Разморозка вк онлайн: «Как разморозить страницу в вк если она была заморожена на время?» – Яндекс.Кью

{{l10n_strings.DRAG_TEXT_HELP}}

{{статья.content_lang.display}}

{{l10n_strings.AUTHOR_TOOLTIP_TEXT}}

Замораживание как средство снижения количества кампилобактерий, выделенных из куриной печени — Harrison — 2013 — Letters in Applied Microbiology

Введение

Вспышки инфекционных кишечных заболеваний пищевого происхождения в целом снизились в Англии и Уэльсе за период примерно за два десятилетия до 2008 года (Gormley et al . 2011). Однако за тот же период наблюдалось общее увеличение заболеваемости человека кампилобактериозом, в основном из-за пищевых продуктов, полученных из птицы (Gormley et al . 2011). В последнее время появляется все больше данных из исследований атрибуции источников (Strachan et al . 2012), расследований вспышек кампилобактериоза (Little et al . 2010; Merritt et al . 2011) и опросов розничной торговли (Fernandez and Pison 1996), в котором предполагаемым источником болезни является плохо приготовленная куриная печень.В частности, куриная печень, приготовленная на предприятиях общественного питания и потребляемая в виде «жареных на сковороде» или в виде паштета или парфе, по-видимому, вносит непропорционально большой и растущий вклад в заболеваемость человека (Little et al . 2010).

В Швейцарии Campylobacter часто выделяют из печени цыплят в количестве до 5 × 10 ⁴ КОЕ г ^-1 с распространенностью от 10 до 100 % в зависимости от сезона (Baumgartner and Felleisen 2011). Хотя сезон не принимался во внимание, более раннее исследование в США Campylobacter в куриной печени показало общую распространенность 48% (Barot et al , 1983), а более позднее исследование в США показало распространенность 77% (Noormohamed and Fakhr). 2012). Польское исследование показало, что распространенность свежей печени Campylobacter составляет 31 % (Mackiw et al , 2011), тогда как в Чили распространенность замороженной печени составляет 93 % (Baumgartner et al , 1995; Fernandez and Pison, 1996). .В дополнение к очевидному широко распространенному заражению имеются убедительные доказательства того, что заражение Campylobacter не ограничивается поверхностью печени, с сообщениями о небольшом количестве Campylobacter внутри (Barot et al . 1983) и в «горячих точках», таких как как желчные протоки (Baumgartner et al . 1995).

В совокупности эти исследования свидетельствуют о том, что печень цыплят, колонизированных кампилобактериями, регулярно контаминируется кампилобактериями. Следовательно, условия приготовления, необходимые для элиминации Campylobacter из куриной печени, были определены как внутренняя температура, превышающая 70°C в течение как минимум 2 минут (Уайт и др. . 2006). Ключевое наблюдение, сделанное Уайтом и его коллегами, заключалось в том, что недоваренная печень была розового цвета, что нравится потребителям. Если печень готовили слишком долго, она становилась непривлекательно серой. Оба O’Leary и al . (2009) и Литтл и др. . (2010) предположили, что желание поставщиков общественного питания сохранить печень розовой и привлекательной способствовало вспышкам кампилобактериоза в Великобритании, связанным с употреблением в пищу блюд из куриной печени.

Хотя правильное приготовление пищи убивает кампилобактерии, существуют другие потенциальные вмешательства, которые могут помочь контролировать эту бактерию, которая не оказывает значительного влияния на органолептические свойства печени. Ранее сообщалось, что замораживание может уменьшить количество жизнеспособных кампилобактерий на коже и мышцах цыплят (Garenaux et al . 2009; Sampers et al . 2010) и что обычное замораживание куриного мяса или кожи в течение 24 часов приводит к -логарифмическое сокращение количества кампилобактерий (Oyarzabal et al .2010; Сэмперс и др. . 2010). Однако нам не удалось найти информацию, описывающую эффект замораживания куриной печени, зараженной кампилобактериями. Следовательно, в этом исследовании оценивается влияние на количество Campylobacter , если куриную печень замораживают на срок до одной недели при температурах, имитирующих бытовые морозильники и морозильники общественного питания, перед оттаиванием в течение 24 ч в холодильнике. Кроме того, сообщается об эффекте замораживания, оттаивания и повторного замораживания печени.

Результаты и обсуждение

Тридцать три свежих и 30 замороженных образцов печени были приобретены в 51 торговой точке по всей Великобритании. На основании идентификационных кодов был сделан вывод, что 63 образца были получены с 14 различных скотобоен, зарегистрированных в ЕС. Образцы были взяты из сетей супермаркетов ( n  = 48), независимых мясных лавок ( n  = 10), магазинов деликатесов ( n  = 1), поставщиков коммерческого питания ( n  = 2) и магазинов шаговой доступности ( n ). = 2). Количественные результаты, свидетельствующие о присутствии Campylobacter в этих образцах, обобщены на рис. 1. Из 63 образцов 55 содержали исчисляемое количество Campylobacter , а восемь содержали меньше, чем предел обнаружения метода тестирования (<1 КОЕ г ^{— 1} печени).Незамороженная печень, как правило, имела более высокие показатели, чем печень, купленная замороженной, и эта разница была статистически значимой ( t -test, P  < 0,02).

Распределение концентраций кампилобактерий, выделенных из незамороженных (a, n  = 33) и замороженных (b, n  = 30) образцов куриной печени, приобретенных в розницу в Великобритании в период с октября 2012 г. по февраль 2013 г.

Дальнейший анализ показал отсутствие связи между температурой всех 63 образцов на момент покупки и количеством кампилобактерий в этих образцах.То же самое было верно, когда сравнивались только те результаты тестов, которые превышали предел обнаружения (т. е. положительные образцы). Кроме того, при сравнении всех 63 результатов не было выявлено корреляции между количеством подсчитанных кампилобактерий и количеством оставшихся дней хранения. Когда сравнивались только результаты свежих или замороженных образцов, также не было обнаружено корреляции между количеством кампилобактерий и оставшимся сроком хранения (результаты не показаны).

При сравнении числа кампилобактерий в свежей печени из розничной торговли с печенью, полученной на бойнях, не было обнаружено существенных различий между подсчетами ( t -тест).Были выбраны две температуры замерзания, представляющие наилучший и наихудший случаи с точки зрения эффективности замораживания. Морозильная камера для наихудшего случая, настроенная на -15 ° C, не смогла заморозить массы печени до целевой температуры в течение 24 часов (рис. 2a), достигнув только -11 ° C. Через двое суток минимальная достигнутая температура составила -14°C (рис. 2б). Напротив, морозильник, установленный на -25°C, снижал температуру в центре печеночных масс до -26·2°C в течение 6 ч (рис. 2c) с дальнейшим снижением температуры на 1°C в течение нескольких дней. (Инжир.2г). Было замечено, что в обоих морозильных камерах скорость снижения температуры замедлялась, когда образцы достигали -1 ° C, поскольку вода, содержащаяся в печени, превращалась в лед. Пониженная скорость замораживания при температуре фазового перехода была на 6 ч дольше в морозильной камере, настроенной на -15°C, по сравнению с морозильной камерой, настроенной на -25°C, и считалась основной причиной того, что менее эффективный морозильник не смог снизить температуру температура печени до -15°С в течение 24 ч.

Типичные температуры, достигаемые внутри 1,5-килограммового мешка с куриной печенью, помещенного в морозильную камеру при −15 (a и c) и −25 °C (b и d) на 1 день (a и b) или 7 дней (c и d) с последующим трехдневным хранением в холодильнике.

Печень, замороженная в течение 24 часов в морозильной камере при температуре -15 °C, значительно уменьшила ( t — тест; P  < 0,01) количество кампилобактерий по сравнению с размороженными контролями (рис. 3a). Аналогичное наблюдение было сделано для печени, замороженной в течение 24 часов в морозильной камере при температуре -25 ° C (рис. 3b). Более холодный морозильник уменьшил количество КОЕ приблизительно на 1,5 log, что было значительно больше ( t -test; P  < 0,01), чем снижение на 0,8 log, наблюдаемое для печени в морозильной камере при −15°С.

Влияние замораживания до заданных температур –15 (а) и –25°C (б) на количество кампилобактеров в естественно контаминированной куриной печени. Данные являются результатом трех независимых испытаний с 10 повторами в каждом испытании ( n  = 30).

Было значительно меньше кампилобактер после замораживания при -15°C в течение 7 дней по сравнению с числом после 24 ч при этой температуре. В целом, замораживание при -15°C в течение 7 дней вызвало 1,5-логарифмическое снижение численности кампилобактерий, что в целом сопоставимо с уменьшением, наблюдаемым при -25°C в течение 24 ч.Не было существенной разницы между сокращениями, полученными через 24 часа и 7 дней в морозильной камере при температуре -25 °C ( t -тест; P  > 0,05). Отдельные образцы содержали одинаковые количества КОЕ г ^-1 сразу после оттаивания и после хранения в охлажденном состоянии еще в течение трех дней (значительных различий по дисперсионному анализу нет). Таким образом, мы не нашли доказательств в поддержку гипотезы о том, что замораживание вызывает сублетальное повреждение Campylobacter с возможностью восстановления при последующем оттаивании и длительном хранении в охлажденном состоянии.Точно так же не было доказательств продолжающейся гибели, если печень хранилась в охлажденном виде после замораживания и оттаивания.

Когда зараженную печень дважды замораживали до -25°C в течение 24 ч с оттаиванием в течение 24 ч между ними (рис. 4), после каждой обработки замораживанием/оттаиванием наблюдалось снижение количества кампилобактерий (рис. 5). В целом согласуясь с результатами отдельных обработок, о которых сообщалось выше, первая обработка вызвала значительное снижение примерно на два log ( t -тест; P  < 0,01).Вторая обработка замораживанием/оттаиванием вызвала дальнейшее снижение примерно на 0,75 log (рис. 5). Усиление эффекта двух по сравнению с одной обработкой замораживанием/оттаиванием было значительным ( t — тест; P  < 0,01). В целом, две обработки замораживанием/оттаиванием уменьшили количество кампилобактерий примерно на три log. Как и прежде, сравнение отдельных образцов, испытанных сразу после оттаивания, с образцами, испытанными в каждый день двухдневного хранения в холодильнике, не показало существенных различий по анова.

Температура в центре трех отдельных 2,5-килограммовых пакетов с куриной печенью. Количество кампилобактерий определяли перед замораживанием (на рисунке не показано) и после каждого мешка с печенью, подвергнутого замораживанию и оттаиванию (А), повторному замораживанию и повторному оттаиванию (В) и во время хранения в холодильнике после оттаивания в течение 2 суток (С и D). .

Влияние двухкратного замораживания куриной печени на количество КОЕ г ^-1 Campylobacters .Численность кампилобактерий определяли до замораживания, после оттаивания (ПВ) после замораживания до -25°С в течение 24 ч, ПВ от второго замораживания до -25°С в течение 24 ч и после хранения в холодильнике в течение 1 и 2 сут. Данные являются результатом трех испытаний с 10 повторами в каждом испытании ( n  = 30).

Наблюдение за уменьшением количества Campylobacter до 2,5 log, когда печень была заморожена всего на 24 часа, согласуется с выводами, полученными для свежего куриного мяса (Georgsson et al .2006 г.; Мазьеро и де Оливейра, 2010). Ранее сообщалось, что продолжительность заморозки важна для выживания бактерий в мясе (Gill 2002; Archer 2004). При скорости охлаждения, используемой в этом исследовании, основой любого убийства было то, что первоначально замораживание происходило в небольших изолированных карманах жидкости (Archer 2004). Замораживание этих карманов вызвало вытеснение растворенных молекул в окружающую незамерзшую жидкость, тем самым увеличивая осмотический потенциал этой жидкости (Dumont et al .2004). По мере того как внеклеточная жидкость становилась более концентрированной, она начала удалять воду из цитоплазмы взвешенных клеток путем осмоса (Dumont et al . 2004). Кристаллы льда, образующиеся из воды, оставшейся внутри цитоплазмы, являются основным методом повреждения клеток при замораживании (Toner and Cravalho, 1990). Однако при низкой скорости охлаждения жидкости (несколько градусов в минуту) возможно, что вся внутриклеточная вода может быть удалена из клетки до образования кристаллов льда (Dumont et al .2004). Кроме того, есть данные о том, что при замораживании образуются супероксидные радикалы, которые также концентрируются в незамерзающих карманах воды и, следовательно, способствуют гибели кампилобактерий (Stead and Park 2000). Это исследование показало, что морозильная камера, настроенная на -15°C, вызывала меньшую гибель бактерий через 24 часа по сравнению с морозильной камерой, настроенной на -25°C. Печень, помещенная в морозильную камеру при температуре -15°C, подвергалась мягкой заморозке с вязкой нежесткой консистенцией. Напротив, печень, помещенная в морозильную камеру при температуре -25°C, была сильно заморожена.На рисунке 2 показано, что для замораживания в наименее эффективной морозильной камере потребовалось около 12 часов по сравнению с 4 часами в морозильной камере, настроенной на температуру -25 °C. Таким образом, представляется вероятным, что более длительное время, необходимое для замораживания в наименее эффективной морозильной камере, позволило удалить большую часть внутриклеточной воды из кампилобактерий до того, как образование кристаллов льда вызовет значительное повреждение клеток. Ранее сообщалось, что экссудат куриного мяса может активировать гены реакции на стресс у кампилобактерий и помочь защитить их от повреждения низкой температурой (Ligowska et al .2011). Также возможно, что более длительное время, необходимое для замораживания печени, помещенной в морозильную камеру при температуре -15 ° C, позволило кампилобактерам усилить любую защиту от холода.

Результаты испытаний свежей печени в розничной продаже (рис. 1) показали, что количество кампилобактерий редко превышает 10 000 КОЕ г ^-1 свежей печени, что соответствует предыдущим отчетам (Baumgartner and Felleisen 2011). Таким образом, уменьшение на 2-3 логарифма приведет к смещению чисел, показанных на рис.1, чтобы большинство образцов печени содержало <100 поддающихся обнаружению КОЕ г ^-1 . Поиск литературы не выявил каких-либо оценок риска, специфичных для потребления куриной печени, хотя в целом были определены модели оценки риска для Campylobacter в мясе бройлеров. Сравнение шести независимо созданных моделей показало, что наиболее эффективными мерами вмешательства в отношении болезней человека были те, которые снижали концентрацию Campylobacter в курином мясе (Nauta et al .2009).

Таким образом, наши результаты показывают значительное снижение числа кампилобактеров при замораживании зараженной печени. В Великобритании есть некоторые переработчики куриного мяса, которые замораживают всю печень, собранную на своих предприятиях, и, таким образом, кажется правдоподобным вывод, что печень может быть заморожена в рамках рутинной обработки со всех предприятий без значительных экономических последствий. Потребителям также можно дать совет, что повторная заморозка будет полезна с точки зрения снижения вероятности заболевания, если печень будет приготовлена ​​ненадлежащим образом.

Материалы и методы

Микробиологическое исследование

Каждый образец печени мелко нарезали на небольшие (0,5 × 0,5 × 0,5 см) кусочки с помощью стерильных ножниц. Подобразец весом 25 г был получен путем извлечения случайно выбранных кусочков с помощью стерильной ложки, чтобы убедиться, что мясной экссудат также был протестирован. К каждому образцу печени весом 25 г добавляли равный объем разбавителя для максимального восстановления (MRD, Oxoid, Basingstoke, Великобритания) перед гомогенизацией в течение 1 минуты с использованием гастростера 400 (Seward, Великобритания). Campylobacter были подсчитаны с использованием метода прямого посева, часть 2 стандарта ISO 10272 (Международная организация по стандартизации, 2006 г.) с небольшими изменениями. Вкратце, 2 мл исходного разведения 1 в 2 (1 : 1) распределяли по шести чашкам с модифицированным углем, цефоперазон-дезоксихолатным агаром (mCCDA, Oxoid CM0739 плюс SR0155). Затем два миллилитра исходной суспензии смешивали с 8 мл MRD для получения разведения 1 к 10. Все последующие разведения были десятичными, как описано в ISO 10272, и выполнялись с использованием MRD.Объем сто микролитров десятичных разведений дважды высевали на mCCDA. Инкубацию проводили в микроаэробных условиях (CampyGen, Oxoid) при 41,5°C в течение 48 часов. Колонии Campylobacter spp. подтверждались положительной оксидазной реакцией и невозможностью роста в аэробной атмосфере при 41,5°С на колумбийском кровяном агаре (Oxoid). Кроме того, одну колонию из каждой чашки тестировали с использованием Dryspot Campylobacter (Oxoid) в соответствии с инструкциями производителя.

Сбор проб в розницу

В общей сложности образцы (от 380 г до 500 г) свежей ( n  = 33) или замороженной ( n  = 30) куриной печени из Англии, Уэльса и Шотландии были приобретены у национальных и небольших независимых розничных продавцов в период с октября 2012 г. по Февраль 2013 г. Образцы были исследованы для определения количества кампилобактерий с использованием описанного выше протокола испытаний. Перед покупкой температуру поверхности образцов печени измеряли с помощью инфракрасного термометра (модель 59 mini, Fluke, Norwich, UK).Образцы закупались в случайно выбранные дни (включая выходные), маркировались и транспортировались в изолированных коробках из пенополистирола (Biotherm 45, DGP Intelsius, Йорк, Великобритания), используя в качестве хладагента розничные упаковки замороженного гороха, завернутые в пузырчатую пленку. Регистраторы температуры (Tinytag Plus 2; Gemini Data Loggers, Чичестер, Великобритания) помещали рядом с образцами для контроля температуры при транспортировке. Исследовались только образцы с температурой в пути от 0 до 8°C. Образцы хранились при 4°C в лаборатории до исследования.Все микробиологические исследования были начаты в течение 24 часов после покупки.

Однократное замораживание

Цыплята-бройлеры с большей вероятностью будут колонизированы кампилобактериями, если они происходят из стада, которое ранее подвергалось прореживанию, т. е. было взято из птичников, откуда несколько дней назад были изъяты некоторые птицы (Allen et al . 2008). Таким образом, чтобы максимизировать вероятность получения стада, положительного к кампилобактерам, печень для экспериментов по замораживанию собирали с бойни, где можно было идентифицировать прореженные стада.Кроме того, при убое можно было собрать большое количество печени только из одного и того же стада, которое, скорее всего, содержало те же штаммы Campylobacter при постоянной концентрации. Прямой сбор также означал уверенность в том, что печень ранее не была заморожена и была обработана только для удаления желчных пузырей и желчных протоков перед очисткой и охлаждением во льду. 7–8 кг печени собирали в один пакет и доставляли в лабораторию в упакованном виде во льду.В лаборатории были подготовлены четыре полиэтиленовых пакета, каждый из которых содержал 1,5 кг (примерно 90) случайно выбранных печени, и в центр каждого пакета был помещен регистратор температуры (Tinytag Plus 2). Для каждого эксперимента два пакета с печенью помещали в морозильную камеру с заданной температурой -15°С, а два — в морозильную камеру при -25°С. Для каждой температуры один пакет с печенью удаляли через 24 ч, а другой — на 7-й день после замораживания. После извлечения из морозильной камеры печень оттаивали в течение ночи в холодильнике при температуре 4°С.Тридцать размороженных печени исследовали партиями из трех объединенных образцов ( n = 10) сразу после размораживания для определения количества кампилобактерий на грамм. Остальные шестьдесят печени были возвращены в холодильник, и 10 образцов (каждый из которых состоял из трех объединенных печени) были исследованы через 24 часа и 48 часов. Каждое испытание по замораживанию проводилось три раза в течение 3 месяцев с использованием печени птиц, выращенных на разных фермах.

Замораживание, оттаивание и повторное замораживание

Эксперименты по определению эффекта многократного замораживания печени проводились, как описано выше для однократного замораживания, с небольшими отличиями.Был подготовлен полиэтиленовый пакет, содержащий печень весом 2,5 кг. Печень тестировали для определения количества кампилобактерий до замораживания, замораживали при температуре -25°C в течение 24 ч, оттаивали в течение 24 ч при 4 °C, тестировали для определения количества кампилобактерий, а затем немедленно повторно замораживали в течение вторых 24 ч перед вторыми 24 ч. оттаивание при 4°С и повторное исследование. Как и прежде, количество кампилобактерий определяли каждый день в течение еще 2 дней хранения в холодильнике при 4°C.

Статистический анализ

Парные и гомоскедастические t -тесты и дисперсионный анализ (Excel 2010; Microsoft, Редмонд, Вашингтон, США) использовались для сравнения log ₁₀ КОЕ, извлеченных из различных образцов печени до и после замораживания, и образцов, собранных в розницу по мере необходимости. Для тех результатов, о которых сообщалось, что они ниже предела обнаружения (<1 КОЕ г ^-1 ), значение половины предела обнаружения (0,5 КОЕ г ^-1 ) было заменено, чтобы позволить log ₁₀ преобразования. Для всех тестов значение P <0,05 использовалось для определения какой-либо значимости между обработками. Коэффициенты корреляции момента продукта Пирсона (Excel) использовались для предположительного определения любых взаимосвязей между температурой розничной покупки и количеством кампилобактеров.Алгоритм наименьших квадратов использовался для определения сильных сторон любых предполагаемых отношений.

Благодарности

Это исследование финансировалось Агентством по пищевым стандартам Великобритании в качестве проекта FS101025. Авторы признательны за пожертвование 40 кг свежей куриной печени от британской птицеперерабатывающей промышленности.

Процесс определения характеристик замораживанием-оттаиванием для сведения к минимуму агрегации и обеспечения возможности производства лекарственных препаратов на основе белка и очищены в Takeda Pharmaceutical Company, Лексингтон, Массачусетс.

Белковые растворы при рН 6,0 готовили в различных концентрациях фосфата натрия, хлорида натрия и поверхностно-активного вещества. Буфер и эксципиенты, выбранные для состава mAb-1, были основаны на обширных (до) скрининговых исследованиях, проведенных ранее. хлорид натрия (NaCl), моногидрат монофосфата натрия (NaH ₂ PO ₄ .H ₂ O), гептагидрат двухосновного фосфата натрия (Na ₂ HPO ₄ .7H ₂ 2 O). , и поверхностно-активное вещество были приобретены у J.Т. Бейкер. Для приготовления всех буферных растворов использовали дважды деионизированную воду, если не указано иное.

Низкотемпературный термический анализ

Физиохимическое поведение mAb-1 при низких температурах характеризовалось электрическим сопротивлением, наблюдениями под лиофильным микроскопом и низкотемпературной дифференциальной сканирующей калориметрией (LT-DSC) ¹⁰ . Анализ образцов проводили в компании Lyophilization Technology (Айвиленд, Пенсильвания). Цель этого анализа состояла в том, чтобы определить минимальную температуру, необходимую для полного затвердевания при замораживании, и характеристики продукта при оттаивании.

Сопротивление было измерено на образце белка в стеклянной пробирке для образца с использованием прибора сопротивления от 0 до 20 МОм и керамического зонда сопротивления ¹⁰ . Температуру измеряли с помощью термопары 32-го калибра, расположенной на керамическом зонде на противоположных сторонах золотых пластин. Белковый материал охлаждали и нагревали со средней контролируемой скоростью 0,5 °C в минуту, чтобы оценить его тепловые характеристики и установить характерный для материала фазовый переход. Образец сопротивления анализировали в атмосферных условиях и по отклонению сопротивления определяли начало фазового перехода при нагревании ¹⁰ .Измерения температуры регистрировались каждые десять секунд во время анализа.

Для сублимационной микроскопии образец белка помещали в стеклянную кювету и помещали на столик лиофилизации с контролируемой температурой. Ячейка для образцов была снабжена двумя термопарами 32-го калибра, помещенными непосредственно в материал внизу и в центре ячейки для контроля температуры образцов. Образец жидкого белка охлаждали с контролируемой скоростью 0,5 °C в минуту до целевого заданного значения — 60 °C.После завершения замораживания столик нагревали со средней контролируемой скоростью 0,5 °C в минуту. Поведение образца наблюдали с помощью микроскопа с увеличением от 16 до 330 ×, соединенного с камерой ¹⁰ . Измерения температуры регистрировались каждые десять секунд в течение всего анализа.

LT-DSC от TA Instruments (Q200 DSC) использовали в качестве средства оценки физико-химического поведения при замораживании и нагревании для определения фазовых переходов ¹⁰ .Диапазон от 20,0 до 21,1 мг раствора помещали в кювету для образцов и закрывали крышкой. Азот использовали для непрерывной продувки образца со скоростью потока 50 мл/минуту. Образец жидкого белка охлаждали до температуры — 65 °C до полного замораживания и нагревали с контролируемой скоростью 10 °C в минуту. Во время охлаждения и нагревания отслеживалось выделение или поглощение тепла образцом, и регистрировались различия в энергии тепла ¹⁰ .

Определение влияния скорости замораживания и оттаивания

Были проведены исследования для оценки влияния скорости замораживания и оттаивания в небольшом масштабе на стабильность mAb-1, приготовленного при 5.5 мг/мл в фосфате натрия, хлориде натрия и поверхностно-активном веществе при pH 6,0. В производственных масштабах трудно контролировать скорость замораживания и оттаивания белков, поэтому при оценке эффекта F/T в моделях с уменьшенным масштабом очень важно, чтобы влияние различных скоростей было включено в дизайн исследования. Используя небольшой морозильник с регулируемой скоростью (Tenney, TUJR), образцы замораживали и оттаивали. Небольшие исследования F/T включали либо три цикла замораживания до — 50 °C и оттаивания до 25 °C при быстром замораживании и медленном оттаивании, либо один цикл при медленном замораживании и быстром оттаивании. Жидкий контроль в том же составе хранили при температуре 5 ± 3°C на протяжении всего исследования. Образцы из каждого тестового условия отбирали после циклов Ф/Т и измеряли наличие агрегации до и после каждого Ф/Т методом эксклюзионной ВЭЖХ (SE-HPLC). Использовались следующие программы F/T:

Медленное замораживание-быстрое оттаивание Замораживание от 5 до −50°C со скоростью 0,03°C/мин, выдержка при − 50°C в течение 2 ч, оттаивание при 1°C/мин. мин. до 5°С и выдерживают при 5°С до проведения анализа.

Быстрое замораживание-медленное оттаивание Замораживание до − 50 °C со скоростью 1 °C/мин., выдержать при - 50°С в течение 2 ч, оттаивать со скоростью 0,03°С/мин. до - 25 °C, выдерживают при - 25 °C в течение 24 ч, повышают до 5 °C со скоростью 0,03 °C/мин и выдерживают при 5 °C до проведения анализа.

Для дальнейшего анализа условий оттаивания в различных масштабах лекарственное вещество mAb-1 при более высоких объемах заполнения (~ 20 мл, 250 мл и 500 мл) замораживали до  ≤ – 50 °C в течение как минимум 48 ч и подвергали к быстрому оттаиванию в ванне с циркуляционной водой при температуре 25 ± 2 °C или 37 ± 2 °C с периодическим перемешиванием. В конце каждого цикла F/T образцы анализировали с помощью SE-HPLC.

Кроме того, mAb-1 в концентрации 5,5 мг/мл в фосфате натрия, хлориде натрия и поверхностно-активном веществе при pH 6,0 также подвергали небольшим циклам 1 ×  и 3 × быстрого замораживания и медленного оттаивания. Наличие агрегации контролировали до и после F/T с помощью SE-HPLC и аналитического ультрацентрифугирования (AUC).

Скрининг матриц состава mAb-1 для сведения к минимуму агрегации, индуцированной F/T

Для определения влияния концентрации белка, соли и натрий-фосфатного буфера на агрегацию, индуцированную F/T, было проведено несколько исследований.В таблице 1 представлены сводные данные по матрицам составов, которые были оценены. Во всех этих исследованиях mAb-1, приготовленный при pH 6,0, подвергали множественным циклам быстрого замораживания и медленного оттаивания.

Таблица 1. Скрининг матрицы состава mAb-1.

Влияние концентраций фосфата и хлорида натрия на агрегацию, индуцированную замораживанием-оттаиванием

F/T-стабильность mAb-1 исследовали путем изменения концентрации соли и фосфатного буфера (таблица 1). Наличие агрегации измеряли до и после Ф/Т методом эксклюзионной ВЭЖХ.

Влияние концентрации белка

Восприимчивость mAb-1 к F/T-индуцированной агрегации исследовали при 5 мг/мл и 15 мг/мл (таблица 1).

Определение свободных тиолов в лекарственной субстанции mAb-1

Остатки цистеина в белке могут существовать в виде свободных тиолов (открытых или скрытых) и могут участвовать в образовании дисульфидных связей. Известно, что присутствие дисульфидных связей обеспечивает конформационную стабильность нативной структуры белка, однако в своей восстановленной форме (свободные тиолы) они могут способствовать нестабильности молекулы (образование внутри- и межмолекулярных дисульфидных связей), что приводит к ковалентной агрегации белка. .Литература подтверждает, что образование межмолекулярных дисульфидных связей способствует агрегации белков несколькими путями ^{1,11,12,13,14} . С этой целью были проведены исследования для количественного определения наличия свободных тиолов в mAb-1.

Анализ свободных тиолов основан на реакции свободных тиолов с реактивом Эллмана [5,5ʹ-дитиобис (2-нитробензойная кислота) или DTNB] с образованием окрашенного тиолатного аниона (TNB ^-2 ), количественный анализ спектрофотометрически при длине волны 412 нм.Образцы, денатурированные гидрохлоридом гуанидина, инкубировали в 96-луночном титрационном микропланшете с реактивом Эллмана при температуре окружающей среды, и оптическую плотность раствора в каждой лунке измеряли при 412 нм. Измеренное поглощение переводили в молярную концентрацию свободного тиола, используя стандартную кривую для гидрохлорида L-цистеина, обработанного аналогичным образом в денатурирующем буфере. Затем сообщали молярное отношение свободного тиола к белку.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым файл cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только та информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Что такое цикл оттаивания и какие проблемы с ним связаны?

Цикл разморозки
Тепловой насос забирает тепло из наружного воздуха и передает его внутрь, чтобы вы могли согреться.Когда температура снаружи становится низкой (в середине 30F), влага в воздухе замерзает на теплообменнике. Запускается цикл разморозки, чтобы избавить теплообменник от льда. Если теплообменник не разморозить, его эффективность будет снижена, и устройство может быть повреждено. Вы поймете, что устройство находится в режиме разморозки, когда внутренний вентилятор остановится, устройство перестанет нагреваться и начнет мигать индикатор. Вентилятор наружного блока также остановится, а компрессор продолжит работу. Количество циклов оттаивания вашего устройства зависит от нескольких факторов.Три основных из них — это общее состояние вашего устройства, количество тепла, которое устройство пытается отдать, а также температура и влажность наружного воздуха. В устройство встроен таймер, который контролирует, как часто устройство переходит в цикл разморозки. Когда температура снаружи приближается к среднему диапазону 30 sF, циклы разморозки будут происходить с шагом 30, 60 или 90 минут. Вот пошаговое основное объяснение того, что происходит во время цикла разморозки.

1. Датчик измеряет температуру наружных змеевиков.Если змеевики упадут ниже точки замерзания, внутренние часы отправят устройство в цикл разморозки.
2. Во время цикла внешний вентилятор останавливается. Компрессор продолжает работать, и установка переключается в режим кондиционирования воздуха. Наружные змеевики будут нагреваться и растапливать лед.
3. Резервные змеевики в печи включатся для поддержания температуры в вашем доме.
4. Цикл будет продолжаться до тех пор, пока змеевики не достигнут нужной температуры, и это должно произойти в течение 10 минут.

Если агрегат часто переходит в режим разморозки, возможно, что-то не так. Одна вещь, которую следует учитывать, заключается в том, является ли устройство недостаточным для площади, нуждающейся в тепле. Проконсультируйтесь с установщиком и поделитесь мнением профессионального специалиста по HVAC, чтобы помочь с этим. Другое соображение заключается в том, требуется ли регулярное техническое обслуживание. Вы можете очистить фильтры и убедиться, что на наружном блоке нет щеток, веток, листьев, сильного ветра, а теплообменник чист.Кроме того, постарайтесь снизить общий спрос на воздушный тепловой насос за счет хорошей теплоизоляции, уменьшения утечек воздуха через стены, потолки и полы, а также использования герметизирующих покрытий и других «зеленых» идей для вашего дома.

Одна из причин, по которой частые циклы разморозки вызывают беспокойство, заключается в том, что они могут быть явным признаком того, что что-то еще не так с устройством в вашем доме. Причинами образования инея может быть еще одна проблема или их сочетание. Другими причинами образования инея могут быть:

• Поврежденный наружный змеевик
• Плохой обратный клапан
• Проблема с проводкой
• Неисправный термостат
• Утечка хладагента
• Грязная катушка
• Вентилятор, который не включается
• Вентилятор, установленный задом наперед
• Двигатель работает в неправильном направлении
• Двигатель вентилятора вращается на низких оборотах.

Многие из этих проблем могут диагностироваться, устраняться и/или обслуживаться только профессиональным установщиком или компанией, занимающейся HVAC.

Основная проблема, которую следует учитывать при цикле оттаивания воздушного теплового насоса, заключается в том, что чрезмерное количество циклов может нанести вред деталям и механике системы. Помните также, что каждый раз, когда начинается цикл разморозки, запускается вспомогательный источник тепла, который используется для поддержания стабильной температуры в вашем доме. Это приводит к чрезмерному использованию электричества или другого источника энергии, который вы используете для питания своего дома.

Цель состоит в том, чтобы поддерживать максимальную производительность всего устройства, чтобы система инициировала циклы оттаивания, когда это необходимо. Это требует баланса между размером устройства для вашего дома, производительностью всех частей и общей производительностью устройства для вашего климата и географического региона.

Хотите больше? Ознакомьтесь с этими замечательными ресурсами по тепловым насосам

Высшая служба ремонта холодильников в Салгара Вк, Гульбарга

Процедуры дезинфекции Covid 19 и меры безопасности о стандартах ВОЗ

Сервисный партнер

Сулеха окажет услуги по дезинфекции помещений с положительными случаями ковид 19.Наши специалисты по обслуживанию продезинфицируют помещения в соответствии с СОП по дезинфекции covid 19.

Руководство по найму для службы ремонта холодильников в Салгара Вк, Гульбарга

Как воспользоваться услугой по ремонту холодильников

Холодильник – одна из значимых бытовых приборов. Он используется для хранения и охлаждения воды и продуктов питания. Основная цель использования холодильника — сохранить продукты прохладными и свежими. Хранение зеленых овощей, фруктов, молочных продуктов, приготовленной пищи и т. д.на жаре может их испортить. Однако с холодильником можно дольше сохранить все продукты и предотвратить их порчу. Очень важно содержать холодильник в чистоте и поддерживать его в рабочем состоянии. Любая неисправность или поломка этого важного прибора может вызвать проблему. Если у вас возникли проблемы с холодильником, вы можете обратиться к специалисту и устранить его. Заполнив данную форму, вы можете заказать услугу ремонта холодильника.

Как нанять мастера по ремонту холодильников в Сулехе

Сулеха — известный онлайн-портал для размещения бизнес-листов.Здесь вы можете легко заказать услуги по ремонту холодильников. Все, что вам нужно сделать, это заполнить данную форму, указав ваши требования. Исходя из ваших требований, наши специалисты свяжут вас с наиболее подходящими и квалифицированными специалистами. Специалисты по ремонту холодильников, отвечающие вашим требованиям, свяжутся с вами. Вы можете подробно обсудить с техником услугу, а также стоимость. Вы можете договориться о стоимости услуг и заказать услугу по доступной цене.

Виды услуг по ремонту холодильников, предлагаемые техническими специалистами

Известные специалисты по ремонту холодильников предлагают услуги по разным проблемам. Список распространенных проблем с холодильником, для решения которых вы можете нанять специалиста по ремонту, включает

• Утечка воды
• Нерабочая морозильная камера
• Сломанная ручка
• Холодильник шумит
• Образование инея
• Зловонный запах
• Проблемы с разморозкой
• Замораживание продуктов
• Без охлаждения и многие другие

Перечисленные в Сулехе инженеры также предлагают ежегодное техническое обслуживание холодильника.

Общие проблемы с холодильником

Как и другие бытовые электроприборы, холодильники также требуют очистки и обслуживания для эффективной работы. Пренебрежение неисправностями в начале может привести к более серьезным проблемам, а также к замене холодильного оборудования. Регулярная очистка, своевременное техническое обслуживание, заправка газом и т. д. могут помочь вам повысить производительность. Для решения технических проблем вашего холодильника вы можете заказать услугу ремонта холодильника. Опытные и квалифицированные инженеры осмотрят ваш холодильник и устранят проблему.Вот некоторые из распространенных проблем с холодильником, которые решаются техническими специалистами

.

Холодильник не охлаждает

Отсутствие охлаждения или недостаточное охлаждение — одна из наиболее распространенных проблем, с которыми сталкиваются пользователи холодильников. У этой проблемы может быть множество причин, таких как

.
• Змеевики конденсатора холодильника загрязняются, из-за чего они не работают должным образом. Тщательная очистка их может решить проблему.
• Возможно, не работает двигатель вентилятора испарителя.Ремонт или замена двигателя у специалиста — идеальный способ избавиться от этой проблемы.
• Неисправность пускового реле влияет на работу конденсатора. Вам понадобится профессионал для замены или ремонта пускового реле.
• Неисправность термостата контроля температуры может привести к отключению напряжения питания двигателя вентилятора испарителя, компрессора. Для решения этого вопроса вам понадобится профессиональная помощь.

Холодильник не размораживается

Вот список причин проблем с разморозкой в ​​холодильнике

• В случае неисправности таймера оттаивания система может не подавать питание на нагреватель оттаивания.Это может потребовать замены.
• Если датчик разморозки холодильника сгорит, система перестанет работать. Сброс предохранителя датчика разморозки не помогает. Единственным вариантом является замена плавкого предохранителя техническим специалистом.
• Отказ платы управления оттаиванием может повлиять на цикл оттаивания. Вам понадобится профессиональная помощь для осмотра и решения.

Проблема утечки воды

Если из вашего холодильника протекает вода, эта проблема может быть вызвана несколькими причинами, например

.
• Проблема в сборке резервуара для воды также может привести к утечке.
• В случае, если клапаны ослаблены, может помочь их плотная фиксация. Однако, если впускные клапаны треснуты, вам нужно обратиться к специалисту для их замены.
• Трещины в головке фильтра для воды, поддоне или корпусе фильтра для воды могут привести к утечке воды. Замена сломанных или порванных деталей техническими специалистами поможет вам.

Шумный холодильник

Если ваш холодильник издает странные звуки, это может быть связано с неисправностью двигателя вентилятора испарителя морозильной камеры.Наряду с этим, еще одной причиной может быть неисправная пластина конденсатора. Если лопасти конденсатора свободны от препятствий, они издают шум. Для диагностики и устранения фактической причины этой проблемы вы можете обратиться за профессиональной помощью.

Замораживание продуктов

Морозильная камера замораживает продукты, а отделение для свежих продуктов в холодильнике сохраняет их прохладными. Однако если на продукты в отделении для свежих продуктов попадут кристаллы льда, возникнут проблемы. Причиной этой проблемы может быть дефект главной платы управления, термостата контроля температуры и термистора или платы контроля температуры. Заказ надежного мастера по ремонту холодильников будет идеальным решением для решения этой проблемы.

Прохладный морозильник и теплый холодильник

Часто это происходит, когда морозильная камера остается прохладной, а отделение для свежих продуктов остается теплым. Возможные причины этой проблемы:

• Если двигатель вентилятора испарителя перестает работать, холодный воздух не поступает в отделение для свежих продуктов. Это может быть причиной нагрева холодильника.
• Неисправность таймера разморозки и платы управления также может повлиять на цикл разморозки и работу холодильников.
• Дефект узла нагревателя оттайки

Стоимость обслуживания холодильника в Салгара Вк, Гульбарга

.