вопросом о том, как заскринить переписку. Это необходимо в случае редкого поведения пользователей, интересных комментариев или важных сообщений. Например, вы договорились через Интернет о споре со своим другом, и он пообещал вам какую-нибудь вещь в случае вашего выигрыша. Если вы боитесь, что об этом условии друг таинственным образом забудет, то достаточно будет предоставить ему сообщения. Функция отправки полученных сообщений не подойдет, так как ее проблематично конвертировать в формат фотографии и публиковать в общем доступе. А как заскринить переписку — сейчас разберем.
Счастливые обладатели операционной системы Windows могут спокойно выдохнуть. Чтобы сфотографировать необходимые сообщения, необходимо сначала их открыть, а затем нажать на кнопку «Print Screen». Она находится в верхней части клавиатуры. Теперь открываем Paint и нажимаем «Правка -> Вставить». Все, вы получили в виде картинки необходимые сообщения. Чтобы их сохранить, переходим в «Файл -> Сохранить как». Это первый способ того, как заскринить переписку.
Однако бывают ситуации, когда он по каким-то причинам не реализуется. Поэтому есть возможность попробовать по-другому. Для запечатления обычных сайтов подойдет любой онлайн-сервис — «Скриншот онлайн». Но на таких сайтах вы точно не найдете, как заскринить переписку в ВК («Вконтакте»), так как они не воспринимают логин или пароль, изначально введенные на локальном компьютере. То есть скриншот делается на удаленном компьютере, что нам не подходит. Тогда остается только единственный способ — специальные программы, которых существует большое количество. Они бывают платными и бесплатными. Многие из них не требуют установки, поэтому удобны в использовании. Для успешного снимка достаточно нажать на несколько которые устанавливаются самим пользователем. Теперь вы знаете все три способа того, как заскринить переписку.
Но не всегда так бывает, что вы сидите за компьютером. Современные мобильные устройства предоставляют возможность заходить в Интернет и активно общаться с друзьями в любой точке покрытия мобильного Интернета. Но интересные сообщения не перестают поступать, поэтому вопрос «Как заскринить переписку на телефоне?», остается открытым. Здесь варианты примерно такие же. На современных мобильных операционных системах Android предусмотрена специальная возможность создания скриншотов без установки дополнительных программ. Достаточно нажать на кнопку блокировки и кнопку, выполняющую роль возвращения к прошлому действию. Надо сказать, что сначала этот маленький трюк может не получиться, так как комбинация окажется ошибочной. Телефон может вместо необходимой команды распознать указание к блокировке экрана. Но если вы нажмете на обе клавиши синхронно, то у вас получится скриншот. И не важно, в какой части меню вы находитесь.
Будьте аккуратны, если вам понадобятся специальные программы, так как они могут содержать вирус или платные рассылки. Каждый телефон или планшет уникален, поэтому более подробную инструкцию можно получить на сайте производителя.
Теперь вы знаете, как заскринить переписку на любом цифровом устройстве и на любом сайте. Как видите, в этом нет ничего сложного.
Бывают моменты, когда необходимо получить скриншот какой-то записи ВКонтакте и в этой статье мы разберемся, как это сделать.
Для этого есть множество как полноценных программ, так и браузерных расширений. Теперь поговорим о самых удобных из них.
Способ 1: FastStone Capture
В данной программе присутствует множество удобных функций для создания скриншотов. дает возможность сделать снимок всего экрана или определенной области, имеет поддержку скроллинга и многое другое. Сделать скриншот ВКонтакте с ее помощью очень просто:
- Захват активного окна;
- Захват окна/объекта;
- Захват прямоугольной области;
- Захват произвольной области;
- Захват всего экрана;
- Захват окна с прокруткой;
- Захват фиксированной области;
- Видеозапись.
Способ 2: DuckCapture
Еще одна программа для создания снимков экрана. Она довольно простая и обладает интуитивно понятным интерфейсом. Имеет те же возможности, что и предыдущий вариант, однако не хватает редактора изображений, хотя бы самого простого.
Делать ею скрины также просто:
Способ 3: Awesome screenshot
Это браузерное расширение для создания скринов в браузере. Оно подходит для , и . С помощью него можно делать снимки экрана не только видимой части страницы, но и с прокруткой. Расширение само прокрутит открытую вами страницу.
Сделать скриншот ВКонтакте очень просто:
Способ 4: Screenshot Webpages
Еще одно расширение для создания скриншотов в браузере. Оно подходит как для Google Chrome, так и для .
Алгоритм создания скриншота ВКонтакте таков:
Перед тем, как использовать браузерное расширение для создания скринов, обязательно отключите компьютерные программы для создания снимков экрана. Иначе будет происходить конфликт и скрин сделать не выйдет.
Заключение
Мы с вами рассмотрели несколько вариантов для создания скриншотов ВКонтакте. Вам осталось лишь выбрать, что больше подходит для ваших нужд.
Всем привет. Оказывается, многие даже и не предполагают, как отправить скриншот в вк через компьютер и телефон, а ведь эта казалось бы небольшая фишка нужна в очень многих случаях. И сегодня я расскажу вам, как это сделать быстрее и проще всего, используя несколько проверенных методов.
Я не буду распинаться о том, как сделать скриншот, так как подробнее я описывал об этом в своей . Но если вы этого не знаете, то обязательно прочитайте.
Способов это сделать целая куча, как и встроенных, так и программных. Но я не рекомендовал бы это дело через старый добрый Paint. Ко всему моему уважению, этот метод уже актуален также, как сейчас Nokia 3310 или Siemens A35, если вы понимаете, о чем я говорю. Пользуйтесь специальными программами для создания снимков экрана. Лично мне в этом плане больше всего нравится программа LightShot и Joxi .
Отправляем снимок экрана прикрепленным файлом
Самый простой и в то же время самый неудобный на мой взгляд способ — это отправлять всё посредством прикрепленных файлов. Для этого достаточно сделать этот самый снимок и сохранить его в формате JPG.
После этого заходите в любой диалог или беседу в ВК, нажимаем на значок скрепки и выбираем пункт «Фотография» . Также мы можем нажать на значок фотоаппарата и также выбрать картинку. Отличие этих двух пунктов только в том, что в случае со скрепкой вы можете выбрать картинку не только с компьютера, но и из любого вашего альбома вконтакте, а также сделать снимок на веб-камеру.
Если вам принципиально, чтобы качество не терялось, хотя для скриншотов это врядли применимо, то можете отправлять фотографии как документ. Для этого снова нажмите на значок скрепки и выберите пункт «Документ» . А дальше точно также выбираем картинки с нашего компьютера.
Быстрая отправка скриншотов в вк
Этот способ мне нравится больше всего. Он быстрый, удобный, очень практичный и отправляет снимки сразу. Можно пользоваться им как и с помощью простого создания снимков экранов без программ, так и с помощью специального приложения. Я буду показывать всё это дело на примере программы LightShot. Скачать программу можете отсюда , она полностью бесплатная.
Когда вы все установите, можем приступить к отправке.
Теперь, нажав на эту ссылку, любой человек сможет увидеть изображение, которое вы отправили. Но минус данного способа в том, что изображение подгружается с отдельного сервера, поэтому при слабом интернете загрузка может занять длительное время. Но есть способ еще быстрее и лучше, который делает всё сразу и без лишних манипуляций.
- Сделайте скриншот нажатием всё той же клавиши принтскрин и выберите область, которую вы хотите отправить.
- Теперь, не нажимая никаких иконок, просто скопируйте фрагмент нажатием комбинации клавиш CTRL+C .
- Теперь, снова идите в сообщения или чат и вставляйте скрин с помощью нажатия комбинации CTRL+V . После этого отправляйте всё как обычно. Здесь вы можете видеть, что никакой ссылки не появляется, а доступна только сама картинка.
Преимущество данного способа в том, что на сей ра изображение вставляется не на отдельный сервер и не открывается в отдельном окне. Поэтому всё происходит очень быстро и весь процесс занимает буквально несколько секунд.
Отправка через Облако
Конечно, это далеко не самый удобный способ, но и он имеет право на жизнь. Единственным плюсом здесь наверное можно назвать то, что скриншоты можно уложить в одной ссылке. Правда не сказать, что это крутая функция. Давайте рассмотрим ее на примере яндекс диска.
Как отправить скриншот во вконтакте с телефона на Android
В этом случае также нет никаких сложностей. Вам достаточно в зависимости от его модели и отправить его.
Простая отправка
Вам никто не помешает точно также зайти в сообщения, в чат или на стену группы и нажать на ту же самую скрепочку, после чего нужно будет выбрать раздел «Фотографии» и выбрать сохраненное изображение в памяти вашего смартфона на Android или айфоне.
Мобильное приложение LightShot
Самое интересное, что в Google Play вы также сможете найти отличное приложение Lightshot, благодаря которому вы не только сможете делать скриншоты всего экрана целиком, но и обрезать только нужную область. Поэтому установите программу и рассмотрим все на живом примере.
Теперь, когда фрагмент обрезан. У вас будет 3 пути:
Итог
Не вижу смысла в том, чтобы писать еще пять способов, как отправить ваш скриншот в вк через компьютер, так как и этих трех вам хватит за глаза. Лично мне больше всего понравился второй способ, с простыми копированием и вставкой, так как он самый быстрый и удобный. Но возможно, что вы со мной не согласитесь, поэтому хотелось бы узнать у вас, какой из методов больше всего понравился именно вам.
Ну а на этом я с вами прощаюсь. Надеюсь, что моя статья была вам интересна. Хотите быть в курсе всего нового и интересного на блоге? Обязательно подпишитесь на мои уведомления и паблики в социальных сетях. Буду ждать вас снова. Удачи вам. Пока-пока!
С уважением, Дмитрий Костин
1. Что такое скриншот?
2. Как сделать скриншот?
4. 4 шага создания скриншота.
1. Что такое скриншот?
Скрин, скриншот (от англ. «screen» — экран) — это снимок с экрана. Снимок того, что вы видите в данный момент на мониторе вашего компьюьера. Делая скриншот, вы как бы фотографируете изображение с монитора.
2. Как сделать скриншот?
Скриншоты можно делать с помощью специальных програмам, например snagit , одна из самых простых и удобных. Программы, в первую очередь, необходимы тем, кому приходится много и часто делать скриншоты. Найти и скачать программы можно в интернете. Если у вас нет программы, или вы делаете скриншоты не часто, рассмотрим здесь, как сделать скриншот вручную.
Для этого надо нажать клавишу Prt Scr (Print Screen) и скриншот скопируется в буфер обмена.
При этом, при нажатии только клавиши Prt Scr (Print Screen) «сфотографируется» весь экран целиком (см. скрин внизу с «обрамлением» из иконок и вкладок).
Если же вы нажмете одновременно клавиши Alt + Print Screen , тогда получится снимок только активного окна, без лишних деталей.
3. О форматах сохранения скриншота.
Специалисты советуют сохранять скриншоты:
текст — в формате PNG
текст + картинка — в формате PNG
картинка — в формате JPEG
Тип формата вы можете выбрать при сохранении файла.
4 шага создания скриншота.
Шаг 1. Нажимаем Print Screen или Alt + Print Screen ,
затем идем в любой редактор изображений: Paint, Abode Photoshop и другие.
Для примера рассмотрим, как сделать скрин в редакторе Paint , который имеется практически на каждом компьютере.
Шаг 2. Открываем Paint: Пуск — Программы — Стандартные — Paint
Шаг 3. Нажимаем кнопку Вставить (или жмем на клавиатуре клавиши Ctrl+v).
Картинка вставляется из буфера обмена. Все, скриншот сделан.
Шаг 4. Сохраняем скриншот.
Чаще всего это делается так Файл -> Сохранить как. Присваиваете файлу имя и сохраняете на своем компьютере,
выбирая формат сохранения согласно п. 3:
текст — в формате
PNG
текст + картинка — в формате
PNG
картинка — в формате JPEG
Тип формата выбирается при сохранении файла.
5. Как вставить скриншот в сообщение?
Скриншот вставляется в сообщение, как картинка с вашего компьютера.
Если вы хотите сделать скрин не со всего изображения на экране, а лишь сделать фрагмент скриншота (т.е. часть текста с экрана или картинку), то вы можете вырезать нужный «кусок» следующим образом:
После нажатия кнопки Вставить (шаг 3 создания скриншота), вы увидите на экране все изображение, которое «сфотографировали». Нажмите далее кнопку Выделить, выделите курсором нужным фрагмент и нажмите кнопку Обрезать.
На экране останется только выделенная часть изображения. Далее сохраните файл (шаг 4).
И получаем вырезанную картинку
И еще. Если вы работаете с программой Dropbox
, то можете делать скриншоты с ее помощью. Dropbox снимает скрины по умолчанию в формате PNG, и отправляет скрин в облако. Надо только поставить галочку в настройках.
Другие форматы можно выбрать в приложении Ножницы (%windir%\system32\SnippingTool.exe) и сохранять при необходимости вырезку в любом формате.
Как в контакте отправить скриншот. Как сделать и отправить скриншот вконтакте на компьютере, ноутбуке, с телефона
Как вставить скрин в диалог ВК, некоторые пользователи испытывают трудности в этом вопросе. В данной статье, мы рассмотрим простые способы отправки скринов как с компьютера, так и с телефона. А так же узнаем, что такое скриншоты и какие задачи пользователей они решают.
Коротко,что такое скриншоты и зачем они нужныЗдравствуйте друзья! Что такое скриншоты? Это уникальные изображения, которые были сделаны с помощью программы для создания скриншотов, с экрана компьютера (телефона). Скриншоты нужны в основном для сайтов (блогов) или просто для отправки пользователям сообщения в ВК, почтой и так далее. Приведём несколько примеров.
Например, Вы имеете свой блог и пишете на него статьи. Вам необходимо показать определенные действия, которые сложно описать текстом. Гораздо проще сделать снимок с экрана и показать стрелками порядок выполнения действий.
Или же Вы общаетесь с пользователями в ВК и хотите ему отправить снимок своего экрана. Скриншот самый быстрый способ отправки фотографий, Вы можете сделать снимок фото с экрана и отправить своему коллеги просто ссылку. Как вставить скрин в диалог ВК – мы это сделаем в следующей части статьи.
Итак, чтобы Вам вставить скрин в сообщение ВК сначала нужно установить программу для создания скриншотов Joxi, Яндекс или другую утилиту. Иначе, скриншот сделать будет невозможно. Дело в том, что не у всех в операционных системах Windows, работает клавиша Print Screen. С помощью этой клавиши захватывается область на экране с компьютера.
После получения скриншота мы можем перейти к решению вопроса, как вставить скрин в диалог ВК.
Как отправить скрин в ВК с компаЧтобы отправить скрин в ВК с компьютера запустите программу для создания скриншотов и нажмите клавишу – Preent Scrin либо CTRL+Print. (На примере мы будем рассматривать – Joxi). Затем выделяете ту часть экрана компьютера, которую хотите сохранить. Тогда скриншот появится на рабочем столе компьютера.
А теперь его можно отправить сообщением, в ВК. Как это сделать? Откройте Вашу страницу Вконтакте, раздел сообщения. Потом выбираете любой диалог и нажимаете на «прикрепить фото», чтобы загрузить срин с компьютера. (Рисунок 1)
Выбираете с рабочего стола скрин и отправляете его в диалоги. Таким образом, Вы отправите скрин Вашему другу, знакомому в диалог ВК.
Как отправить скрин в ВК с телефонаЕсли Вы пользуйтесь Интернетом на телефоне, то там ограниченный функционал работы в социальных сетях. Поэтому существует лёгкий вариант отправить скрин ВК с телефона. Откройте свою страницу в ВК и раздел сообщения в левом меню панели управления. Затем нажмите на значок скрепки далее «фото с устройства» в разделе диалога и отправьте скриншот, нажатием кнопки «отправить» (Рисунок 2).
Через несколько секунд, Ваш собеседник получит новое сообщение в видео изображения.
Нажмите на кнопку копировать левой кнопкой мыши, затем перейдите в диалог ВК и правой кнопкой мыши вставьте её в указанное поле, чтобы впоследствии отправить. (Рисунок 4).
Таким образом, Вы отправите пользователю скрин со ссылкой на эту программу. Кстати, ссылку можете отправить через любой ресурс – скайп, электронная почта, любая другая социальная сеть.
Как загрузить скриншот в альбом ВК? Всё просто. Заходите в раздел фотографии на своей странице Вконтакте, потом выбираете свой альбом для загрузки скриншота. Если у Вас нет альбома, его можно создать. Для этого, в этом же разделе нажимаете «создать альбом» пишите название, описание, и на завершающем этапе создайте новый альбом. В этом случае, уже можно добавить скрин.
Нажмите добавить фотографии, и загрузите с рабочего стола компьютера скриншот, нажатием кнопки «открыть» (Рисунок 5)
После этого дождитесь, пока скрин загрузится в Ваш альбом ВК.
Как загрузить скрин в ВК на стенеЕсли Вы хотите загрузить скрин в ВК на стене для этого снова воспользуйтесь своей страницей Вконтакте. Зайдите на главную страницу, и там где обычно пишите запись, найдите значок «фотоаппарата». Нажмите на него, и перед Вами откроется два варианта загрузки скриншотов – с компьютера, это если нажать на «загрузить фотографию» или из своих альбомов, где были раньше опубликованы скриншоты.
ЗаключениеВ этой статье мы рассмотрели вопрос — как вставить скрин в диалог ВК. Действительно, сделать это проще некуда, если Вы будете использовать эти простые советы. Делая скриншоты, Вы можете создавать уникальные изображения и тем самым наполнять свою страницу Вконтакте различными картинками. Удачи Вам!
С уважением, Иван Кунпан.
P . S Эти статьи помогут Вам сделать скриншоты и сохранить их на компьютере ( , ).
Получайте новые статьи блога прямо себе на почту. Заполните форму, нажмите кнопку «Подписаться»
Стандартный способ
Итак, для начала немного теории. Снимок экрана — это изображение, на котором отображен экран пользователя. На картинке он выглядит точь-в-точь так же, как видите его вы на своем мониторе. Как уже было отмечено, такой снимок может использоваться для демонстрации работы какого-нибудь приложения или в учебных целях. Еще нужно добавить, что нет разницы, как сделать скриншот: в «ВК» или на любом другом сайте. Технология, с помощью которой фотографируется экран таким, каким его видит пользователь, одинакова для всех случаев.
Итак, наши компьютеры разработаны таким образом, что в каждом из них предусмотрен «стандартный» способ сделать картинку экрана. Для этого нужно лишь найти на своей клавиатуре кнопку «PrintScreen» (на ноутбуке Lenovo она назывется, к примеру, «PrtScr») и нажать ее. После того как сделали это, в вашего компьютера попал снимок экрана в полном размере. Далее наша задача заключается в том, чтобы увидеть его, получить в материальном понимании.
С этой целью откройте любой (наиболее распространенными являются Photoshop и Paint, можете выбрать один из них). Далее нажмите «Создать новый» и «Вставить» (или зажмите «горячие» клавиши Ctrl + V). На экране вместо белого полотна появится ваш снимок. Далее можно редактировать его так, как будет удобнее.
Благодаря этой инструкции вы знаете, как сделать скриншот диалога «ВК» стандартным способом. Далее рассмотрим то, как отправлять скриншоты своим друзьям, а еще то, как данную операцию можно осуществить при помощи специализированной программы, делающей работу с фотографиями рабочего стола гораздо удобнее.
Как отправить скриншот?
Итак, после помещения снимка в поле графического редактора настало время сохранить фото. Делается это просто: открываете меню «Файл», затем «Сохранить как» и выбираете название скриншота и адрес, куда он будет помещен. В дальнейшем, чтобы перекинуть фотографию, которую вы сделали ранее, можно пользоваться почтой, социальной сетью, Skype и другими программами. В данном аспекте ваш выбор зависит исключительно от того, какой из них вы привыкли пользоваться. Это уже намного проще, чем вопрос о том, как сделать скриншот в «ВКонтакте».
Делаем снимок при помощи специальной программы
Процедура копирования снимка экрана при помощью клавиши в буфер обмена с дальнейшем его сохранением проста. Правда, этот механизм малоудобен в том случае, если возникла необходимость создания серии скриншотов. В таком случае на вопрос о том, ВК, следует ответить: с помощью дополнительного софта.
Программ, которые способны выполнить такую задачу, достаточно много. Например, это FastStone Captur, Screenshot Captor, PicPick, LightShot, Joxi и другие. Каждая представляет собой комплексное программное обеспечение, способное эффективно снимать экран. Некоторые даже могут сохранять фото в готовом виде, загружая на сторонние сервера и выдавая вам только ссылку. Правда, в плане удобства использования каждая из таких программ индивидуальна, и не факт, что вам все они подойдут.
Редактирование снимка экрана
Итак, мы описали два способа того, как сделать скриншот в «ВК». Теперь уточняем по поводу того, как осуществляется редактирование (изменение) фотографии вашего экрана. Такая задача может предстать перед вами в том случае, если, например нужно изменить какие-то данные: закрасить что-нибудь, выделить, изменить, применить какой-нибудь эффект и так далее. В таком случае обязательным будет использование графического редактора.
То есть, пользуясь первым методом (через буфер обмена), вы вставляете фото в редактор и можете работать над ним; а в случае с применением второй методики (специальная программа) достаточно будет открыть уже сохраненный снимок и провести над ним необходимые действия. Опять же все зависит от сложности задачи: банальную закраску можно сделать и в Paint, а вот «фальсифицировать» что-либо нужно лишь в Photoshop, поскольку функционал там в разы шире.
Видите, вопрос о том, как сделать скриншот в «ВК», не является чем-то сложным. Делается это просто и быстро. Попробуйте сами!
Бывают моменты, когда необходимо получить скриншот какой-то записи ВКонтакте и в этой статье мы разберемся, как это сделать.
Для этого есть множество как полноценных программ, так и браузерных расширений. Теперь поговорим о самых удобных из них.
Способ 1: FastStone Capture
В данной программе присутствует множество удобных функций для создания скриншотов. дает возможность сделать снимок всего экрана или определенной области, имеет поддержку скроллинга и многое другое. Сделать скриншот ВКонтакте с ее помощью очень просто:
- Захват активного окна;
- Захват окна/объекта;
- Захват прямоугольной области;
- Захват произвольной области;
- Захват всего экрана;
- Захват окна с прокруткой;
- Захват фиксированной области;
- Видеозапись.
Способ 2: DuckCapture
Еще одна программа для создания снимков экрана. Она довольно простая и обладает интуитивно понятным интерфейсом. Имеет те же возможности, что и предыдущий вариант, однако не хватает редактора изображений, хотя бы самого простого.
Делать ею скрины также просто:
Способ 3: Awesome screenshot
Это браузерное расширение для создания скринов в браузере. Оно подходит для , и . С помощью него можно делать снимки экрана не только видимой части страницы, но и с прокруткой. Расширение само прокрутит открытую вами страницу.
Сделать скриншот ВКонтакте очень просто:
Способ 4: Screenshot Webpages
Еще одно расширение для создания скриншотов в браузере. Оно подходит как для Google Chrome, так и для .
Алгоритм создания скриншота ВКонтакте таков:
Перед тем, как использовать браузерное расширение для создания скринов, обязательно отключите компьютерные программы для создания снимков экрана. Иначе будет происходить конфликт и скрин сделать не выйдет.
Заключение
Мы с вами рассмотрели несколько вариантов для создания скриншотов ВКонтакте. Вам осталось лишь выбрать, что больше подходит для ваших нужд.
Пользователи социальных сетей часто задаются вопросом о том, как заскринить переписку. Это необходимо в случае редкого поведения пользователей, интересных комментариев или важных сообщений. Например, вы договорились через Интернет о споре со своим другом, и он пообещал вам какую-нибудь вещь в случае вашего выигрыша. Если вы боитесь, что об этом условии друг таинственным образом забудет, то достаточно будет предоставить ему сообщения. Функция отправки полученных сообщений не подойдет, так как ее проблематично конвертировать в формат фотографии и публиковать в общем доступе. А как заскринить переписку — сейчас разберем.
Счастливые обладатели операционной системы Windows могут спокойно выдохнуть. Чтобы сфотографировать необходимые сообщения, необходимо сначала их открыть, а затем нажать на кнопку «Print Screen». Она находится в верхней части клавиатуры. Теперь открываем Paint и нажимаем «Правка -> Вставить». Все, вы получили в виде картинки необходимые сообщения. Чтобы их сохранить, переходим в «Файл -> Сохранить как». Это первый способ того, как заскринить переписку.
Однако бывают ситуации, когда он по каким-то причинам не реализуется. Поэтому есть возможность попробовать по-другому. Для запечатления обычных сайтов подойдет любой онлайн-сервис — «Скриншот онлайн». Но на таких сайтах вы точно не найдете, как заскринить переписку в ВК («Вконтакте»), так как они не воспринимают логин или пароль, изначально введенные на локальном компьютере. То есть скриншот делается на удаленном компьютере, что нам не подходит. Тогда остается только единственный способ — специальные программы, которых существует большое количество. Они бывают платными и бесплатными. Многие из них не требуют установки, поэтому удобны в использовании. Для успешного снимка достаточно нажать на несколько которые устанавливаются самим пользователем. Теперь вы знаете все три способа того, как заскринить переписку.
Но не всегда так бывает, что вы сидите за компьютером. Современные мобильные устройства предоставляют возможность заходить в Интернет и активно общаться с друзьями в любой точке покрытия мобильного Интернета. Но интересные сообщения не перестают поступать, поэтому вопрос «Как заскринить переписку на телефоне?», остается открытым. Здесь варианты примерно такие же. На современных мобильных операционных системах Android предусмотрена специальная возможность создания скриншотов без установки дополнительных программ. Достаточно нажать на кнопку блокировки и кнопку, выполняющую роль возвращения к прошлому действию. Надо сказать, что сначала этот маленький трюк может не получиться, так как комбинация окажется ошибочной. Телефон может вместо необходимой команды распознать указание к блокировке экрана. Но если вы нажмете на обе клавиши синхронно, то у вас получится скриншот. И не важно, в какой части меню вы находитесь.
Будьте аккуратны, если вам понадобятся специальные программы, так как они могут содержать вирус или платные рассылки. Каждый телефон или планшет уникален, поэтому более подробную инструкцию можно получить на сайте производителя.
Теперь вы знаете, как заскринить переписку на любом цифровом устройстве и на любом сайте. Как видите, в этом нет ничего сложного.
Во время общения в социальных сетях довольно часто возникает необходимость быстро переслать собеседнику необходимую информацию. Удобнее всего это сделать с помощью скриншота, однако для многих пользователей эта задача остается непосильной. На самом деле в этом нет ничего сложного. В статье ниже мы разберемся с тем, как сделать скрин в ВК, а затем отправить его собеседнику.
Фотографируем экран в считанные секунды
Для создания скриншота на клавиатуре каждого ПК или ноутбука в правом верхнем углу существует кнопка «Print Screen». После ее нажатия в оперативной памяти устройства сохраняется фото экрана компьютера. На мобильных устройствах нового поколения в панели управления также присутствует аналогичная кнопка, нажав на которую, можно создать фото экрана. На телефонах и планшетах скриншот автоматически помещается системой в один из альбомов «Галереи».
Совет: если на мобильном устройстве отсутствует кнопка «Print Screen», то для фото экрана необходимо одновременно зажать кнопку выключения устройства и понижения громкости.
Делаем скриншот ВК
Создание скрина страницы в Вконтакте, естественно, подразумевает открытие в браузере этой социальной сети. После осуществления данной процедуры необходимо перейти на нужный профайл или посетить необходимую группу. Далее нажимаем «Print Screen». Вуаля – все готово. С тем, как делать скрин в ВК, разобрались. Перейдем к тому, как отослать эту картинку своему другу.
Делитесь скриншотами без ограничений!
Итак, теперь о том, как вставить скрин в диалог ВК. Для этого нам потребуется совершить пару простейших манипуляций. Сначала открываем диалог с пользователем. Затем наводим курсор на новое сообщение и нажимаем правую кнопку мыши. В контекстном меню выбираем пункт «Вставить» и ждем, пока система загрузит фото. После завершения загрузки нажимаем на кнопку «Отправить». Все, скриншот собеседнику отправлен.
Однако, иногда пользователи задаются вопросом «Как скинуть скрин в ВК, на котором нет вкладок, ссылок и других личных данных?». Для этого после фотографирования экрана потребуется открыть любой, даже самый простейший графический редактор. В меню нажимаем на копку «Вставить» и редактируем полученное изображение как душе угодно. После сохраняем результат и в виде обычной картинки отсылаем в диалоге выбранному собеседнику.
Как вставлять скрин в вк
Правду говорят, что лучше один раз увидеть, чем сто раз услышать. Особенно это касается пользования компьютером. Ведь ситуации, когда дословно нужно передать информацию, а перенабирать текст не хочется, или когда на экране возникает непонятное уведомление, и нужно показать его компьютерщику, возникают довольно часто.
С целью экономии денег компьютерные разработчики придумали скриншоты – фотографии рабочего стола. А их передача в социальных сетях пользуется огромной популярностью. В этой статье мы разберёмся, как вставить скриншот в диалог вконтакте.
Как вставить скрин в диалог вк
Самый простой и быстрый способ вставить скрин(скриншот) в диалог в вк:
- Для начала перейдите на вашем пк туда что вы хотите заскринить(сделать скриншот)
- Далее на клавиатуре найдите клавишу Prt Scr и нажмите ее
- Перейдите в диалог в вк, с доступным окном для ввода текста
- Нажмите на клавиатуре комбинацию клавиш Ctrl+V
- Готово скриншот вставится сам все занимает меньше 1 секунды
Есть и другие способы вставить скрин в сообщение вконтакте : Специальные клавиши
На клавиатуре персонального компьютера или ноутбука обязательно есть клавиша Print Screen. Большинство производителей подают её в сокращённом виде Prt Sc, а иногда прописывают в следующих комбинациях PrtScr/SysRq или PrtScr/ins.
Размещение зависит от фирмы изготовителя клавиатуры, но чаще всего по центру или в правом верхнем углу, рядом с блоками кнопок Scroll Lock и Pause Break или после клавиш F9, F10, F11.
- Нажав её, вы зафиксируете абсолютно всю информацию, которая есть у вас на экране.
- Для сохранения картинки используют разные виды графических редакторов.
- Самый простой из них – Paint (Пуск – Программы – Стандартные – Paint).
- Вставляем документ комбинацией клавиш Ctrl+V, Ctrl+S сохраняем и при этом выбираем ту папку, в которой рисунок будет находиться постоянно.
- Вконтакте заходим в диалог с тем человеком, которому нужно переслать скриншот. Для этого выбираете иконку с фотографией собеседника.
- В новом диалоговом окне внизу рядом с текстом «Ввести сообщение» нажимаете изображение скрепки (Прикрепить) и выбираете фотографию.
- Далее – Отправить. Надеюсь, вы нашли ответ на вопрос как вставить скрин в диалог вк из клавиатуры без программ
Простой способ вставить скришот в диалог вконтакте
Комбинацию клавиш порой бывает трудно запомнить, поэтому рассмотрим простой вариант, как вставить скрин в диалог вк.
- Нажать кнопку Print Screen.
- Если у вас программное обеспечение Windows XP или Vista, в графическом редакторе Paint левой кнопкой мыши нажимаете Правка – Вставить; если Windows 7 или Windows 10 – то правой кнопкой мыши нажмите «Вставить».
- При нажатии «Закрыть» выберите путь, где будет храниться скриншот.
- Открыть диалоговое окно переписки способом, описанным выше, левой кнопкой мыши выбрать изображение скрепки, нажать «Фотографию».
- Отправить адресату.
Как вставить скиншот в вк без клавиатуры? Все очень просто воспользуетесь экранной клавиатурой, она находится Пуск-все программы-стандартные-специальные возможности.
Как видите, нет ничего проще отправления скриншота в социальной сети вконтакте. Удачного общения!
Здравствуйте, друзья! Вам знакома ситуация, когда нужно показать человеку, который находится не рядом с Вами изображение, которое Вы видите на компьютере? В этой статье мы и затронем данную тему.
Скриншот – это снимок экрана компьютера, ноутбука, телефона или планшета, который в точности покажет картинку, которую Вы видите на своем устройстве.
Сделать фотографию страницы Вконтакте может понадобиться, если Вы обращаетесь в тех поддержку. Видя, как отображается у Вас на устройстве страница с проблемой, вам помогут быстрее ее решить. А может Вам нужно сделать скрин личной переписки, или страницы с заинтересовавшим Вас товаром.
В общем, давайте научимся, как можно сделать снимок экрана в вк используя различные устройства, и как отправить его в виде документа человеку, или быстро скинуть сделанный скрин сообщением.
Как сделать скриншот в вк на компьютере
Если Вам нужно сделать снимок экрана с компьютера или ноутбука, тогда откройте Вконтакте нужную страницу. Для примера, сделаю фотку сообщений в вк.
Теперь найдите на клавиатуре кнопку «Print Screen» и нажмите на нее. Это может быть отдельная кнопка, или она может быть на одной клавише с «SysRq». Также название ее может быть написано не полностью, а «Print Scr», или «Prt Sc».
После того, как Вы на нее нажмете, ничего не произойдет.
Создайте новый документ MS Word и вставьте в него только что сделанный снимок – нажмите Ctrl+V.
Затем сохраните документ со скрином на компьютере или ноутбуке в подходящей папке.
Я сохранила его прямо на рабочем столе.
Не обязательно создавать новый документ со скриншотом, об этом я расскажу дальше. Но такой способ может пригодиться, если придется отправлять снимки экрана страниц Вконтакте в службу поддержки.
Как отправить скрин экрана с компьютера
Как сделать мы разобрались, но если у Вас неофициальная переписка, и Вы хотите сразу отправить скриншот в вк, тогда можно не создавать документ в Word.
Снимаем страницу кнопкой «Print Screen». Затем откройте диалог с человеком, которому хотите отправить снимок экрана, поставьте курсор в поле для ввода сообщения и нажмите Ctrl+V. К сообщению будет прикреплен только что сделанный снимок. Отправьте его, нажав на стрелочку.
Мы просто вставили скриншот и отправили его, и теперь человек сможет увидеть ту картинку, которая отображается у Вас на компьютере или ноутбуке.
Теперь расскажу, что делать с Вордовским файлом, в котором у Вас сохранен снимок. Я назвала его «Doc1» и сохранила на рабочем столе – это мы делали в первом пункте.
Откройте переписку с пользователем, кому нужно отправить фотку с ноутбука или компьютера, и нажмите на скрепочку для прикрепления файлов. Выберите из открывшегося списка «Документ».
Теперь нажимаем на кнопку «Загрузить новый файл».
Откроется проводник. Найдите в нем папку, куда сохранили документ, выделите его и нажмите «Открыть».
Файл будет прикреплен к переписке. Отправьте сообщение.
Подробнее прочесть про документы Вконтакте и работу с ними можно в статье, перейдя по ссылке.
Создание снимков на телефоне с Андроид
Если Вы заходите в свой профиль Вконтакте с телефона или планшета, тогда сделать скриншот можно следующим образом. Откройте на экране устройства ту страницу, которую нужно сфотографировать.
Дальше все зависит от модели Вашего телефона или планшета. Сделать скрин можно несколькими способами:
- зажать кнопку питания и громкости (уменьшения звука),
- или зажать кнопку питания и домой,
- или зажать кнопку питания и свернуть все окна.
У меня, например, в области уведомлений есть кнопочка «Снимок экрана». Нажав на нее, получается фотография текущего экрана.
После этого, фотка будет сохранена на устройстве. У меня в «Галереи» появилась папка, которая так и называется «Скриншоты».
Как отправить снимок с телефона на Андроид
Теперь разберемся, как с телефона или планшета отправить другому пользователю только что сделанный скриншот в вк.
Найдите диалог с нужным человеком и нажмите на него.
Дальше, слева от поля для ввода сообщения, нажмите на скрепочку для прикрепления файлов.
Откроется следующее окно. Сверху посмотрите, чтобы был активен значок «Фото/видео». Чуть ниже должна быть выбрана вкладка «Фото». Найдите в списке с фотографиями скриншот и нажмите на него. Если у Вас несколько, выбирайте сразу и их. После этого нажмите на кнопку «Прикрепить».
Фотография будет прикреплена к сообщению. Жмите на стрелочку справа внизу, чтобы отправить фото.
Думаю, все у Вас получилось. Теперь Вы можете или описать свою проблему службе поддержки более точно, прикрепив в сообщении файл со снимками экрана, или показать другому пользователю, что Вы видите на странице Вконтакте на своем устройстве.
Довольно часто пользователям социальной сети необходимо делать скриншоты Вконтакте. Цель может быть самая разная — изображение диалога, страницы пользователя, загруженных данных и т.д. Когда вы отправляете жалобу на пользователя, желательно приложить скрин, подтверждающий нарушение правил.
Ниже я научу Вас, как делать качественные скриншоты, и покажу, как работать с программами, которые используются для этой цели.
Классический вариант — PrintScreen
На любом компьютере и ноутбуке есть кнопка PrtScr . Она располагается в верхнем ряду клавиш, ближе к правой стороне.
Клавиша PrtScr для создания скриншотов
В зависимости от настроек вашего ПК, клавиша может работать самостоятельно, либо в паре с другими управляющими клавишами. Вот основные сочетания:
- Ctrl + PrtScr
- Shift + PrtScr
- Alt + PrtScr
- Fn + PrtScr
Последний вариант для ноутбуков. Именно на их клавиатурах есть специфическая кнопка Function (сокращенно Fn).
В независимости от того, где вы хотите сделать скриншот, достаточно нажать на кнопку PrtScr отдельно, либо в сочетании с одной из управляющих клавиш. Текущее изображение вашего экрана будет сфотографировано, и помещено в буфер обмена.
Теперь Вам нужно открыть любой редактор графических файлов. В Windows для этой цели, по умолчанию используется программа Paint . Создайте там новый документ, и вставьте изображение из буфера. Нажатием клавиш Ctrl+V , либо выбрав в меню команду » Вставить «.
Изображение будет в вашем распоряжении. Можете редактировать, сохранять его, и использовать в своих целях.
Пример скриншота, сделанного с помощью функции PrtScr
Для большинства задач, этой функции вполне достаточно. Но делать скриншоты таким образом — не самое приятное занятие. Во-первых, приходиться вручную открывать редактор. И если у Вас нет многофункционального Photoshop, то в стандартном Paint, функции редактирования будут сильно ограничены.
Поэтому для создания скриншотов для Вконтакте, и не только, опытные пользователи прибегают к использованию сторонних программ. Ниже я покажу Вам две из них — я сам долгое время использую их в работе. В том числе и для подготовки этих инструкций.
Делаем скриншот в ВК, с помощью программы LightShot
Почему этот вариант попал ко мне в обзор? Здесь есть очень удобная функция. После создания скриншота, вы можете быстро загрузить его в файловое хранилище, предоставляемое разработчиками. Получить ссылку, и опубликовать ее. Весь процесс занимаем пару секунд.
Скачать программу можно с нашего сайта. Ссылка ниже:
Устанавливаем и запускаем. По сути, стандартных настроек Вам должно быть достаточно. Теперь программа запускается при загрузке компьютера, и клавиша PrtScr начинает работать для создания скрина именно в LightShot. Если хотите назначить другие сочетания клавиш, щелкаем правой кнопкой мыши по значку программы в трее, затем выбираем » Настройки «, вкладка » Горячие клавиши «. Вносим изменения и сохраняем.
Теперь давайте попробуем сделать скриншот моей страницы Вконтакте, быстро загрузить изображение на сервер, и отправить его в личном сообщении.
Открываем на экране нужные элементы. Щелкаем по кнопке PrtScr, либо снова находим в трее LightShot, и в меню выбираем пункт » Сделать скриншот «. Либо просто щелкните на значок. Эффект будет тот же
Экран потемнеет, а рядом с курсором будет подсказка » Выберите область «. Теперь нужно щелкнуть курсором в нужной области экрана, зажать левую кнопку мыши, и вести курсор по экрану, выделяя нужную область. Когда закончите, отпустите кнопку мыши.
Картинка зафиксируется. Отредактировать ее размер можно и после создания. По бокам есть маркеры, передвигая которые, можно подогнать нужную область. После этого, в правом блоке выделенной области появиться дополнительное меню. Здесь можно отредактировать скрин на лету, добавить нужные элементы, либо перейти к процессу сохранения картинки.
Нас сейчас интересует значок в виде облака и стрелки. Нажмите на него, для загрузки файла на сервер. В правом нижнем углу экрана появиться окно, где будет доступна ссылка на ваш скриншот. Кнопка » Открыть «, позволит перейти к картинке в браузере. Мы же нажмем » Копировать «, и попробуем поделиться файлом в ВК.
Перейдем на свою страницу, вставим ссылку в блоке создания нового поста, и подождем пару секунд. Изображение автоматически загрузиться — теперь можно публиковать.
Согласитесь, это очень удобно. Поэтому LightShot — моя рекомендация для создания и публикации скриншотов на лету.
Пробуем создать, отредактировать и отправить скрин в ВК, с программой SnagIt
Еще одна программа, которой я активно пользуюсь в работе. В ней есть встроенный редактор, который автоматически запускается после создания скриншота. И среди элементов оформления присутствуют очень важные штучки — номера шагов, стрелки, примечания и т.д.
Кроме этого, SnagIt умеет не только делать скрины на лету, но и записывать короткие видео. Пример вы можете посмотреть у нас на сайте — в каждой статье есть короткие видео подсказки.
Ниже я выкладываю ссылку на установочный файл, триальной версии программы. Вы всегда можете купить полную версию, на сайте разработчика. А для наших целей хватит бесплатной версии.
Устанавливаем программу. После этого, клавиша PrtScr, будет автоматически запускать захватчик экрана SnagIt.
Итак, давайте попробуем сделать скриншот моей страницы в ВК, где будут показаны шаги, которые нужно проделать, чтобы перейти к настройкам профиля.
Зайдем Вконтакт, перейдем на мою страницу. Откроем меню в правом верхнем углу, и наведем курсор мыши на пункт » Настройки «. Вот эту картинку нам нужно сфотографировать.
Нажимаем PrtScr — появляется форма захвата экрана. По аналогии с LightShot, щелкаем и удерживаем курсор, передвигая его для выделения нужной области. Когда закончили — отпускаем. Область будет зафиксирована, и появиться меню, где нужно щелкнуть по кнопке » Запись изображений «.
Наш скрин автоматически загрузиться в редактор SnagIt. Давайте оформим его, указав два необходимых шага:
- Открытие меню;
- Выбор пункта » Настройки «.
Среди инструментов редактора выберем » Стрелка «. В правом блоке меню можно выбрать варианты оформления. Теперь с помощью мыши поставим две стрелки на изображение.
Затем выберем инструмент » Последовательность «, и отметим порядок шагов, установив два маркера. Теперь остается сохранить созданный скриншот.
Теперь давайте представим, что скрин с инструкцией по открытию настроек, мы делали для нашего приятеля. Самое время отправить ему изображение.
Переходим к нужному диалогу, щелкаем по значку » Скрепка «, и выбираем пункт » Фотография «. Теперь загружаем скриншот в ВК, нажав на ссылку » Загрузить фотографию «, и выбрав файл на нашем компьютере. Картинка прикрепиться к сообщению — можно отправлять.
Кстати, если вы скинете собеседнику ошибочные данные, всегда можно удалить отправленное сообщение. Но на это есть только 24 часа.
Учимся делать скриншот на Андроид смартфоне, и загружать его в социальную сеть
Последний вариант — создание скриншота на телефоне.
У Андроид смартфонов этот процесс предельно прост. Откройте на экране те данные, которые вы хотите сфотографировать. Затем одновременно нажмите на боковой панели телефона кнопки » Убавить громкость » и » Включение/выключение «. Скриншот будет создан — вы увидите соответствующую анимацию либо звуковой сигнал.
Кнопки на телефоне, для создания скриншота
Теперь открываем приложение Вконтакте, и идем в раздел » Фотографии «. Здесь щелкаем на значок » + «, затем выбираем альбом для загрузки. Автоматически откроется раздел » Все фото «, на вашем телефоне. Наш скриншот должен быть самым первым в списке. Отмечаем его и нажимаем » Прикрепить «. Изображение будет загружено.
Теперь вы знаете о скриншотах все что нужно!
Как сделать скрин в ВК
Автор admin На чтение 5 мин. Просмотров 103 Обновлено
Скриншот – это снимок экрана компьютера или мобильного устройства. Его используют, чтобы показать другому человеку происходящее на мониторе, сохранить часть важных данных или переписки и т.п. В материале ниже предоставим инструкцию, как сделать скрин в ВК с компьютера или смартфона. В OC Windows действие может быть выполнено встроенными средствами системы или при помощи установленной программы. […]
Скриншот – это снимок экрана компьютера или мобильного устройства. Его используют, чтобы показать другому человеку происходящее на мониторе, сохранить часть важных данных или переписки и т.п. В материале ниже предоставим инструкцию, как сделать скрин в ВК с компьютера или смартфона. В OC Windows действие может быть выполнено встроенными средствами системы или при помощи установленной программы.
Создание скриншота на компьютере
Сделать скрин ВКонтакте с ноутбука или настольного компьютера получится двумя методами. Каждый содержит свои преимущества и недостатки. Рассмотрим их подробнее.
Сохранение снимка без программ
Чтобы создать скриншот экрана не устанавливая в систему стороннее программное обеспечение необходимо:
- Открыть страницу в браузере, снимок которой требуется сделать.
- На клавиатуре отыскать и нажать клавишу «Print Screen».
- Выбрать диалог для отправки, поставить курсор в поле ввода текста и нажать сочетание клавиш Ctrl+V. Произойдет загрузка изображения на сервера ВК.
- Отобразится миниатюра скриншота. При необходимости, перед отправкой ее можно отредактировать. Для этого нужно кликнуть по картинке, навести курсор на ссылку «Еще» и выбрать требуемое действие:
- Фоторедактор – позволит добавить текст на изображение, обрезать его до нужных размеров, наложить фильтр и т.д.
- Поворот вправо или влево – развернет картинку в выбранном направлении.
- Указать место – позволяет отметить локацию на карте.
- Открыть оригинал – с помощью этой опции картинка сохраняется в памяти компьютера. После того как она откроется в новом окне, нужно нажать по ней правой кнопкой мышки и выбрать пункт «Сохранить как…».
- Когда все необходимые изменения выполнены, скриншот можно отправить собеседнику.
Такой метод хорош тем, что работает на любом ПК под управлением Windows и не требует затрат времени на установку дополнительной программы. Однако если требуется отправить только определенную область экрана, придется использовать встроенный редактор ВК.
Сохранение снимка через программу
Вариант предполагает скачивание и установку специальной программы. Алгоритм действий:
- Перейти по ссылке http://joxi.ru/.
- На главной странице сайта нажать «Скачать Joxi».
- Выбрать место для сохранения установочного пакета. Когда скачивание завершится – запустить файл и следовать инструкциям установщика.
- После интеграции в систему, в правом нижнем углу экрана появится значок программы. После нажатия на него, необходимо зажать левую кнопку мышки и указать область для сохранения скриншота. Дальше появится панель редактирования изображения, в которой присутствуют опции добавления текста, выделения фрагментов, установки нумерации и т.д.
- Когда все готово, следует нажать на галочку, расположенную рядом с панелью редактирования. Изображение загрузится на сервер программы, а в буфер обмена будет скопирована ссылка для доступа к картинке.
- Осталось открыть диалог ВКонтакте и нажать сочетание клавиш Ctrl+V. Собеседник получит ссылку на скриншот. Если нужно сохранить картинку в память ПК, то достаточно открыть ссылку в браузере и повторить действия пункта 4.4 предыдущего списка.
Несмотря на то, что метод требует установки программы, он обеспечивает больше свободы при сохранении скрина: можно сразу выделить нужную область, а не сохранять весь экран. Кроме того, присутствует панель редактирования, благодаря которой получится быстро указать на важную часть изображения, вписать текст, обвести элемент и т.д. Для каждого добавленного объекта допустимо изменение размера и цвета.
Создание скриншота в телефоне
В современных смартфонах функция создания скриншота интегрирована в операционную систему. Чтобы ею воспользоваться требуется только нажать нужное сочетание физических клавиш, расположенных на корпусе. Поскольку комбинация зависит от версии ОС, имеет смысл рассмотреть вопрос детальнее.
В смартфонах на Андроиде
Для телефонов, работающих на базе Android, существуют следующие варианты создания изображения экрана:
- Зажать кнопку «Домой» и «Питание». Обычно применяется на ранних смартфонах Samsung.
- Одновременно нажать и несколько секунд удерживать кнопки выключения телефона и понижения громкости. Порой последнюю следует заменить на клавишу повышения громкости.
- Довольно редким вариантом является одновременное нажатие кнопки «Домой» и «Назад». Обе расположены под экраном смартфона.
- В некоторых новых моделях мобильных устройств скриншот создается посредством жеста. Ребром ладони нужно провести над дисплеем слева направо.
Чтобы скинуть полученное изображение в чат ВКонтакте – открыть диалог и прикрепить изображение, выбрав в качестве источника память телефона.
В смартфонах Apple
Методика создания и отправки скриншота в iOS схожа, а комбинация клавиш зависит от модели смартфона:
- В iPhone X и прочих новых моделях работает такое сочетание: нажать и удерживать клавишу «Питание», затем нажать «Повышения громкости», после чего отпустить обе кнопки.
- Для iPhone 8 и более ранних моделей применяется комбинация кнопок «Домой» и «Питание».
- В планшетах iPad скриншот создается так: нажимается и удерживается верхняя клавиша, затем нажимается «Увеличение громкости», после отпускаются обе кнопки.
Справка. Созданный снимок сохраняется по такому пути: «Фото» > «Альбомы» > «Снимки экрана». Отправка в социальную сеть выполняется как в системе Андроид.
Подведем итоги. При необходимости создать скриншот, можно воспользоваться несколькими вариантами выполнения задачи. На компьютере более удобен вариант с применением специальной программы, а на смартфонах снимок сохраняется нажатием соответствующих клавиш.
Скриншот недопустимое доказательство \ Акты, образцы, формы, договоры \ Консультант Плюс
]]>Подборка наиболее важных документов по запросу Скриншот недопустимое доказательство (нормативно–правовые акты, формы, статьи, консультации экспертов и многое другое).
Судебная практика: Скриншот недопустимое доказательство Открыть документ в вашей системе КонсультантПлюс:Подборка судебных решений за 2019 год: Статья 55 «Доказательства» ГПК РФ»Нормами гражданско-процессуального законодательства использовать в качестве доказательств в суде скриншот экрана не запрещено. Законом не установлен перечень допустимых доказательств, на основании которых устанавливается факт нарушения (статья 55 ГПК РФ). Поэтому при разрешении вопроса о том, имел ли место такой факт, суд в силу статей 55 и 60 ГПК РФ вправе принять любые средства доказывания, предусмотренные процессуальным законодательством, в том числе полученные с использованием информационно-телекоммуникационных сетей, в частности сети Интернет. Допустимыми доказательствами являются в том числе сделанные и заверенные лицами, участвующими в деле, распечатки материалов, размещенных в информационно-телекоммуникационной сети (скриншот), с указанием адреса интернет-страницы, с которой сделана распечатка, а также точного времени ее получения. Такие распечатки подлежат оценке судом при рассмотрении дела наравне с прочими доказательствами (статья 67 ГПК РФ).» Открыть документ в вашей системе КонсультантПлюс:
Подборка судебных решений за 2019 год: Статья 60 «Допустимость доказательств» ГПК РФ»Нормами гражданско-процессуального законодательства использовать в качестве доказательств в суде скриншот экрана не запрещено. Законом не установлен перечень допустимых доказательств, на основании которых устанавливается факт нарушения (статья 55 ГПК РФ). Поэтому при разрешении вопроса о том, имел ли место такой факт, суд в силу статей 55 и 60 ГПК РФ вправе принять любые средства доказывания, предусмотренные процессуальным законодательством, в том числе полученные с использованием информационно-телекоммуникационных сетей, в частности сети Интернет. Допустимыми доказательствами являются в том числе сделанные и заверенные лицами, участвующими в деле, распечатки материалов, размещенных в информационно-телекоммуникационной сети (скриншот), с указанием адреса интернет-страницы, с которой сделана распечатка, а также точного времени ее получения. Такие распечатки подлежат оценке судом при рассмотрении дела наравне с прочими доказательствами (статья 67 ГПК РФ).» Статьи, комментарии, ответы на вопросы: Скриншот недопустимое доказательство Открыть документ в вашей системе КонсультантПлюс:
«Защита данных: научно-практический комментарий к судебной практике»
(отв. ред. В.В. Лазарев, Х.И. Гаджиев)
(«ИЗиСП», «КОНТРАКТ», 2020)В Определении Московского городского суда от 5 марта 2019 г. N 4г-0798/2019 по делу N 2-1623/18 указано: «Скриншоты сообщений в мессенджере WhatsApp являются недопустимыми доказательствами в связи с отсутствием возможности установить отправителя сообщений; нотариально удостоверенный протокол осмотра электронной переписки в мобильном приложении не представлен; кроме того, переписка в мессенджере WhatsApp противоречит п. 5.7 спорного договора, в соответствии с которым переписка между сторонами осуществляется путем направления корреспонденции заказными письмами с уведомлением». Открыть документ в вашей системе КонсультантПлюс:
Статья: Instagram в царстве налоговых доказательств
(Данилов С.)
(«Практическая бухгалтерия», 2019, N 9)Своим Постановлением от 23.04.2019 N 10 Пленум Верховного Суда РФ подтвердил, что можно использовать скриншоты в качестве доказательства нарушения исключительного права: закон не устанавливает перечень допустимых доказательств, на основании которых суд решает, имело ли место нарушение. А потому суд вправе принять любые доказательства, предусмотренные процессуальными законами, в том числе и полученные в Интернете.
CRISPR Death Screen выявляет гены, необходимые для окислительного фосфорилирования.
Cell Metab. Авторская рукопись; доступно в PMC 2017 13 декабря.
Опубликован в окончательной редакции как:
PMCID: PMC5474757
NIHMSID: NIHMS816083
, 1, 2, 3, 4 , 1, 2, 3, 4 , 1, 2, 3 , 1, 2, 3 , 3 , 3 и 1, 2 , 3, 5, *Джейсон Д.Арройо
1 Департамент молекулярной биологии и Медицинский институт Говарда Хьюза, Массачусетская больница общего профиля, Бостон, Массачусетс 02114, США
2 Департамент системной биологии Гарвардской медицинской школы, Бостон, Массачусетс 02115, США
3 Broad Institute of MIT и Гарвард, Кембридж, Массачусетс 02142, США
Алексис А. Джорден
1 Департамент молекулярной биологии и Медицинский институт Говарда Хьюза, Массачусетская больница общего профиля, Бостон, Массачусетс 02114, США
2 Департамент системной биологии Гарвардской медицинской школы, Бостон, Массачусетс 02115, США
3 Broad Institute of MIT и Гарвард, Кембридж, Массачусетс 02142, США
Сара Э.Calvo
1 Департамент молекулярной биологии и Медицинский институт Говарда Хьюза, Массачусетская больница общего профиля, Бостон, Массачусетс 02114, США
2 Департамент системной биологии Гарвардской медицинской школы, Бостон, Массачусетс 02115, США
3 Broad Institute of MIT и Гарвард, Кембридж, Массачусетс 02142, США
Кармин А. Балларано
1 Департамент молекулярной биологии и Медицинский институт Говарда Хьюза, Массачусетская больница общего профиля, Бостон, Массачусетс 02114, США
2 Департамент системной биологии Гарвардской медицинской школы, Бостон, Массачусетс 02115, США
3 Broad Institute of MIT и Гарвард, Кембридж, Массачусетс 02142, США
John G.Doench
3 Broad Institute of MIT и Гарвард, Кембридж, Массачусетс 02142, США
Дэвид Э. Рут
3 Broad Institute of MIT и Гарвард, Кембридж, Массачусетс 02142, США
Vamsi K. Mootha
1 Департамент молекулярной биологии и Медицинский институт Говарда Хьюза, Массачусетская больница общего профиля, Бостон, Массачусетс 02114, США
2 Департамент системной биологии, Гарвардская медицинская школа, Бостон, Массачусетс 02115, США
3 Broad Институт Массачусетского технологического института и Гарварда, Кембридж, Массачусетс 02142, США
1 Департамент молекулярной биологии и Медицинский институт Говарда Хьюза, Массачусетская больница общего профиля, Бостон, Массачусетс 02114, США
2 Департамент системной биологии Гарвардской медицинской школы , Бостон, Массачусетс 02115, США
3 Broad Institute of MIT и Гарвард, Кембридж, Массачусетс 02142, США
4 Соавтор
5900 13 Контактное лицо
Окончательная отредактированная версия этой статьи издателя доступна на Cell Metab. См. Другие статьи в PMC, в которых цитируется опубликованная статья.- Дополнительные материалы
1.
GUID: D370A10C-1A4D-4F9E-944E-453DED468AD0
2.
GUID: F02F16B3000
GUID: F02F16B3C2-66E-
GUID: 50A80184-41F2-4D1D-9614-D9B9BC3070C4
4.
GUID: 46BA8423-9615-48D2-94A4-E45E06A6E2AB
5.
РЕЗЮМЕ
Окислительное фосфорилирование (OXPHOS) является основным путем производства АТФ у человека.Дефицит OXPHOS может возникать в результате мутаций в митохондриальном или ядерном геномах и составляет самую большую коллекцию врожденных ошибок метаболизма. В настоящее время у нас отсутствует полный каталог человеческих генов и путей, необходимых для OXPHOS. Здесь мы представляем общегеномный «экран смерти» CRISPR, который активно отбирает умирающие клетки для выявления человеческих генов, необходимых для OXPHOS, вдохновленный классическим наблюдением, что человеческие клетки, дефицитные по OXPHOS, выживают в глюкозе, но умирают в галактозе. Мы сообщаем о 191 попадании с высокой степенью достоверности, необходимых для OXPHOS, включая 72 основных известных заболевания OXPHOS.Наш экран показывает функциональный модуль, состоящий из NGRN, WBSCR16, RPUSD3, RPUSD4, TRUB2 и FASTKD2, который регулирует митохондриальную 16S рРНК и внутримитохондриальную трансляцию. Наша работа дает богатый каталог генов, необходимых для OXPHOS, и, в более общем плане, демонстрирует силу скрининга смерти для функционального геномного анализа.
Графический аннотация
ВВЕДЕНИЕ
У людей механизм окислительного фосфорилирования (OXPHOS) состоит из пяти макромолекулярных комплексов, включающих в общей сложности 90 белков, 77 из которых кодируются ядром, а 13 из которых кодируются митохондриальным геномом (мтДНК).Эти структурные компоненты системы OXPHOS в значительной степени зависят от дополнительных факторов для их правильного выражения и функции. Соответственно, мутации в структурных субъединицах или факторах сборки и путях поддержания, транскрипции и трансляции мтДНК, как сообщается, вызывают митохондриальную болезнь OXPHOS (Diaz et al., 2011; Nunnari and Suomalainen, 2012; Wallace, 1997). Эти расстройства сложно диагностировать и лечить отчасти из-за того, что возраст начала, характер поражения систем органов и степень тяжести сильно различаются (Pfeffer et al., 2013; Vafai and Mootha, 2012). У людей точное количество дополнительных и регуляторных факторов OXPHOS остается неизвестным, но они были полностью идентифицированы у S. cerevisiae посредством систематических генетических исследований (Steinmetz et al., 2002; VanderSluis et al., 2014). Однако система OXPHOS в этом модельном организме разошлась: дрожжи, например, лишены комплекса I и имеют организацию мтДНК, отличную от таковой у человека. Следовательно, хотя данные о дрожжах значительно продвинули наше понимание OXPHOS, у людей еще предстоит идентифицировать дополнительные пути.
Давно известно, что человеческие клетки, дефицитные по OXPHOS, жизнеспособны в богатой глюкозой среде, но они не могут выжить, когда глюкоза заменяется галактозой (Robinson et al., 1992). Поразительная разница в приспособленности между глюкозой и галактозой объясняется тем фактом, что клетки, растущие в глюкозе, используют как гликолиз, так и OXPHOS для производства АТФ, тогда как клетки, растущие в галактозе, почти полностью зависят от OXPHOS (Reitzer et al., 1979). Следовательно, хотя потеря OXPHOS приводит к нарушению роста клеток в условиях, богатых глюкозой (Wheaton et al., 2014), эти клетки нежизнеспособны в галактозе. Эта «летальность, зависящая от метаболического состояния» ранее успешно использовалась в комплексных химических экранах для выявления новых низкомолекулярных ингибиторов OXPHOS (Gohil et al., 2010). Предыдущий объединенный скрининг РНКи также использовал отрицательный ростовой отбор в среде с глюкозой и галактозой для поиска генов, связанных с OXPHOS, но имел ограниченный успех (Bayona-Bafaluy et al., 2011), вероятно, по двум причинам. Во-первых, RNAi часто достигает только частичного нокдауна, а полный нокдаун может потребоваться, чтобы иметь фенотипические последствия.Во-вторых, хотя такие экраны роста с отрицательной селекцией могут быть успешными для идентификации основных генов, оказывающих сильное влияние на рост (Hart et al., 2015; Luo et al., 2008), обнаружение истощения гена в очень сложной библиотеке особенно важно. сложно, когда фитнес-эффект в двух сравниваемых условиях невелик.
Чтобы преодолеть эту проблему, мы вводим «экран смерти» положительного отбора, который активно отбирает умирающие клетки и подвергает их глубокому секвенированию следующего поколения.Мы комбинируем этот подход с кластеризованными по всему геному регулярными короткими палиндромными повторами (CRISPR) / Cas9 библиотекой для систематической каталогизации факторов OXPHOS в клетках человека. Мы сообщаем, что клетки K562 с дефицитом OXPHOS претерпевают клеточную гибель при росте в галактозе, но не в глюкозе. Мы используем это свойство для очистки мертвых клеток из нокаутной популяции по всему геному после культивирования в глюкозе или галактозе для идентификации генов, необходимых для OXPHOS. Помимо восстановления многих известных компонентов OXPHOS и генов болезней, наш надежный подход также позволяет выявить совершенно новые гены OXPHOS, которые не охарактеризованы или локализованы немитохондриально.Пять из не охарактеризованных генов ( NGRN , WBSCR16 , RPUSD3 , RPUSD4 и TRUB2 ) вместе с FASTKD2 кодируют компоненты функционального модуля, который, как мы теперь показываем, регулирует 16 Обилие рРНК и требуется для внутримитохондриальной трансляции.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Скрининг CRISPR / Cas9 по всему геному на смерть в галактозе по сравнению с глюкозой
Мы стремились преодолеть проблемы, присущие скринингу роста отрицательной селекции, путем разработки полногеномного скрининга CRISPR / Cas9 с использованием положительного отбора и глубокого секвенирования умирающие клетки.Аннексин V является хорошо известным маркером клеточной смерти, который связывает фосфатидилсерин, внутриклеточную молекулу, которая становится доступной как во время апоптоза, так и во время некроза (Martin et al., 1995). Чтобы подтвердить, что клетки с дефектами OXPHOS подвергаются гибели в среде галактозы, мы обрабатывали клетки миелогенного лейкоза человека K562, культивированные в глюкозе или галактозе, ингибиторами комплекса I дыхательной цепи (пирицидин), комплекса III (антимицин) или комплекса V. (олигомицин). Окрашивание аннексином V ясно показывает, что лечение этими препаратами приводит к гибели клеток на 85–95% в течение 24 часов в галактозе, но не в глюкозе ().Мы подтвердили, что фенотип галактозоспецифической гибели клеток также применяется к генетическому нарушению OXPHOS, тестируя клетки, в которых мы удалили ген болезни OXPHOS NDUFA9 с использованием CRISPR / Cas9 (van den Bosch et al., 2012; Рисунок S1A). Таким образом, нарушения гена болезни OXPHOS достаточно для селективной индукции гибели клеток в галактозе по сравнению с глюкозой.
Скрининг смерти CRISPR по всему геному для идентификации генов, необходимых для OXPHOS(A) Гибель клеток измеряли с помощью окрашивания аннексином V и проточной цитометрии в клетках K562, культивируемых в среде, содержащей глюкозу или галактозу, с ингибиторами RC пирицидином (10 нМ), антимицин (100 нМ) или олигомицин (10 нМ) или контроль носителя ДМСО.Данные выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего (n = 3). * p <0,05, *** p <0,001, t-тест относительно обработки ДМСО в соответствующей среде.
(B) Схематический обзор экрана CRISPR для всего генома. Клетки K562, экспрессирующие Cas9, инфицировали лентивирусной библиотекой sgRNA CRISPR, расщепляли на глюкозосодержащую или содержащую галактозу среду и культивировали в течение 24 часов. Мертвые клетки при каждом условии очищали с использованием аннексина V, и количество каждой sgRNA сравнивали с эталонным образцом всех клеток до замены среды (предварительная замена).Красный цвет представляет клетки, экспрессирующие sgRNA гена болезни OXPHOS.
(C и D) Среднее нормализованное число считываний каждой sgRNA, усредненное в двух повторностях инфекции, сравнивается между клетками до замены (ось x) и мертвыми клетками аннексина V + после роста в глюкозе (C) или галактозе (D ) (ось y).
(E) Обогащение гена клетками аннексина V + из глюкозы (вверху) и галактозной среды (внизу) оценивали с помощью MAGeCK, и показана доля известных генов болезни OXPHOS и всех генов с данным FDR.
(F) Схема, представляющая подход, используемый для идентификации совпадений на экране и количества совпадений ниже каждого порога FDR галактозы.
(G) Распределение совпадений для каждого порога FDR галактозы между известными генами болезни OXPHOS (красный), другими митохондриальными генами, как определено MitoCarta2.0 (бордовый), и немитохондриальными генами (серый). См. Также рисунки S1 и S2.
Мы разработали наш положительный скрининг отбора путем выделения мертвых клеток с помощью очистки аннексином V ().Мы использовали полногеномную библиотеку CRISPR / Cas9 Avana с 74 687 однонаправленными РНК (sgRNA) для систематического нацеливания на 18 335 различных генов человека в клетках K562 (Doench et al., 2016). Инфицированные клетки культивировали в богатой глюкозой среде с добавлением уридина и пирувата, которые необходимы для роста некоторых клеток с дефектами RC (King and Attardi, 1989). После 11 дней роста, чтобы позволить CRISPR-опосредованный нокаут гена, клетки из двух независимых репликатов инфекции были заменены на среду, содержащую либо глюкозу, либо галактозу в качестве единственного источника сахара в течение 24 часов.Мертвые клетки из каждого состояния выделяли с помощью микрогранул, конъюгированных с аннексином V, и получили название «клетки с аннексином V +». Мертвые клетки из условий глюкозы и галактозы вместе с обычными контрольными образцами перед заменой были подвергнуты глубокому секвенированию следующего поколения для определения количества каждой sgRNA (Таблица S1).
Мы измерили производительность скрининга, используя тщательно подобранный список генов болезни OXPHOS в качестве положительного контроля (таблица S2). Подавляющее большинство sgRNAs в обоих условиях показали аналогичные уровни изобилия в клетках аннексина V + по сравнению с клетками до обмена (и).Однако sgRNAs, нацеленные на известные гены болезни OXPHOS, были более многочисленны в клетках аннексина V + из культуры галактозы по сравнению с их уровнями до обмена. Напротив, эти sgRNA были неотличимы от фонового распределения, когда клетки выращивали в глюкозе. Затем мы использовали основанный на модели анализ алгоритма нокаута CRISPR-Cas9 (MAGeCK) по всему геному (Li et al., 2014), чтобы свернуть данные на уровне sgRNA и оценить 18335 генов человека в нашей библиотеке для обогащения клетками аннексина V +. из глюкозы или галактозы по сравнению с обычным контролем перед заменой (Таблица S3).Мы также наблюдали это ожидаемое обогащение положительных контролей на уровне гена, и известные гены болезни OXPHOS показали значительно лучшие результаты в отношении галактозы по сравнению с глюкозой, как измерено с помощью коэффициента ложного обнаружения (FDR) (). Более того, фракция генов болезни OXPHOS ниже 10% FDR в галактозе была обогащена в 39 раз по сравнению с фоном всех генов.
Мы использовали показатели MAGeCK для определения набора генов, которые были особенно необходимы для выживания в галактозе по сравнению с глюкозой.Мы отфильтровали 92 гена с FDR ниже 30% в среде с глюкозой, потому что они, вероятно, представляют собой широко летальные гены, вызывающие неспецифическую гибель клеток. Затем мы определили гены попаданий, обогащенные по летальности галактозой при трех порогах FDR: 191 попадание с «высокой степенью достоверности» при 10%, дополнительные 48 попаданий между 10% и 20% и 61 попадание между 20% и 30% (и). Примечательно, что у трети совпадений отсутствуют идентифицируемые гомологи в S. cerevisiae , что подчеркивает важность скрининга млекопитающих.Ранее мы сообщали об инвентаризации митохондриальных белков человека MitoCarta2.0 (Calvo et al., 2016). На сегодняшний день более 95% всех известных генов болезней OXPHOS кодируют белки, находящиеся в митохондриях, и находятся в инвентаре MitoCarta2.0. Соответственно, на нашем скрининге мы наблюдали, что подавляющее большинство совпадений кодирует митохондриальные белки, аннотированные в MitoCarta2.0, и почти две трети этих митохондриальных попаданий, как ранее не сообщалось, были генами болезни OXPHOS (). Немитохондриальные попадания с большей вероятностью будут ложноположительными, и действительно, их доля сильно коррелирует с общим уровнем FDR, что позволяет предположить, что статистика FDR хорошо откалибрована (рисунок S1B).В целом наш скрининг выявил 71 из 139 положительных контролей (гены болезни OXPHOS) ниже 30% FDR, что дает чувствительность 51%. Более того, наша идентификация 229 совпадений, ранее не связанных с заболеванием OXPHOS, более чем вдвое увеличила количество человеческих генов, потенциально участвующих в OXPHOS.
Известные гены и гены-кандидаты на заболевание OXPHOS, идентифицированные с помощью экрана смерти от глюкозы / галактозы300 совпадений с FDR галактозы <30% и FDR глюкозы ≥ 30% показаны в вручную отобранных функциональных категориях.
Нам было любопытно узнать, может ли наша стратегия скрининга выявить избирательную летальность галактозы по сравнению с глюкозой в клетках, которые также демонстрируют нарушение пролиферации в среде с глюкозой, поскольку нарушение OXPHOS может снизить рост клеток (Wheaton et al., 2014). Поэтому мы сравнили образцы перед заменой с клетками, собранными 6 днями ранее, сразу после отбора лекарства для sgRNA-инфицированных клеток, и мы идентифицировали 1218 генов с FDR ниже 30%, нарушение которых приводит к дефекту роста (рисунок S2A; таблицы S1 и S3). .Хиты дефектов роста были обогащены митохондриальными генами, при этом гены MitoCarta2.0 составляли 19% совпадений по сравнению с 6% всех генов в библиотеке (p <10 -56 , тест Фишера). Среди 300 генов, у которых показатель летальности галактозы ниже 30% FDR при скрининге смерти от глюкозы / галактозы, 141 (47%) также привели к дефекту роста в богатой среде (рис. S2B). Эта доля была выше среди митохондриальных генов, где 126 из 214 совпадений MitoCarta2.0 (59%) также вызывали дефект роста. Мы также наблюдали, что десять из наших положительных контрольных генов болезни OXPHOS, которые не учитывали смерть в галактозе, были обнаружены как гены дефекта роста.Таким образом, хотя нокаут небольшого подмножества генов OXPHOS, вероятно, не был оценен, потому что они необходимы во всех условиях, наш подход к скринингу смерти является надежным и обнаруживает избирательную летальность в галактозе даже в контексте клеток с нарушенным ростом в полностью содержащих глюкозу средах. .
Анализ путей митохондриальных генов, необходимых для OXPHOS
Затем мы спросили, какие митохондриальные пути обогащены или истощены при попадании на экран гибели глюкозы / галактозы.Мы разделили все 1135 генов MitoCarta2.0, присутствующих в нашей библиотеке CRISPR, на восемь неперекрывающихся категорий (). По сравнению с 19% всех генов MitoCarta2.0, которые были обнаружены ниже 30% FDR, были обогащены четыре категории: митохондриальные тРНК-синтетазы, митохондриальные рибосомы (мито-рибосома), OXPHOS и экспрессия других генов мтДНК (p <10 -3 , Тест Фишера). По сравнению с фоном MitoCarta2.0, три категории значительно реже вызывали избирательную летальность в галактозе: семейство растворенных носителей, метаболизм и неклассифицированный MitoCarta2.0 (p <10 -3 , тест Фишера). Как указывалось ранее, хотя повреждения OXPHOS могут привести к полной нежизнеспособности галактозы, они также приводят к количественному ухудшению роста глюкозы. Действительно, мы наблюдали аналогичную картину обогащения или истощения при обнаружении дефектов роста (). Единственной категорией, которая была заметно особняком, было нацеливание белков на митохондрии. Эта категория была значительно обогащена генами, необходимыми для роста (p = 0,013), но имела тенденцию к истощению (хотя и не достигала значимости, p = 0.24) для генов, необходимых для выживания в галактозе. Примечательно, что очень немногие гены болезни OXPHOS человека кодируют членов механизма импорта митохондриального белка, что согласуется с результатами скрининга, показанными здесь, о том, что эти гены, вероятно, в целом необходимы.
Митохондриальные пути, лежащие в основе фенотипа смерти глюкозы / галактозы(A) Гены MitoCarta2.0, на которые нацелена библиотека CRISPR, были разделены на восемь различных функциональных категорий, и доля генов в каждой категории, которые попали ниже 30% FDR, составляет показаны для фенотипа смерти глюкозы / галактозы (слева) или фенотипа дефекта роста (справа).Доли всех генов и всех генов MitoCarta2.0, которые оказались успешными, показаны вверху (черные полосы). Пунктирными линиями обозначена доля обращений к MitoCarta2.0.
(B) Показано распределение попаданий ниже 30% FDR в те же восемь категорий MitoCarta2.0 и категорию, отличную от MitoCarta2.0. Для сравнения показано распределение всех генов в библиотеке CRISPR по этим категориям.
Вместе четыре обогащенных категории (OXPHOS, MitoRibosome, Mitochondrial tRNA Synthetases и Other mtDNA Gene Expression) демонстрируют поразительную чрезмерную представленность среди совпадений на экране гибели глюкозы / галактозы.Вместе они составили 62% генов с фенотипом смерти от глюкозы / галактозы (). Напротив, эти же категории представляют только 13% всех генов, показывающих дефект роста, и только 2% всех генов, на которые нацелена общегеномная библиотека CRISPR. Эти данные подчеркивают способность фенотипа смерти глюкозы / галактозы восстанавливать гены, связанные с OXPHOS.
Подтверждение скрининга смерти от глюкозы / галактозы
Далее мы попытались экспериментально подтвердить результаты скрининга смерти от глюкозы / галактозы с использованием индивидуально нацеленных генетических нокаутов.Мы использовали CRISPR / Cas9 и последовательности sgRNA из библиотеки для скрининга, чтобы нарушить экспрессию девяти генов (ниже 10% FDR), которые ранее не были связаны с заболеванием OXPHOS или не связаны с дыхательной цепью, включая гены, кодирующие митохондриальные белки (NGRN, PYURF, SLC25A26, METTL17 и WBSCR16) и белки, не входящие в MitoCarta2.0 (COG2, TMEM261, N6AMT1 и YTHDF2). В соответствии с порогом FDR 10%, мы могли подтвердить, что истощение восьми из девяти генов привело к значительной и селективной гибели клеток в галактозе, и только YTHDF2 не прошли проверку и не были изучены в дальнейшем (; Рисунок S3A).Нокауты COG2 и WBSCR16 показали умеренное, но значительное увеличение гибели клеток в глюкозе, но в меньшей степени, чем в галактозе. Чтобы определить, был ли нарушен OXPHOS в нокаутах, соответствующих восьми оставшимся генам, мы количественно оценили потребление кислорода всей клеткой, которое в первую очередь обусловлено активностью OXPHOS. Из восьми протестированных генов истощение всех, кроме COG2 , вызвало значительный дефект в базальном потреблении кислорода, что согласуется с дефицитом OXPHOS в этих клетках ().Потеря COG2 не выявила дефицита потребления кислорода, что указывает на то, что COG2 может потребоваться для выживания клеток в галактозе независимо от OXPHOS. Чтобы предоставить биохимические доказательства нарушения OXPHOS, мы измерили относительное количество субъединиц RC с помощью иммуноблоттинга (). Все линии клеток с разрушенным геном имели пониженные уровни по крайней мере одной субъединицы комплекса RC по сравнению с контрольными клетками, что снова указывает на дефицит OXPHOS. Чтобы дополнительно охарактеризовать митохондриальные дефекты в этих клетках, мы измерили сборку RC и митохондриальную трансляцию относительно контрольных клеток (Рисунки S3B и S3C).Мы наблюдали дефекты для каждого разрушенного гена с фенотипами в диапазоне от дефицита изолированного комплекса I (например, PYURF ) до комбинированного дефицита дыхательной цепи (например, METTL17 ) (; Рисунки S3B и S3C). Важно отметить, что во время проверки этого скрининга в другом исследовании сообщалось о связи SLC25A26 с болезнью OXPHOS, что дополнительно подтверждает наши результаты (Kishita et al., 2015). В общей сложности мы подтвердили восемь из девяти совпадений для галактозо-специфического фенотипа смерти и показали, что нарушение семи из этих восьми генов снижает потребление кислорода.
Функциональная проверка результатов скрининга(A) Окрашивание аннексином V и анализ проточной цитометрии клеточных линий K562, экспрессирующих Cas9 и sgRNAs, направленных против указанных генов и выращенных в течение 24 часов в среде, содержащей глюкозу или галактозу. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего (n = 3, n = 6 для контроля). * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, t-тест относительно контрольных клеток, обработанных sgRNA, в соответствующей среде.
(B) Базальное потребление кислорода целыми клетками измеряли в указанных линиях клеток с нокаутом K562.Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего (n = 4, n = 9 для контроля). * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, t-тест относительно контрольных клеток, обработанных sgRNA. (C) Иммуноблот-анализ белков указанных линий клеток K562 с использованием смеси множественных антител, нацеленных на субъединицу каждого респираторного комплекса (CI – CV).
См. Также рисунок S3.
Анализ немитохондриальных путей
Как и ожидалось, большинство наших результатов скрининга смерти от глюкозы / галактозы кодируют митохондриальные белки, но 13% наших совпадений ниже 10% FDR и 29% наших совпадений ниже 30% FDR кодируют не- митохондриальные белки.Хотя мы ожидали, что большинство этих немитохондриальных попаданий были ложными открытиями, при ручном исследовании было ясно, что были представлены множественные гены, участвующие в пути киназы AMP (AMPK), контроле транскрипции INO80 / YY1 и аппарате Гольджи. Анализ генной онтологии (GO) немитохондриальных попаданий ниже 30% FDR подтвердил, что эти три основных пути были сильно обогащены: путь транскрипции INO80 / YY1 ( q <10 -5 с NFRKB , ACTR5 , INO80 , YY1 и TFPT ), путь AMPK ( q <10 -2 с PRKAA1 , PRKAB1 и PRKAG1 ), а также аппаратом Golgi ( q <10 -2 с COG2 , COG3 и COG5 ) ().Примечательно, что путь YY1, как ранее сообщалось, регулирует митохондриальный биогенез (Cunningham et al., 2007). Мы экспериментально подтвердили фенотип галактозоспецифической гибели в клетках с истощением COG2, описанных выше, хотя эти клетки не демонстрировали пониженного потребления кислорода. Используя низкомолекулярный ингибитор AMPK, соединение C (Zhou et al., 2001), мы подтвердили синтетическую летальность между ростом галактозы и ингибированием AMPK (и). Хотя мы могли бы использовать химический ингибитор, чтобы продемонстрировать избирательную гибель галактозы по сравнению с глюкозой, необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, регулирует ли AMPK напрямую OXPHOS.
Немитохондриальные пути, идентифицированные на экране(A) Анализ обогащения онтологии генов немитохондриальных попаданий.
(B) Схематическое изображение пяти белков в пути AMPK, которые были обнаружены при скрининге, с указанием ингибирования пути соединением C.
(C) Фазово-контрастная микроскопия клеток HeLa, выращенных в среде, содержащей глюкозу или галактозу и обработанных в течение 16 часов 2 мкМ соединением C.
Идентификация функционального модуля, регулирующего 16S рРНК и внутримитохондриальную трансляцию
Среди проверенных здесь генов мы дополнительно исследовали NGRN , потому что он кодирует белок с высококонсервативным, но неизученным доменом Pfam, свидетельствующим о связывании РНК (Castello et al., 2012; Ishigaki et al., 2000), что дает ключ к разгадке его молекулярной функции. Мы подтвердили, что NGRN локализуется в митохондриях (; Рисунок S4A). Когда мы разрушили NGRN с помощью CRISPR, мы наблюдали истощение миторибосомных белков () и потерю митохондриальной трансляции (). Экспрессия sgRNA-устойчивой версии NGRN-3xFLAG могла полностью восстановить эти дефекты, подтверждая, что они не были нецелевым эффектом. Учитывая его потенциальное связывание с РНК, мы предположили, что NGRN может регулировать РНК, кодируемые мтДНК.В отсутствие NGRN мы наблюдали значительное истощение 16S рРНК, большой митохондриальной рРНК, кодируемой мтДНК ( mt-RNR2 ), которая могла быть полностью восстановлена путем повторной экспрессии NGRN-3xFLAG (). Напротив, малая митохондриальная рРНК 12S ( mt-RNR1 ) и мРНК, кодируемые мтДНК, существенно не изменились (; Рисунок S4B). Когда мы коиммунопреципитировали все РНК с использованием NGRN-3xFLAG, мы обнаружили, что NGRN взаимодействует с 16S рРНК, а также с его предшественником 16S-тРНК Leu , но не с 12S рРНК (и).В совокупности эти находки показывают, что NGRN кодирует митохондриальный белок, который взаимодействует с 16S рРНК и ее предшественником, и что он необходим для поддержания митохондриальной рибосомы и трансляции.
Белковый модуль, необходимый для стабильности 16S рРНК и внутримитохондриальной трансляции(A) Анализ с помощью конфокальной микроскопии клеток HeLa, экспрессирующих pDsRed2-Mito (митохондриальный маркер) и NGRN-3xFLAG и иммуномеченных антителами к FLAG.
(B) Иммуноблот-анализ белков богатой митохондриями фракции из клеток K562, экспрессирующих sgRNA, нацеленные на NGRN и / или устойчивую к sgRNA версию кДНК NGRN-3xFLAG человека.
(C) Авторадиография после 35 S-метионин / цистеин мечения митохондриальной трансляции на клетках K562, экспрессирующих sgRNAs, нацеленных на NGRN и / или устойчивую к sgRNA версию кДНК NGRN-3xFLAG человека. Все клетки обрабатывали 200 мкг / мл эметина.
(D) Анализ qPCR малых (12S, mt-RNR1 ) или больших (16S, mt-RNR2 ) митохондриальных рРНК из клеток K562, экспрессирующих sgRNAs, нацеленных на NGRN и / или устойчивую к sgRNA версию NGRN человека -3xFLAG.
(E) Анализ qPCR малых (12S, mt-RNR1 ) или больших (16S, mt-RNR2 ) митохондриальных рРНК из иммунопреципитации NGRN-3xFLAG или WBSCR16-3xFLAG.
(F) Анализ qPCR предшественников 16S 5 ‘(Val-16S) и 3’ (16S-Leu) рРНК из иммунопреципитации NGRN-3xFLAG или WBSCR16-3xFLAG. (G и H) Относительное содержание пептидов в двух независимых иммунопреципитации NGRN-3xFLAG или WBSCR16-3xFLAG, соответственно, и анализ с помощью масс-спектрометрии. Приманки подчеркнуты.Гены, идентифицированные на нашем экране (), показаны красным.
(I) Анализ qPCR малых (12S, mt-RNR1 ) или больших (16S, mt-RNR2 ) митохондриальных рРНК из клеток K562, экспрессирующих sgRNA, нацеленные на указанные гены.
(J) Авторадиография после 35 S-метионин / цистеин мечения митохондриальной трансляции на клетках K562, экспрессирующих sgRNAs, нацеленных на указанные гены. Все клетки обрабатывали 200 мкг / мл эметина.
(K) Функциональный модуль, который регулирует 16S рРНК и митохондриальную трансляцию, с линиями, показывающими белок-белковые взаимодействия, обнаруживаемые с помощью коиммунопреципитации.
Все гистограммы (D – F и I) отображают среднее значение ± SEM (n = 3) со звездочками, обозначающими значимость t-критерия (* p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001). См. Также рисунок S4.
Для дальнейшей характеристики NGRN мы выполнили масс-спектрометрический анализ иммунопреципитата NGRN-3xFLAG. Мы обнаружили, что NGRN является частью ранее не изученного белкового модуля, который неожиданно включает четыре других плохо охарактеризованных совпадения с нашего экрана (WBSCR16, RPUSD3, RPUSD4 и TRUB2), а также FASTKD2, митохондриальный РНК-связывающий белок, потеря которого приводит к инфантильному митохондриальному развитию. энцефаломиопатия (Ghezzi et al., 2008; ; Рисунки S4C и S4D; Таблица S4). Истощение WBSCR16 фенокопирует митохондриальные трансляционные дефекты, которые мы наблюдали с потерей NGRN (Рисунок S3C). Более того, иммунопреципитация WBSCR16 восстанавливает белки, взаимодействующие с NGRN (), и аналогичным образом демонстрирует взаимодействие с 16S рРНК (). Взаимодействия белок-белок в модуле не были чувствительны к обработке РНКазой, что указывает на то, что эти взаимодействия не опосредуются 16S рРНК (рис. S4C). Наконец, мы использовали CRISPR для нарушения работы всех членов модуля и обнаружили, что все они необходимы для обилия 16S рРНК и митохондриальной трансляции (и; Рисунки S4E и S4F).Таким образом, пять из ранее не изученных результатов нашего скрининга CRISPR в сочетании с FASTKD2, по-видимому, образуют функциональный модуль белок-РНК (), который регулирует митохондриальную 16S рРНК и внутримитохондриальную трансляцию.
ОБСУЖДЕНИЕ
Мы ввели скрининг смерти, метод, который активно отбирает умирающие клетки и подвергает их секвенированию следующего поколения, и мы использовали этот подход для систематической идентификации человеческих генов, необходимых для OXPHOS. Используя этот экран положительного отбора, мы сообщаем об идентификации 191 гена с высокой степенью достоверности, необходимого для OXPHOS.Наша валидация предоставляет первые биохимические доказательства роли ранее не охарактеризованных митохондрий ( NGRN , RPUSD3 , RPUSD4 , TRUB2 , WBSCR16 , PYURF и Mitochondrial) TMEM261 и N6AMT1 ) в гомеостазе OXPHOS. В частности, мы идентифицировали ранее нераспознанный функциональный модуль белок-РНК, состоящий из NGRN, WBSCR16, RPUSD3, RPUSD4, TRUB2 и FASTKD2, необходимых для обилия 16S рРНК и внутримитохондриальной трансляции.Более того, пока эта работа продолжалась, 17 дополнительных совпадений с нашего экрана, включая SLC25A26 , которые мы проверили, были зарегистрированы как настоящие гены болезни OXPHOS у пациентов, что обеспечило дополнительную генетическую проверку результатов нашего скрининга на людях (Таблица S5).
Наш высококачественный каталог генов, необходимых для OXPHOS (), станет важным ресурсом для митохондриальных биологов, генетиков и клиницистов. Помимо расширения нашего понимания этого важного метаболического процесса и открытия новых возможностей для исследований, он немедленно информирует пациента о диагнозе.Секвенирование всего экзома появляется как первая линия диагностики нарушений OXPHOS, но интерпретация данных секвенирования пациентов остается постоянной проблемой. Несмотря на то, что инвентаризация MitoCarta оказала значительное влияние на диагностику болезни OXPHOS (Calvo et al., 2016; Pagliarini et al., 2008), около половины пациентов с митохондриальными заболеваниями с полным секвенированием экзома все еще не получают молекулярный диагноз (Taylor et al. ., 2014). Перечень генов-кандидатов болезни OXPHOS, который мы представляем здесь, поможет дополнительно определить приоритеты вариантов, обнаруженных в данных секвенирования пациентов, и улучшить диагностику двумя важными способами.Во-первых, в настоящее время передовой практикой является то, что все гены MitoCarta проверяются на наличие мутаций, но наш скрининг выявил 24 гена с высокой степенью достоверности (<10% FDR) и 62 гена с низкой достоверностью (10–30% FDR), не относящиеся к MitoCarta, которые теперь также должны быть проанализированы у всех пациентов, и иначе это было бы упущено. Даже среди генов MitoCarta наш список поможет обнаружить варианты заболеваний, отдав приоритет дополнительным генам, кодирующим митохондриальные белки, которые заслуживают более тщательного изучения. Во-вторых, одним из самых больших препятствий в диагностике является установление патогенности вариантов пациента, и наши данные предоставляют как предварительные функциональные доказательства клеточного фенотипа OXPHOS, так и проверенные реагенты CRISPR для быстрого подтверждения патогенности мутации (Таблица S3).Подобно нашему CRISPR-опосредованному истощению и восстановлению NGRN, описанному в, мы предполагаем, что варианты пациентов могут быть повторно введены, и их патогенность может быть проверена на простой и количественный галактозоспецифический фенотип смерти. Этот подход представляет собой альтернативу необходимости инвазивной биопсии для получения фибробластов, полученных от пациента, и проведения биохимических анализов.
Хотя большинство наших совпадений кодируют белки, локализованные в митохондриях, небольшое количество кодирует белки, локализованные в других компартментах.Хотя многие из этих немитохондриальных белков, вероятно, представляют собой ложные открытия, несколько путей, локализованных за пределами митохондрий, имеют высокий балл. Путь YY1 / INO80, как сообщалось ранее, регулирует митохондриальный биогенез на уровне транскрипции (Cunningham et al., 2007). На нашем экране также были идентифицированы пять участников сигнального пути AMPK. AMPK традиционно рассматривается как датчик заряда клеточной энергии и реагирует на повреждения митохондриальной продукции АТФ. Здесь мы обнаруживаем, что потеря самого пути AMPK приводит к избирательной гибели галактозы по сравнению с глюкозой.Будущие исследования потребуются, чтобы определить, почему потеря AMPK приводит к избирательной гибели галактозы по сравнению с глюкозой и связан ли этот фенотип с OXPHOS.
Наш перечень недавно идентифицированных генов, необходимых для OXPHOS, включает пять ранее не охарактеризованных белков (NGRN, WBSCR16, RPUSD3, RPUSD4 и TRUB2), которые вместе с FASTKD2, как мы теперь показываем, образуют митохондриальный модуль, необходимый для внутримитохондриальной трансляции белков. В частности, мы представляем здесь первую характеристику NGRN, важного митохондриального РНК-связывающего белка.Мы смогли подтвердить митохондриальную локализацию NGRN и его роль в специфической регуляции митохондриальной 16S рРНК и внутримитохондриальной трансляции. Используя иммунопреципитацию белков и масс-спектрометрию, мы идентифицировали и подтвердили взаимодействие NGRN с WBSCR16, RPUSD3, RPUSD4, TRUB2 и FASTKD2. Истощение любого из этих генов нарушает трансляцию митохондрий за счет снижения уровня митохондриальной 16S рРНК. Роль FASTKD2 в регуляции метаболизма митохондриальной РНК была подтверждена другими исследователями (Antonicka and Shoubridge, 2015; Jourdain et al., 2015; Popow et al., 2015), но отсутствия FASTKD2 было недостаточно для запуска фенотипа гибели глюкозы / галактозы в клетках K562. Хотя сначала этот результат кажется несовместимым с сообщениями о том, что бессмысленные мутации в FASTKD2 ответственны за семейный случай митохондриальной энцефаломиопатии, следует отметить, что пациенты с мутациями FASTKD2 имеют симптомы, ограниченные мышцами и ЦНС, и фибробласты от одних и тех же пациентов бессимптомны, что свидетельствует о тканевой специфичности некоторых митохондриальных заболеваний (Ghezzi et al., 2008). Среди других белков, взаимодействующих с NGRN, интересно, что RPUSD3, RPUSD4 и TRUB2 являются предполагаемыми псевдоуридинсинтазами. Формируется ли функциональный модуль (), содержащий NGRN и псевдоуридинсинтазы, одним или несколькими перекрывающимися белковыми комплексами, здесь не рассматривалось, но поразительно, что истощение любой из этих псевдоуридинсинтаз приводит к сходным дефектам в изобилии 16S рРНК. Давно известно, что митохондриальная 16S рРНК сама является псевдоуридилированной (Ofengand and Bakin, 1997), хотя фермент, ответственный за эту модификацию, остается неуловимым.Более того, цель псевдоуридилирования не ясна, хотя предполагалось, что оно помогает обеспечить структуру РНК. Поскольку NGRN связывается по крайней мере с одним из предшественников 16S рРНК в дополнение к предполагаемым псевдоуридинсинтазам, мы предполагаем, что функциональный модуль, который мы идентифицировали здесь, может опосредовать псевдоуридилирование 16S и принимать участие в раннем этапе биогенеза митохондриальных рибосом. Дальнейшие исследования необходимы для подтверждения этой гипотезы и демонстрации степени псевдоуридилирования в митохондриях.
В общем, наше преобразование экрана роста отрицательного выбора в экран смерти положительного выбора должно иметь широкую пользу. Традиционные экраны роста отрицательного отбора имеют ограниченную мощность. Точная количественная оценка истощенных попаданий является сложной задачей из-за низкого уровня сигнала, и необходимо поддерживать большое количество клеток, чтобы избежать случайной потери генов из-за генетического дрейфа. Более того, гены, необходимые для устойчивого роста клеток, не могут быть проанализированы на фенотип роста в других условиях, потому что они всегда сильно истощены.Это ограничение вызывало особую озабоченность в ходе нашего скрининга генов OXPHOS, потому что, хотя человеческие клетки могут выжить без OXPHOS в глюкозе, они все равно будут в невыгодном положении по сравнению с OXPHOS-компетентными клетками. Здесь мы ввели метод, с помощью которого мы активно отбираем умирающие клетки и подвергаем их глубокому секвенированию, а наш подход к скринингу смерти широко применим за пределами метаболических исследований. Например, в биологии рака существует значительный интерес к выявлению механизмов лекарственной устойчивости и чувствительности, определению синтетических летальных путей и превращению цитостатических препаратов в цитотоксические агенты.Скрининг смерти с использованием генетических библиотек потери или увеличения функции хорошо подходит для таких исследований.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ПРОЦЕДУРЫ
Клеточные линии
Клетки K562, HeLa и HEK293T были получены из ATCC и сохранены в DMEM (Invitrogen) с 25 мМ глюкозы, 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS, Invitrogen), 1 мМ пирувата натрия, 50 мкг / мл уридина и 100 Ед / мл пенициллин / стрептомицин при 5% CO 2 при 37 ° C.
Скрининг гибели клеток глюкозы и галактозы
Клетки K562, экспрессирующие Cas9 и EGFP, были инфицированы полногеномной лентивирусной библиотекой Avana-4 CRISPR (Doench et al., 2016). Были выполнены две повторности заражения. Инфицированные клетки отбирали в течение 4 дней с 2 мкг / мл пуромицина (Life Technologies), после чего отбирали образец клеток для определения исходного содержания sgRNA. Клетки размножали в течение дополнительных 6 дней, промывали PBS и культивировали в DMEM с 10 мМ глюкозы или галактозы, 10% диализованным FBS (dFBS, Life Technologies), 1 мМ пируватом натрия, 50 мкг / мл уридина и 100 ед. / мл пенициллин / стрептомицин. Клетки перед заменой собирали перед заменой среды.После 24-часового культивирования в среде с глюкозой или галактозой мертвые клетки Аннексин V + очищали с использованием магнитных микрошариков с аннексином V и колонок с положительной селекцией для масс-спектрометрии (МС) (Miltenyi Biotec). Геномную ДНК выделяли из всех образцов, последовательности sgRNA амплифицировали с помощью ПЦР и секвенировали на HiSeq 2500 (Illumina). MAGeCK (v0.4.4) использовался для оценки генов при каждом условии по сравнению с контрольными образцами до обмена (Li et al., 2014). Подробности см. В дополнительных экспериментальных процедурах.
Статистический анализ
Средние выборки между контрольными условиями и условиями обработки сравнивали с помощью t-критерия после подтверждения того, что данные были нормально распределены и образцы имели аналогичную дисперсию, как было оценено с помощью SEM. Планки погрешностей на рисунках соответствуют SEM. Все статистические тесты были представлены с двусторонними значениями p.
Анализ пути
Гены Mito Carta2.0 были разделены на неперекрывающиеся категории на основе GO, Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG) и ручных аннотаций.Обогащение митохондриальных попаданий по генным категориям оценивали с помощью теста Фишера. Чтобы идентифицировать термины GO, обогащенные среди немитохондриальных попаданий из экрана смерти глюкозы / галактозы, использовался инструмент GOrilla (http://cbl-gorilla.cs.technion.ac.il/) (Eden et al., 2009) . Немитохондриальные хиты с FDR галактозы ниже 30% использовались в качестве генов-мишеней, тогда как все другие немитохондриальные гены в библиотеке CRISPR использовались в качестве фоновых генов. Термины GO с q <0,01, которые также были наиболее специфичными из перекрывающихся терминов в иерархии GO, считались значимыми и приводятся здесь.
Анализ гибели клеток
Гибель клеток в клетках, обработанных ингибиторами RC или ген-специфическими sgRNA, измеряли путем окрашивания клеток конъюгатом аннексина V Alexa Fluor 647 (Invitrogen) в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, клетки промывали ледяным PBS, инкубировали с красителем в течение 15 минут при комнатной температуре, а затем анализировали проточной цитометрией на BD Accuri C6 (BD Biosciences).
Потребление кислорода
1,25 × 10 5 Клетки K562 высевали на планшет Seahorse, покрытый клеточным и тканевым адгезивом Cell-Tak ™ (Corning Life Sciences) в среде DMEM, содержащей 1 г / л глюкозы и 50 мкг / мл уридина. потребление кислорода регистрировали с помощью анализатора Seahorse XF96 (Seahorse Biosciences).
Ингибирование AMPK
Клетки HeLa обрабатывали трипсином, промывали в PBS и высевали в среду, содержащую глюкозу или галактозу, в присутствии ДМСО или 2 мкМ соединения C (дорсоморфин, Abcam). Клетки были визуализированы через 16 часов.
Трансляция митохондрий
10 6 Клетки K562, экспрессирующие соответствующие sgRNA, промывали PBS и инкубировали в течение 30 мин в 1 мл среды для метки (10% dFBS, 1 мМ пируват натрия и 50 мкг / мл уридина в DMEM без метионин / цистеин; Sigma).Эметин (Sigma) добавляли до конечной концентрации 200 мкг / мл, и клетки инкубировали в течение 5 минут перед добавлением 50 мкКи 35 S-меченной смеси метионин / цистеин (PerkinElmer) и инкубацией в течение 1 часа. Клетки извлекали и дважды промывали PBS перед лизисом и количественным определением содержания белка (анализ белка DC , Bio-Rad). 50 мкг общих белков загружали на 10-20% SDS-PAGE (Life Technologies) и переносили на мембрану из поливинилиденфторида (PVDF) перед авторадиографией.Стадия переноса была включена, чтобы обеспечить чувствительный иммуноблоттинг с анти-актиновыми антителами для обеспечения равной нагрузки. Во всех экспериментах дубликат контрольной дорожки обрабатывали хлорамфениколом (50 мкг / мл) для обеспечения митохондриального происхождения сигнала 35 S. Название, связанное с каждой полосой, предлагается на основе их относительной численности и молекулярной массы и основано на предыдущих исследованиях (Fernández-Silva et al., 2007).
КПЦР
КПЦР выполняли с использованием технологии TaqMan (Life Technologies).РНК экстрагировали из всех клеток с помощью набора RNeasy (QIAGEN) и расщепляли ДНКазой-I перед обратной транскрипцией вируса лейкемии мышей (MLV) с использованием случайных праймеров (Promega) и кПЦР. Все данные были нормализованы до ТБП .
Иммунопреципитация, коиммунопреципитация и масс-спектрометрия
Для иммунопреципитации версия NGRN или WBSCR16, меченная 3xFLAG, была клонирована в pWPI-Neo (Addgene), и были получены вирусы. Клетки HEK293T, стабильно экспрессирующие GFP или FMC1-FLAG (неродственный митохондриальный белок), использовали в качестве отрицательного контроля (контроль 1 и контроль 2, соответственно).Через 24 часа после инфицирования клетки HEK293T отбирали с 0,5 мг / мл Генетицина (Life Technologies) в течение 48 часов и размножали. Неочищенный препарат митохондрий выделяли дифференциальным центрифугированием и лизировали в буфере для лизиса, содержащем 50 мМ Трис / HCl (pH 7,5), 150 мМ NaCl, 1 мМ MgCl 2 , 1% NP-40, 3 мМ комплекс ванадилат РНКазы, 1 × ингибитор протеазы и фосфатазы (Cell Signaling Technology) и 40 ед / мл РНКзина (Promega). РНКзин не добавляли, когда использовали РНКазу A (20 мкг / мл, Thermo Scientific).Промытые магнитные шарики FLAG M2 (Sigma) добавляли к лизату и инкубировали в течение ночи при 4 ° C. Гранулы собирали после обширной промывки, и комплексы белок / РНК элюировали 100 мкг / мл пептида 3xFLAG (Sigma). Для выделения РНК элюат обрабатывали ДНКазой I (Promega) в течение 1 часа при 37 ° C перед очисткой РНК (набор RNeasy, QIAGEN). Для выделения белка элюат осаждали с использованием трихлоруксусной кислоты (TCA) и анализировали с помощью масс-спектрометрии на установке Whitehead Proteomics или с помощью иммуноблоттинга белков.Пептиды были идентифицированы и количественно определены с использованием метода общего ионного тока Top 3 (TIC) (Scaffold4). Затем взаимодействующие белки были отобраны на основе следующих критериев: присутствие в MitoCarta2.0 и> 2-кратное обогащение по сравнению с любым контролем. Реплики представляют собой независимые эксперименты, проведенные с интервалом в 4 месяца. Для коиммунопреципитации кДНК RPUSD3-V5, RPUSD4-V5 и TRUB2-V5 получали из коллекции Broad ORFeome и коэкспрессировали с NGRN-3xFLAG в клетках HEK293T. Через три дня после заражения целые клетки ресуспендировали в буфере для лизиса и осветляли центрифугированием (5 мин, 2,000 × g ).Иммунопреципитацию проводили при комнатной температуре с помощью антител против FLAG (Sigma) или против V5 (Abcam) с использованием набора для иммунопреципитации белка G Dynabeads (Thermo Fisher).
Основные моменты
Скрининг смерти — это новый метод, использующий активный отбор и секвенирование мертвых клеток
Опубликован высококачественный каталог генов, необходимых для человеческого ОКСФО
NGRN, WBSCR16, RPUSD3, RPUSD3, RPUSD3 , TRUB2 и FASTKD2 образуют регуляторный модуль 16S рРНК
Благодарности
Мы благодарим R.Гопал, X.R. Бао и члены V.K.M. лаборатория для советов и отзывов о рукописи; Э. Спунеру за помощь с масс-спектрометрией; Ю. Ли за вычислительную помощь; С. Шварцу и А. Регеву за плодотворные обсуждения; и Л. Соломон за помощь в графическом дизайне. Эта работа была поддержана грантом NIH R01-GM077465 (для V.K.M.), долгосрочной стипендией EMBO ALTF 554-2015 (для A.A.J.) и Фондом нового поколения в Институте Броуда Массачусетского технологического института и Гарварда (для J.G.D.). В.К.М. является исследователем Медицинского института Говарда Хьюза.
Сноски
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ
Дополнительная информация включает дополнительные экспериментальные процедуры, четыре рисунка и пять таблиц, и ее можно найти вместе с этой статьей на сайте http://dx.doi.org/10.1016/j.cmet.2016.08 .017.
ВЗНОС АВТОРОВ
J.D.A., A.A.J. и V.K.M. задумал проект и разработал эксперименты. J.D.A., A.A.J. и C.A.B. проводил эксперименты. J.D.A., A.A.J., S.E.C. и J.G.Д. провел анализ данных. D.E.R. и В.К.М. руководил работой. J.D.A., A.A.J. и V.K.M. написал рукопись при участии всех авторов.Ссылки
- Антоника Х., Шубридж Э.А. Гранулы митохондриальной РНК являются центрами посттранскрипционной обработки РНК и биогенеза рибосом. Cell Rep. 2015; 10: 920–932. [PubMed] [Google Scholar]
- Байона-Бафалуй, член парламента, Санчес-Кабо Ф., Фернандес-Сильва П., Перес-Мартос А., Энрикес Я. Скрининг shRNA в масштабе всего генома на предмет выявления новых генов, связанных с OxPhos.Митохондрия. 2011; 11: 467–475. [PubMed] [Google Scholar]
- Calvo SE, Clauser KR, Mootha VK. MitoCarta2.0: обновленный перечень митохондриальных белков млекопитающих. Nucleic Acids Res. 2016; 44 (D1): D1251 – D1257. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Castello A, Fischer B, Eichelbaum K, Horos R, Beckmann BM, Strein C, Davey NE, Humphreys DT, Preiss T, Steinmetz LM, et al. Понимание биологии РНК из атласа мРНК-связывающих белков млекопитающих. Клетка. 2012; 149: 1393–1406.[PubMed] [Google Scholar]
- Каннингем Дж. Т., Роджерс Дж. Т., Арлоу Д.Х., Васкес Ф., Мутха В.К., Пуигсервер П. mTOR контролирует окислительную функцию митохондрий через транскрипционный комплекс YY1-PGC-1alpha. Природа. 2007; 450: 736–740. [PubMed] [Google Scholar]
- Диас Ф., Котарски Х., Феллман В., Мораес CT. Митохондриальные нарушения, вызванные мутациями факторов сборки дыхательной цепи. Semin Fetal Neonatal Med. 2011; 16: 197–204. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Doench JG, Fusi N, Sullender M, Hegde M, Vaimberg EW, Donovan KF, Smith I., Tothova Z, Wilen C, Orchard R, et al.Оптимизированный дизайн sgRNA для максимизации активности и минимизации нецелевых эффектов CRISPR-Cas9. Nat Biotechnol. 2016; 34: 184–191. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Eden E, Navon R, Steinfeld I, Lipson D, Yakhini Z. GOrilla: инструмент для открытия и визуализации обогащенных терминов GO в ранжированных списках генов. BMC Bioinformatics. 2009; 10: 48. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Фернандес-Силва П., Асин-Перес Р., Фернандес-Визарра Е., Перес-Мартос А., Энрикес Дж. А.. Анализ митохондриальной трансляции in vivo и in органеллы.Методы Cell Biol. 2007. 80: 571–588. [PubMed] [Google Scholar]
- Ghezzi D, Saada A, D’Adamo P, Fernandez-Vizarra E, Gasparini P, Tiranti V, Elpeleg O, Zeviani M. Нонсенс-мутация FASTKD2 в детской митохондриальной энцефаломиопатии с оксидом дефицит. Am J Hum Genet. 2008; 83: 415–423. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Gohil VM, Sheth SA, Nilsson R, Wojtovich AP, Lee JH, Perocchi F, Chen W., Clish CB, Ayata C., Brookes PS, Mootha VK.Сенсибилизированный к питательным веществам скрининг препаратов, которые переводят энергетический метаболизм с митохондриального дыхания на гликолиз. Nat Biotechnol. 2010. 28: 249–255. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Харт Т., Чандрашекхар М., Ареггер М., Стейнхарт З., Браун К.Р., МакЛеод Дж., Мис М., Циммерманн М., Фраде-Тюркотт А., Сан С. и др. Скрины CRISPR с высоким разрешением выявляют гены приспособленности и специфические для генотипа факторы рака. Клетка. 2015; 163: 1515–1526. [PubMed] [Google Scholar]
- Исигаки С., Нива Дж., Йошихара Т., Мицума Н., Дою М., Собуэ Г.Два новых гена, нейгрин человека и м-нейгрин мыши, активируются при нейрональной дифференцировке в клетках нейробластомы. Biochem Biophys Res Commun. 2000. 279: 526–533. [PubMed] [Google Scholar]
- Журден А.А., Коппен М., Родли С.Д., Маундрелл К., Геген Н., Рейнир П., Гуарас А.М., Энрикес Дж.А., Андерсон П., Симарро М., Мартину Дж.С. Специфическая для митохондрий изоформа FASTK присутствует в гранулах митохондриальной РНК и регулирует экспрессию и функцию генов. Cell Rep. 2015; 10: 1110–1121. [PubMed] [Google Scholar]
- King MP, Attardi G.Клетки человека, лишенные мтДНК: репопуляция экзогенными митохондриями путем комплементации. Наука. 1989; 246: 500–503. [PubMed] [Google Scholar]
- Кишита Ю., Паяк А., Болар Н.А., Мароббио С.М., Маффеццини С., Миньеро Д.В., Монне М., Кохда М., Страннехейм Х., Мураяма К. и др. Дефицит внутримитохондриального метилирования из-за мутаций в SLC25A26. Am J Hum Genet. 2015; 97: 761–768. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Li W, Xu H, Xiao T, Cong L, Love MI, Zhang F, Irizarry RA, Liu JS, Brown M, Liu XS.MAGeCK обеспечивает надежную идентификацию основных генов с помощью нокаут-экранов CRISPR / Cas9 в масштабе генома. Genome Biol. 2014; 15: 554. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Луо Б., Чунг Х.В., Субраманиан А., Шарифния Т., Окамото М., Янг Х, Хинкль Дж., Бем Дж. С., Бероухим Р., Вейр Б. А. и др. Высоко параллельная идентификация основных генов в раковых клетках. Proc Natl Acad Sci USA. 2008; 105: 20380–20385. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Martin SJ, Reutelingsperger CP, McGahon AJ, Rader JA, van Schie RC, LaFace DM, Green DR.Раннее перераспределение фосфатидилсерина плазматической мембраны является общим признаком апоптоза независимо от инициирующего стимула: ингибирование сверхэкспрессией Bcl-2 и Abl. J Exp Med. 1995; 182: 1545–1556. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Нуннари Дж., Суомалайнен А. Митохондрии: в болезни и в здоровье. Клетка. 2012; 148: 1145–1159. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Офенганд Дж., Бакин А. Картирование нуклеотидных остатков псевдоуридиновых остатков в рибосомных РНК большой субъединицы репрезентативных эукариот, прокариот, архебактерий, митохондрий и хлоропластов.J Mol Biol. 1997. 266: 246–268. [PubMed] [Google Scholar]
- Пальярини Д. Д., Кальво С. Е., Чанг Б., Шет С. А., Вафай С. Б., Онг С. Е., Уолфорд Г. А., Сугиана С., Бонех А., Чен В. К. и др. Компендиум митохондриальных белков объясняет биологию заболевания, связанного с комплексом I. Клетка. 2008. 134: 112–123. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Pfeffer G, Horvath R, Klopstock T., Mootha VK, Suomalainen A, Koene S, Hirano M, Zeviani M, Bindoff LA, Yu-Wai-Man P, et al. . Новые методы лечения митохондриальных заболеваний — не время отказываться от наших стандартов.Nat Rev Neurol. 2013; 9: 474–481. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Popow J, Alleaume AM, Curk T, Schwarzl T, Sauer S, Hentze MW. FASTKD2 — это РНК-связывающий белок, необходимый для процессинга и трансляции митохондриальной РНК. РНК. 2015; 21: 1873–1884. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Reitzer LJ, Wice BM, Kennell D. Доказательства того, что глутамин, а не сахар, является основным источником энергии для культивируемых клеток HeLa. J Biol Chem. 1979; 254: 2669–2676. [PubMed] [Google Scholar]
- Робинсон Б.Х., Петрова-Бенедикт Р., Бунчич Дж. Р., Уоллес, округ Колумбия.Нежизнеспособность клеток с окислительными дефектами в среде галактозы: скрининговый тест для пораженных фибробластов пациента. Biochem Med Metab Biol. 1992. 48: 122–126. [PubMed] [Google Scholar]
- Штейнмец Л.М., Шарфе С., Дойчбауэр А.М., Мокраньяк Д., Герман З.С., Джонс Т., Чу А.М., Гайевер Дж., Прокиш Х., Офнер П.Дж., Дэвис Р.В. Систематический скрининг генов болезней человека в дрожжах. Нат Жене. 2002. 31: 400–404. [PubMed] [Google Scholar]
- Тейлор Р.В., Пайл А., Гриффин Х., Блейкли Е.Л., Дафф Дж., Хе Л., Смертенко Т., Алстон К.Л., Нив В.К., Бест А. и др.Использование всего экзомного секвенирования для определения генетической основы множественной недостаточности комплекса митохондриальной дыхательной цепи. ДЖАМА. 2014; 312: 68–77. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Vafai SB, Mootha VK. Митохондриальные нарушения как окно в древнюю органеллу. Природа. 2012; 491: 374–383. [PubMed] [Google Scholar]
- van den Bosch BJ, Gerards M, Sluiter W., Stegmann AP, Jongen EL, Hellebrekers DM, Oegema R, Lambrichs EH, Prokisch H, Danhauser K, et al. Дефектный NDUFA9 как новая причина неонатально летального заболевания комплекса I.J Med Genet. 2012; 49: 10–15. [PubMed] [Google Scholar]
- VanderSluis B, Hess DC, Pesyna C, Krumholz EW, Syed T., Szappanos B, Nislow C, Papp B, Troyanskaya OG, Myers CL, Caudy AA. Широкий профиль метаболической чувствительности коллекции делеций прототрофных дрожжей. Genome Biol. 2014; 15: R64. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Уоллес, округ Колумбия. Митохондриальная ДНК при старении и болезнях. Sci Am. 1997. 277: 40–47. [PubMed] [Google Scholar]
- Уитон В.В., Вайнберг С.Е., Хаманака Р. Б., Соберанес С., Салливан Л. Б., Ансо Е., Глазауэр А., Дюфур Е., Мутлу Г. М., Будигнер Г. С., Шандель Н. С..Метформин ингибирует митохондриальный комплекс I раковых клеток, снижая онкогенез. eLife. 2014; 3: e02242. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Zhou G, Myers R, Li Y, Chen Y, Shen X, Fenyk-Melody J, Wu M, Ventre J, Doebber T., Fujii N, et al. Роль АМФ-активированной протеинкиназы в механизме действия метформина. J Clin Invest. 2001; 108: 1167–1174. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Когда мне в первый раз посетить детского стоматолога?
Наш офис, а также Американская ассоциация детской стоматологии (AAPD), Американская стоматологическая ассоциация (ADA) и Американская академия педиатрии 5 (AAP) все рекомендуют создать «стоматологический дом» для вашего ребенка к годам .
Есть много причин для того, чтобы основать дом раньше срока. Точно так же, как педиатр (или детский врач) очень важен для здоровья вашего ребенка, детский стоматолог специально обучен проактивно проверять проблемы до того, как они возникнут.
Создание стоматологического дома для ребенка дает возможность внедрить профилактические стоматологические привычки, которые отвечают уникальным потребностям каждого ребенка и защищают ребенка от стоматологических или стоматологических заболеваний. Наш детский стоматолог в VK Pediatric Dentistry в Арлингтоне, штат Вирджиния, занимается этим уже много лет и подобрал уловки и советы, а также обладает экспертными знаниями, которые могут помочь вам получить самый лучший набор информации. убедитесь, что у ваших детей не будет кариеса.
Мы получаем так много вопросов, от «какой зубной щетки лучше всего пользоваться» до «с какого возраста лучше отказаться от использования соски-пустышки». Регулярные посещения — лучший способ получить ответы на эти вопросы, а также с учетом конкретных потребностей вашего ребенка. Мы не верим в универсальный подход.
Профилактическое консультирование, инструктаж по диете и питанию, а также обследование, чтобы убедиться, что все зубы развиваются и прорезываются правильно. Хотя это случается редко, регулярный осмотр может помочь выявить такие вещи, как пороки прикуса, расхождения зубов, патологии, ранние признаки кариеса.Они также могут помочь составить индивидуальный план, чтобы ваш ребенок добился наибольших успехов в продвижении вперед. Наша цель — создать веселую, обучающую среду, и чтобы все дети, которых мы видим, были вооружены знаниями, чтобы заботиться о своих зубах на всю жизнь.
VK Детская стоматология надеется стать стоматологическим домом для ваших детей, установив комфортные доверительные отношения между нашим стоматологом, вашими детьми и вами!
VK Детская стоматология
5001 Lee Hwy, Arlington VA 22207
www.smilewithvk.com
#smilewithvk
VK World VK6735 — Полные характеристики и обзор 2019
VK World VK6735 — Android-смартфон от производителя VKworld, который включает Android 5.0 Lollipop и был представлен в марте 2015 года. . Мы увидим характеристики, преимущества и аспекты VK World VK6735 в подробном обзоре на HelpAndroid.com.
Характеристики дизайна
Размер стал довольно важным элементом при выборе смартфона.Размеры вашего VK World VK6735 составляют 73,0 мм x 143,0 мм x 7,2 мм (ширина x высота x глубина) при весе нетто 158 г. В состав вашего VK World VK6735 входит большое количество элементов, в состав которых входит пластик. Обратите внимание, что этот сотовый телефон продается в следующих цветах: синий.Характеристики дисплея
В дисплее вашего смартфона VK World VK6735 используется технология LCD IPS для отображения всех изображений, видеоигр и т. Д. Этот экран дает разрешение 720 x 1280 пикселей (HD) для экрана с диагональю 5 дюймов .Рассчитать полезную площадь экрана VK World VK6735 просто. Анализируем процентное соотношение экрана к габаритам мобильного телефона. Чем выше процент, тем больше у вас будет значительный экран (без рамки). У этого смартфона соотношение экрана к размеру 66%.Экран дисплея VK World VK6735 включает такие функции, как: емкостный, мультитач.
Технические характеристики оборудования и производительности
Мобильный телефон VK World VK6735 использует один процессор MediaTek MT6735M и один четырехъядерный процессор ARM Cortex-A53 с тактовой частотой 1 ГГц .Этот превосходный смартфон имеет процессор с 64-битной архитектурой
Что касается графической части, VK World VK6735 включает в себя видеокарту ARM Mali-T720 MP4
VK World VK6735 оснащен 1 ГБ оперативной памяти . Вы сможете использовать 8 ГБ памяти для сохранения вашего контента, фотографий, воспоминаний, архивов, любимых мелодий…. Вы сможете разместить еще больше памяти благодаря наличию SD SLOT.
Технические характеристики камеры
VK World VK6735 поставляется вместе с задней камерой 8 Mpx и объективом с диафрагмой f / 2.2 Неизвестная модель и тип CMOS со светодиодной вспышкой.
Среди других функций камеры этого смартфона мы находим: автофокус, цифровой зум, компенсацию экспозиции, определение лица, геотегирование, hdr, настройки iso, ручную фокусировку, панораму, сюжетный режим, сенсорный фокус, настройки баланса белого
Характеристики подключения
Чип WIFI VK World VK6735 определенно позволит вам подключаться к следующим сетям: 802.11b, 802.11g, 802.11n (точка доступа Wi-Fi).
Если рассматривать возможность беспроводного подключения, следующий мобильный телефон поддерживает Bluetooth 4.0. Помимо беспроводной связи, VK World VK6735 будет также оснащен USB-зарядкой, USB-накопителем, USB-синхронизацией с ПК, OTA (по воздуху),…Характеристики сетевого подключения
The VK World VK6735 совместим с такими типами сетей и частот 4G (LTE): B1 (2100), B3 (1800), B7 (2600), B20 (800). VK World VK6735 будет работать с такими типами сетей 3G (UMTS) и частотами: B1 (2100), B2 (1900), B5 (850), B8 (900). VK World VK6735 будет работать со всеми следующими сетями и частотами 2G: B2 (1900), B3 (1800), B5 (850), B8 (900).VK World VK6735 — это мобильный телефон, который позволяет использовать более одной SIM-карты благодаря сертификации Dual SIM Dual Standby (Micro SIM + Micro SIM)
Технические характеристики аккумулятора
Аккумулятор VK World VK6735 литий-полимерный типа с полной мощностью заряда 3000 мАчДекабрьское издание — Информационный бюллетень | VK Transformation
По мере того, как мы выходим из тяжелого и неспокойного года для многих предприятий, с наступлением 2021 года мы сталкиваемся с новыми возможностями и проблемами.С какими тенденциями вы столкнетесь, когда ваша компания перейдет от режима выживания к режиму роста и ускорения?
Маркетинг на основе цифровых учетных записей (ABM) для предприятий B2B
«Команда VKT использовала творческое и нестандартное мышление и инструменты для правильного определения основных контактов с заинтересованными сторонами в Азиатско-Тихоокеанском регионе и сгенерировала для нас квалифицированные продажи потенциальных клиентов в короткий промежуток времени, несмотря на пандемию COVID-19 ». ~ Директор, Юго-Восточная Азия, RSA
Наш преобразующий опыт работы с уважаемыми клиентами, такими как RSA Security, научил нас, что маркетинг на основе учетных записей (ABM) будет одной из самых заметных тенденций в пространстве цифрового маркетинга для компаний B2B.Итак, что такое маркетинг на основе аккаунта? И почему это так важно?
Принцип работы ABM заключается в том, что он позволяет персонализировать процесс генерации лидов. Это целенаправленный подход для связи с наиболее перспективными клиентами, которые обеспечат вам максимальную рентабельность инвестиций с помощью ваших стратегий цифрового маркетинга, чтобы более эффективно привлекать и конвертировать ваших клиентов.
Омниканальный маркетинг для предприятий B2C
По мере того, как все более традиционные компании переходят на цифровую платформу, становится важным обеспечить единообразное взаимодействие с клиентами по нескольким каналам.VKT помогла в преобразовании бренда здоровых закусок All Kurma Singapore из оптовой компании в компанию, напрямую обращающуюся к потребителю / бизнесу в 2020 году. Мы предоставили им интегрированное решение для цифрового маркетинга, чтобы согласовать их цифровой брендинг, маркетинг и коммуникационные усилия во всех сферах. несколько каналов для положительных KPI.
Итак, что такое омниканальный маркетинг? Он предоставляет клиентам интегрированный опыт покупок, который обеспечивает единообразие брендов и маркетинговых стратегий по разным каналам, так что путь клиента персонализируется и поддерживается независимо от того, на какой платформе он взаимодействует с брендом.
НАЧНИТЕ 2021 ПРАВИЛЬНО, ПРИНИМАЯ ЦИФРОВУЮ ПРОДАЖУ И МАРКЕТИНГ ДИАГНОСТИКУ VKT
Итак, какими должны быть ваши следующие шаги? Начните с более глубокого понимания того, где находится ваша компания, чтобы вы могли лучше оценить свои возможности и требования, чтобы найти правильные решения цифрового маркетинга для вас.
Пройдите быструю и простую диагностику цифровых продаж и маркетинга VK Transformation, чтобы определить, на каком этапе развития находится ваша компания в своем жизненном цикле.
ДЛЯ ПОДРОБНОЙ ИНФОРМАЦИИ СВЯЖИТЕСЬ С НАШЕЙ КОМАНДОЙ
Vivien Koh
Основатель и управляющий директор
Практикующий консультант по вопросам управления
Шерил Чиа
Аналитик по эффективному маркетингу
Сэмми Чан
Консультант по цифровому маркетингу
Прия Тригунайят
Консультант по маркетингу цифрового контента
Для получения дополнительной информации свяжитесь с нами на нашем веб-сайте и поделитесь нашим информационным бюллетенем.
Универсальный скрининг билирубина на тяжелую неонатальную гипербилирубинемию
Постнатальная гипербилирубинемия универсальна и проявляется желтухой новорожденных у более чем 80% всех новорожденных в США. Обычно уровни билирубина повышаются вскоре после рождения и обычно следуют своей часовой перцентильной траектории, остаются в пределах своих зон риска и снижаются к концу первой недели. Однако в некоторых случаях повышение уровня билирубина либо продолжается, либо ускоряется. Таким образом, неконтролируемая и нелеченная тяжелая гипербилирубинемия может прогрессировать до чрезмерных уровней, которые могут быть связаны с явной нейротоксичностью билирубина (таблица 1).Цель этого обзора — продвигать универсальный скрининг билирубина перед выпиской для выявления младенцев с уровнем билирубина> 75-го перцентиля для возраста в часах и отслеживать детей с быстрым повышением билирубина (> 0,2 мг на 100 мл в час). Сообщалось, что раннее выявление позволяет прогнозировать тяжелую гипербилирубинемию и позволяет проводить целевые вмешательства, основанные на фактических данных. Системный подход может снизить количество предотвратимых причин острой билирубиновой энцефалопатии (ABE).
Таблица 1 Частота тяжелой гипербилирубинемии у доношенных и поздних недоношенных детей (адаптировано из Johnson et al. 2 )Общие сведения
Ядра, предотвратимая форма неонатального повреждения головного мозга, связанного с билирубином, в настоящее время встречается в Соединенных Штатах и вызывает озабоченность общественности и общества. 1, 2 Травма обычно проявляется необратимыми постиктерическими последствиями; Отличительным признаком, обычно при вскрытии, является желтушное (желтое) окрашивание базальных ганглиев, особенно бледного шара. С помощью современных технологий это может быть подтверждено в этом месте как усиление сигналов на магнитно-резонансном изображении.Травма возникает, когда уровень общего билирубина в сыворотке (TSB) превышает нейропротекторную защиту младенца и приводит к повреждению нейронов, в первую очередь в базальных ганглиях, центральных и периферических слуховых путях, гиппокампе, промежуточном мозге, субталамических ядрах, среднем мозге, костном мозге и ядрах ствола мозга для глазодвигательного аппарата. функциональный, респираторный, нейрогуморальный и электролитный контроль и в мозжечке, особенно в черве. 3, 4 ABE включает прогрессивные изменения психического (поведенческого) статуса младенца, мышечного тонуса и плач с различной степенью сонливости, плохого питания, гипотонии и чередующегося тонуса с последующим усилением гипертонуса, особенно мышц-разгибателей, ретроколлиса и опистотонуса, прерывистого а потом более суровый и постоянный.Смертность на острой стадии (около 7%) возникает из-за дыхательной недостаточности и прогрессирующей комы или трудноизлечимых судорог. Скорость прогрессирования клинических признаков зависит от скорости повышения билирубина, продолжительности гипербилирубинемии, восприимчивости хозяина и наличия сопутствующих заболеваний. 5, 6, 7 Термин ядерная желтуха в настоящее время обычно используется для обозначения необратимых классических осложнений, диагностируемых у младенцев, переживших АБЭ и диагностируемых в основном как дистония, атетоидный церебральный паралич, паралич взгляда вверх и нейросенсорная потеря слуха различной степени тяжести.Познание обычно в разительной степени щадит. Неврологическая дисфункция, вызванная билирубином, представляет собой более широкий спектр расстройств, который включает классическую ядерную желтуху и ABE, а также клинические свидетельства повреждения, ограниченного более узкими нервными путями, что приводит к изолированным, менее тяжелым формам слуховой невропатии (слуховой дис-синхронии), определяемой характерными клиническими проявлениями. Критерии и отличительные данные о слуховом стволе мозга вызвали реакцию без серьезной потери слуха или аналогичной слуховой невропатии, связанной с минимальной мелкой и / или грубой двигательной инвалидностью. 7 Хотя это еще не доказано, некоторые эксперты полагают, что могут иметь место еще более тонкие неврологические проявления вызванной билирубином неврологической дисфункции только с признаками неловкости, минимальной мелкой и крупной моторной несогласованностью и аномалиями походки, тонким тремором, преувеличенными экстрапирамидными рефлексами 8 и, возможно, проблемы с обучением и поведением. Эти малозаметные признаки трудно диагностировать из-за отсроченного клинического проявления и неспецифичности, но их важно искать в качестве возможных последствий ABE, которые требуют образовательного или профессионального вмешательства.Клиническая предрасположенность к неврологической дисфункции, вызванной билирубином, включает недоношенность, быстрое повышение уровня билирубина (обычно связанное с гемолизом), асфиксию, сепсис, гипоальбуминемию, летаргию и нестабильность температуры. 1
Скрининг билирубина
Диапазон уровней TSB, а не конкретный уровень, является порогом начала нейротоксичности. 9 Нейротоксичность билирубина может возникать, когда билирубин перемещается из кровотока в мозг в повышенных количествах.Существуют убедительные доказательства того, что билирубин, не связанный с одним сайтом связывания с альбумином с очень высокой аффинностью, с менее сильными вторичными сайтами связывания альбумина или с сайтами связывания на эритроцитах и липопротеинах, является токсичным билирубиновым фрагментом и лучше предсказывает повреждение нейронов, чем TSB. . TSB состоит из преимущественно связанного компонента в динамическом равновесии с крошечной несвязанной фракцией, присутствующей в наномолярных концентрациях. Ниже насыщения сайта связывания с высокоаффинным альбумином, когда уровни TSB остаются ниже молярного отношения билирубина к альбумину 1: 1 и / или когда нет нарушения этого сайта связывания из-за болезни, незрелости, постнатального возраста или конкурирующих анионов, циркулирующие концентрации высокотоксичной несвязанной фракции остаются ниже порога защитных механизмов ребенка.При превышении насыщения этого первичного сайта связывания наномолярные концентрации несвязанного билирубина повышаются достаточно высоко, чтобы вызвать повреждение. 10 Из-за этих взаимосвязей риск нейротоксичности может быть взаимозависимым от уровней свободного билирубина и / или TSB. Именно в этом контексте универсальный скрининг перед выпиской в сочетании с оценкой гестационного возраста является наиболее прогностическим фактором риска последующей тяжелой гипербилирубинемии в возрасте> 72 ч в течение первой недели до 10 дней после родов, когда своевременное вмешательство должно быть эффективно реализовано из-за узкий запас прочности. 1, 11
Биологические факторы риска
Желтуха является наиболее частым клиническим диагнозом в неонатальной медицине и возникает из-за повышенных уровней неконъюгированного (непрямого) и / или конъюгированного (прямого) билирубина. Подтверждением является общий анализ сыворотки (плазмы) крови на билирубин (TSB) или чрескожный билирубин (TcB). Билирубин является известным антиоксидантом на низких уровнях ( in vitro, ) и сильным нейротоксином на высоких уровнях ( in vitro, и in vivo) . Повышенные концентрации билирубина могут возникать из-за повышенного образования билирубина (распада гемоглобина) и / или замедленного выведения билирубина (печеночного и кишечного), а также из-за уникального неонатального феномена энтерогепатической реабсорбции билирубина.Билирубин и окись углерода являются основными продуктами распада гема. Нерастворимый в воде неконъюгированный билирубин (связанный с альбумином) превращается в гепатоците в водорастворимый конъюгированный билирубин ферментом уридин-дифосфоглюкуронозил-трансферазой и выводится в кишечник, где часть конъюгированного билирубина снова превращается в неконъюгированный билирубин и всасывается в кровоток (энтерогепатический кровоток). Низкий объем перорального приема и недостаток калорий увеличивают резорбцию билирубина и еще больше усугубляются снижением активности желудочно-кишечного тракта, характерным для раннего постнатального периода.Как отмечалось выше, нейротоксический эффект билирубина плохо коррелирует с уровнями TSB, поскольку на него влияет почти полное связывание билирубина альбумином (г на 100 мл). При соотношении билирубина к альбумину в мг на грамм, равном примерно 8: 1 (примерно 1: 1 на молярной основе), весь билирубин связывается в первом высокоаффинном сайте связывания и находится в равновесии с такой крошечной свободной фракцией, что концентрации несвязанный билирубин остается ниже токсичного уровня (таблица 2). Однако эти соотношения не применяются, когда связывание в высокоаффинном сайте нарушено ацидозом, гипоальбуминемией, более низким гестационным возрастом, послеродовым возрастом (особенно возрастом <1–3 дня) и вмешательством таких препаратов, как сульфамид и некоторые цефалоспорины. 1
Таблица 2 Теоретические соотношения билирубин / альбумин и стабильность этого связыванияКлинические факторы риска
Наиболее частыми клиническими и сопутствующими факторами риска крайней гипербилирубинемии и ядерной желтухи являются поздние недоношенные роды, полнокровие, диагностированная и недиагностированная гемолитическая болезнь (например, как иозоиммунизация ABO и врожденный сфероцитоз) и генетические аномалии (такие как дефицит глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, галактоземия, синдром Криглера – Наджара типа 1 и 2, болезнь Гилберта или другие полиморфизмы в путях конъюгации и выведения билирубина), а также сопутствующие пути такие осложнения, как обезвоживание, сепсис, ацидоз, гипоальбуминемия или плохое питание. 1, 2, 12 Желтуха новорожденных и гипербилирубинемия встречаются чаще и более продолжительны среди недоношенных новорожденных, чем доношенных. 13, 14 Поздние недоношенные дети в целом имеют менее зрелую функцию печени, сниженную активность уридиндифосфоглюкуронат глюкуронозилтрансферазы для конъюгации билирубина, незрелую желудочно-кишечную функцию и более частые трудности с кормлением, особенно при исключительно грудном вскармливании, что предрасполагает их к обезвоживанию, усилению энтерогепатического кровообращения. частота стула и гипербилирубинемия.Дефицит глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы также связан с более высокой частотой чрезмерной неонатальной гипербилирубинемии и риском ядерной желтухи, особенно если это связано с болезнью Гилберта или аналогичными полиморфизмами, которые снижают конъюгацию или поглощение печеночного билирубина. У большинства детей с дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы слегка повышенная продукция билирубина в сочетании с одновременным снижением конъюгации билирубина является вероятной причиной тяжелой гипербилирубинемии. 14, 15 Обострение, вызванное повышением выработки билирубина (например, воздействие, часто непредсказуемое, известных и неизвестных оксидантов, инфекций и лекарств, которые конкурируют за связывание с альбумином), может привести к прогрессирующей или опасной гипербилирубинемии. 16, 17
Клинический подход
Клиницисты задаются вопросом, является ли скрининг перед выпиской на тяжелую неонатальную гипербилирубинемию достаточно прогнозирующим, чтобы обеспечить успешное выполнение своевременных вмешательств (использование фототерапии, обменного переливания крови, химиопрофилактика). Утверждение, что младенцы с тяжелой неонатальной гипербилирубинемией подвержены более высокому риску острой или хронической билирубиновой энцефалопатии, было давним клиническим убеждением, которое, однако, не было подтверждено строгими клиническими испытаниями.При нынешних клинических и исследовательских методологиях такие испытания были бы чрезмерно дорогими и, из-за доступности фототерапии, этически несостоятельными. В этой статье мы рассматриваем текущие клинические методологии для выявления риска тяжелой неонатальной гипербилирубинемии и / или необходимости вмешательства с помощью фототерапии. Сообщения о случаях ядерной желтухи являются необычными и редко выявляются у здоровых младенцев, когда уровни TSB <25 мг на 100 мл (427 мкмоль л -1 ), и не сообщалось о младенцах с известным пиковым уровнем TSB <20 мг на 100 мл. (342 мкмоль л -1 ) (таблица 1).Согласно одному отчету, младенцы с ABE, у которых уровень TSB> 35 мг на 100 мл (598 мкмоль л -1 ), перенесли некоторую степень постиктерических осложнений независимо от лечения. 2 С другой стороны, не у всех младенцев с уровнем TSB> 30 мг на 100 мл (513 мкмоль л -1 ) проявляется классическая ядерная желтуха. 18, 19, 20 Уязвимость к хроническим последствиям у младенцев с уровнем TSB от 20 до 35 мг на 100 мл зависит от послеродового возраста, скорости повышения TSB, продолжительности крайней гипербилирубинемии, поздних недоношенных детей (<37 недель), пол (мужской), крупность для гестационного возраста, обезвоживание (потеря веса> 15% по сравнению с весом при рождении) и инфекция, которая часто связана с генетическими аномалиями. 2 По аналогии со стандартами безопасности полетов, случаи острой ядерной желтухи сродни авиакатастрофам.
Abstract 4311: Использование доклинической модели множественной миеломы Vk * MYC для быстрого и эффективного скрининга новых методов лечения и их комбинаций
Введение: Множественная миелома (ММ) — неизлечимое гематологическое новообразование с неудовлетворенной потребностью в новых терапевтических возможностях. Здесь мы использовали генетически трактуемую мышиную модель ММ Vk * MYC для скрининга существующих и новых терапевтических средств у трансгенных мышей Vk * MYC и в моделях трансплантации Vk * MYC MM.В дополнение к оценке активности одного агента мы также определили эффекты ингибитора гистон-деацетилазы (HDACi) панобиностата (LBH-589) с ингибитором протеосом бортезомиб (Velcade), используемыми в комбинации. Методы. Существующие и новые средства против ММ (32) были протестированы на трансгенных мышах Vk * MYC (≥60 недель) с использованием клинически обоснованных схем. Из них панобиностат и бортезомиб оказались наиболее эффективными и были выбраны для лечения иммунокомпетентных мышей C57BL / 6, несущих трансплантированный Vk * MYC MM (через 2 месяца после трансплантации).Комбинированная терапия была исследована на трансплантированном Vk * MYC MM, состоящем из низких доз панобиностата (10 мг / кг) с бортезомибом (0,5 мг / кг). Уровни парапротеинов в сыворотке измеряли у всех мышей. Опухолевую нагрузку, лекарственные мишени и апоптоз оценивали с помощью FACS или IHC окрашивания срезов костного мозга. Результаты. Первоначальный скрининг препаратов на трансгенных мышах Vk * MYC продемонстрировал анти-MM активность панобиностата и бортезомиба, что отражалось в снижении на 50 и> 25% от исходного уровня парапротеинов, соответственно. Аналогичным образом, парапротеин сыворотки у мышей C57BL / 6, несущих Vk * MYC MM, был значительно снижен при применении панобиностата (25 мг / кг, 4 дня; мг / кг 5 дней / неделю, 3 недели) и бортезомиба (0.5 мг / кг каждые 4 дня по сравнению с мышами, получавшими носитель. Более того, панобиностат вызывал значительное преимущество в выживаемости по сравнению с носителем (36,5 дней против 16 дней, p <0,01). Комбинированная терапия с использованием панобиностата и бортезомиба в низких дозах снижала парапротеин значительно больше, чем любой агент по отдельности. Это было связано с ацетилированием гистона-h4, индукцией апоптоза и уменьшением количества жизнеспособных плазматических клеток в костном мозге. Выводы. Эти результаты позволяют предположить, что панобиностат и бортезомиб обладают активностью монотерапии против ММ и являются первыми, кто продемонстрировал терапевтический эффект на доклинической модели Vk * MYC MM.Более того, комбинированная терапия панобиностатом с ингибиторами протеосом может быть рациональным подходом к лечению ММ. В будущих исследованиях будут изучены молекулярные процессы, лежащие в основе единственного агента и комбинированных эффектов панобиностата и бортезомиба, с использованием модели Vk * MYC MM. Формат цитирования: {Авторы}. {Название аннотации} [аннотация]. В: Материалы 102-го ежегодного собрания Американской ассоциации исследований рака; 2-6 апреля 2011 г .; Орландо, Флорида. Филадельфия (Пенсильвания): AACR; Cancer Res 2011; 71 (8 Suppl): Аннотация № 4311.doi: 10.1158 / 1538-7445.AM2011-4311
Как включить и отключить поворот экрана в iPhone
Как повернуть экран на iPhoneВы пытаетесь понять, как повернуть экран на iPhone? Если ваш ответ утвердительный, вы попали в нужное место. Эта конкретная статья будет посвящена тому, чтобы дать вам несколько советов о том, как активировать функцию поворота на вашем iPhone, чтобы упростить просмотр без необходимости наклонять голову. Вот как перевести ваш iPhone из портретного режима в альбомный.
Объяснение режима ориентации iPhone
Во-первых, давайте начнем с более четкого описания проблемы. Некоторые функции iPhone, такие как браузер, могут иметь очень ограниченное поле зрения в портретном режиме. Большинство пользователей испытывают трудности с просмотром определенных вещей, например веб-сайтов, на квадратном портретном экране. Здесь в игру вступает функция поворота экрана.
Вот некоторые дополнительные функции, которые вы получите, если перейдете в альбомный режим:
- Большой экран для просмотра видео в полноэкранном режиме
- Еще клавиши на клавиатуре
- Вкладка в браузере Safari
- Дополнительные страницы папок на главном экране
Поворот доступен для всех моделей iPhone.Все, что вам нужно сделать, это узнать, как активировать функцию поворота, если она еще не активирована. Ниже приведены несколько важных шагов, которые вам нужно сделать, чтобы заставить его работать.
Как активировать поворот экрана на iPhoneОказалось, что включить функцию вращения до неловкости просто. Apple постоянно обновляет свои iOS, там легко заблудиться!
- Когда iPhone включен, разблокируйте телефон.
- Проведите пальцем вверх, вы увидите серое меню, которое называется Меню центра управления.
- Значок справа — блокировка поворота:
- Если вы хотите, чтобы ваш iPhone повернулся в альбомный режим, убедитесь, что блокировка не активирована (белый цвет).
Переключите кнопку блокировки поворота, чтобы включить или выключить функцию поворота.
Как использовать функцию поворота экрана на iPhoneКак узнать, можно ли использовать приложение в альбомном режиме? Просто поверните iPhone на бок. После этого экран будет вращаться в том же направлении.Если ориентация экрана изменится, ответ положительный. На главном экране попробуйте некоторые из приложений, которые вы уже сохранили на своем iPhone. Вы можете протестировать функцию поворота экрана, открыв некоторые из этих приложений. Не все приложения поддерживают поворот экрана iPhone.
Попробуйте некоторые из интересных функций, о которых мы упоминали в начале статьи!
Что делать, если экран вашего iPhone не вращаетсяПока включена функция поворота экрана iPhone, экран iPhone должен вращаться.Если он не вращается, это может быть потому, что:
- У вас более старая версия iOS, которая ее не поддерживает
- Обновите iOS до последней версии, чтобы исключить любые проблемы с iOS
- Приложение, которое вы пытаетесь использовать в альбомном режиме, не имеет этой функции
- Дважды проверьте, действительно ли приложение поддерживает функцию поворота
- Датчик гироскопа на вашем iPhone сломан
- Он припаян к материнской плате, и его будет действительно сложно отремонтировать
- Плохой ремонт
- Если после ремонта вращение не работает, возможно, вы перепутали винты! Важно, чтобы вы вернули винты в нужное место, так как некоторые из них обладают магнитным полем и будут мешать работе датчика.