Чсв в вк: Что значит чсв в вк

Содержание

Что такое ЧСВ в молодежном сленге

Обновлено 24 июля 2021 Просмотров: 176 540 Автор: Дмитрий Петров

Что значит ЧСВ
Собственная важность у молодежи
Чем опасно ЧСВ
Как бороться с этим порочным чувством

Здравствуйте, уважаемые читатели блога KtoNaNovenkogo.ru. Если вы пользуетесь социальными сетями либо играете в сетевые игры, вам наверняка встречалось это мудреное сокращение. Равно как и многие другие, о которых я уже писал (обозначающий ехидный смех LOL, издевательский смех «кек», доказательства «пруф» ).

В молодежном сленге (что это такое?) ЧСВ разгулялось не на шутку. Используют его направо и налево. Стараясь обидеть, вам могут написать неприятный комментарий с этими тремя буквами, вы чувствуете, что вас хотят поддеть, но нет полного понимания что это означает и как именно лучше ответить.

Знакомая ситуация? Давайте выходить из неудобного положения вместе, тем более что эти три веселых буквы могут быть применены к вам по делу и имеет смысл взглянуть на себя и свое поведение без розовых очков.

Что значит ЧСВ?

Часто применяемое и не всеми понятое всегда интригует. Что же это такое или, может быть, кто такой ЧСВ? Уместно ли использовать это выражение в общении?

ЧСВ это аббревиатура, и ее расшифровка – чувство собственной важности. Когда человек считает себя лучше окружающих, не слушает никого и не приемлет убеждения других людей, то рискует получить в ответ эти три веселых буквы.

Задавая вопрос, такой человек (осознающий собственную важность) не хочет слышать ваш ответ, ему важно, чтобы слышали его. Есть очень близкое по смыслу выражение, но уже из области медицины — мания величия.

Некоторыми интернет-пользователями ЧСВ расшифровывается, как чувство собственного величия, что тоже применимо и не искажает смысла. В любимой нами латыни Persona grandis означает важная личность. Второй вариант расшифровки, Persona exaltatio, в переводе – величественная личность, имеется и другое толкование – личность с гордыней.

– Ну, все понятно! – воскликнете вы облегченно. – Меня это не касается, я рубаха-парень с кучей друзей.

Не стоит спешить с выводами, господа.

Собственная важность у молодежи и не только

Чувство собственной важности есть абсолютно у всех людей. Его внушают нам с детства. В обществе потребления, где нам не повезло родиться, без этого не обойтись. Помните, как вам говорили, что надо быть первым, лучше учиться, заниматься спортом, соревноваться со сверстниками, опередить всех по красоте, стройности, одежде.

Особенно ЧСВ обострено у молодых людей. Подросток нуждается в похвале и поддержке окружающих, стремится любой ценой завоевать признание и популярность среди ровесников, невзирая на «горы трупов» позади.

Интересна не только расшифровка, но и трактовка ЧСВ в некоторых кругах молодежной среды. Например, среди геймеров это воспринимается как оскорбление, обращенное к участникам с завышенной самооценкой, не имеющей под собой оснований.

Они слишком переоценивают собственную значимость, теряя способность трезво мыслить, что становится причиной большинства личностных проблем. Геймеры же (кто это такие?) — это прежде всего люди, умеющие играть в команде, где слишком заносчивые будут только всем мешать.

В глазах сообщества это негативная черта характера, от которой нормальному человеку необходимо спешно избавляться. А хотите знать, что значит ЧСВ в ВК?

Указание на недостойное поведение! Этот намек расстраивает, отрезвляет, вынуждает обратить внимание на собственные недостатки.

Когда кто-то в среде онлайн-игроков или соцсетях хвастается феноменальными достижениями, это первый признак ЧСВшника. На замечания эти люди зачастую отвечают агрессивно (почти как хейтеры), ибо очень зависят от общественного мнения.

Они, в самом деле, верят в собственную незаурядность. Им необходимо подпитывать осознание своего величия. Поэтому в ход идут выдуманные подвиги и таланты. В зеркало посмотрели? Такого человека там не увидели? Ну, и хорошо.

Чем опасно ЧСВ

Парадокс в том, что человек лелеет чувство собственной важности, чтобы его принимали, любили, поклонялись и восхваляли. Но в пылу, увлекается собственной персоной и становится:

заносчивым;
тщеславным;
агрессивным;
черствым;
эгоцентричным.

Из этого юмористического видео понятно, кто такой ЧСВшник.

В результате происходит то, чего он боится больше всего:

окружающие отворачиваются от него;
друзья избегают общения;
постоянно возникают конфликты;
возникают проблемы на работе, дома;
психологические проблемы нарастают, как снежный ком.

Перечень неприятностей можно продолжить, как драматическую историю страданий личности с завышенным ЧСВ. Мы с подобным сталкиваемся каждый день, когда встречаем обозленных людей, полагающих, что против них сговорился целый мир (давлеет злой рок — этакая разновидность фаталистов).

Опасность ЧСВ в том, что оно забирает энергию у нашей личности каждый день. С оставшимися силами нас хватает только на то, чтобы сдаться на милость социуму и его правилам. Так считал мыслитель Карлос Кастанеда.

А теперь об опасности завышенного чувства собственной важносности серьезно. Вот видео с информацией к размышлениям.

Причем не только заносчивые самодовольные личности имею раздутое ЧСВ. Ощущение себя неудачником, никчемным человеком тоже проявление чувства собственной важности. Мотивация у мании величия и жалости к себе одинаковая. Эти мысли и эмоции с противоположными знаками становятся причинами ежедневного помешательства.

Как обуздать чувство собственной важности

Хотите сказать, что вас это утверждение не касается? Тогда ответьте себе на вопросы:

как мы, люди, можем нещадно использовать природу, людей и одновременно кричать о загрязнении, несправедливости, поголовном эгоизме;
почему мы не умеем просто наблюдать, не критикуя, не навешивая ярлыков;
насколько значительную роль мы играем в мироздании.

Кастанеда писал, что ЧСВ это наиболее сильный и главный наш враг. Обиды и нападки окружающих достигают цели с нашего разрешения и делают нас слабее.

Гордыня заставляет нас чувствовать себя оскорбленными, униженными. Мы теряем силы, которые помогли бы нам расширить виденье мира. Избавляясь от ЧСВ, мы становимся непобедимыми.

Как вы считаете, есть о чем подумать?

Удачи вам! До скорых встреч на страницах блога KtoNaNovenkogo.ru

Эта статья относится к рубрикам:

«ЧСВ» – как расшифровывается эта аббревиатура? Что означает ЧСВ в VK? Что такое чсв в молодежном сленге.

Чувство собственной важности — (ЧСВ ) концепция, использованная Карлосом Кастанедой в своих книгах, описываемое как чувство превосходства над кем либо или чем либо, значимости самого себя и своих поступков.

Чувство собственной важности – основные его признаки это высокомерие, тщеславие и честолюбие . ЧСВ крайне негативно влияет на общение, и человек, которому оно присуще, находится в постоянном напряжении от страха запятнать репутацию . Осознание этого позволит в дальнейшем избавиться от собственных страхов и недостатков.

Если у вас отсутствует ЧСВ, то вас не смогут ранить слова и поступки. В таком случае энергия будет направляться на выполнение важных жизненных целей и очистит мысли от надуманных проблем. Отсутствие чувства важности позволит быть увереннее в себе и своих силах, так как вы избавитесь от несуществующих образов.

Люди, которые ознакомились с теорией ЧСВ, не замечают этого. Чтобы помочь человеку осознать недостатки, необходимо ненавязчиво указать на них, но с особой осторожностью и чуткостью.

Основные признаки завышенной самооценки

Постоянное ощущение обиды на кого-то – возникает ощущение униженности, непонимания общества. Проблема заключается в неправильном восприятии мира или определенной ситуации. Люди с такими ощущениями очень редко относятся к окружающим с большой признательностью.
Увеличение чувства собственной необходимости – человек ставит свои мысли и желания выше других.
В человеке зарождается тщеславие и гордыня.

Отсутствие доверия к окружающим – обычно раздутое чувство собственной важности провоцирует возникновение разного рода опасений и недоверия.

ЧСВ в большинстве случаев – обычное проявление невроза, которое провоцирует человека на демонстрацию своей персоны в самых лучших красках. При самых сложных ситуациях не стоит подавлять в себе личность.

Как избавиться от ЧСВ?

Люди могут справиться с ЧСВ. Для этого необходимо помнить:

Чем проще ваши мысли и действия, тем лучше к вам относятся люди.
Не бойтесь смеяться над собой и показаться кому-то глупым. Для всех невозможно стать хорошим человеком.
Повышайте уровень осознанности, читая книги по саморазвитию.
Найдите наставника с высокими духовными качествами.

Чтобы избавиться от чувства собственной важности необходимо постоянно трудиться и прилагать к этому максимум усилий. При любых его проявлениях следует помнить, что оно совершенно бесполезное. Нужно уметь признавать недостатки и говорить о них вслух. Если вы проявляете чрезмерную гордость или напыщенность, то вы тем самым показываете слабость и неуверенность. Многие люди научились справляться с этими проявлениями. Если вы действительно захотите усмирить собственное ЧСВ, то не позволяйте самозабвенным фантазиям затуманить ваш светлый ум.

Как общаться с людьми с завышенным ЧСВ?

Взаимоотношения людей построены на взаимной выгоде . Каждый участник при общении желает получить позитивные эмоции, полезную информацию, ощущение значимости, определенную выгоду. Но если при общении с таким человеком вы не получаете нужной отдачи, то это является большой проблемой, которую необходимо решать.

Обычно люди выбирают самый простой способ – прекращают общение. Но это может быть ваш близкий родственник или товарищ, с которым вам приходится пересекаться.

Вам придется поставить человека на «место». Изначально можно решить проблему дипломатичным путем и мягко намекнуть о том, что в первую очередь человек должен обратить внимание на свое поведение и найти проблему. Если он не прислушивается к замечаниям, скажите ему открыто то, что вас не устраивает. Не доводите дело до ссоры и взаимных оскорблений.

Людей с ЧСВ просто необходимо пожалеть. Возможно, на его проблему повлияла детская травма или взаимоотношения с родителями, или общество навязало ему мысль о том, что он лучше всех и во всем. Ему живется не очень просто. У него нет людей, которые всегда смогут поддержать. Такой человек не доверяет даже самому себе.

Побольше общения с новыми людьми.

Победить гордыню и полностью осознать, что на свете много людей не хуже вас, можно благодаря общению с окружающими. Необходимо стараться чаще выходить из привычного, сложенного круга общения и узнавать новых людей.

Если Вы никогда не ходили в спортзал – пойдите. Вы увидите, сколько людей выглядят лучше, говорят умнее, имеют больше жизненного опыта и способны посоветовать что-то дельное. Такие встряски сильно бьют по самолюбию, но отчетливо показывают пагубность чувства собственной важности. Обычно оно порабощает людей, у которых не много жизненного опыта и достойных знакомых.

Исследовать источник.

Для лучшей борьбы с ЧСВ нужно постараться отследить, откуда берет начало чувство. К примеру, человек считает себя лучше остальных потому, что хорошо учился в институте. Но теперь нужно взглянуть на ситуацию под другим углом: а такой ли он умный, чтобы возвышаться, смог ли найти достойную высокооплачиваемую работу и реализовать ум, помогли ли институтские оценки в дальнейшей жизни?

В 99 случаях из 100 ответ будет отрицательным, а значит повода для гордости нет.

Прекратить спориться по пустякам.

Многие ЧСВ личности страдают общей болезнью – желанием побеждать в спорах на любые темы. Что полезней кушать, сколько нужно спать, как правильно воспитывать детей, возможна ли жизнь на Марсе. Им все равно на реальное положение дел – просто нужно победить убедительной болтовней в споре и потешить самолюбие.

Чтобы срубить чувство собственной важности, нужно начать контролировать себя и не впутываться в пустые споры. Когда приходится переубеждать другого человека по какому-либо вопросу, для этого нужно использовать серьезную и подходящую информацию, а если ее нет, то лучше не спорить.

Полезные материалы

Подписаться на сайт

Ребята, мы вкладываем душу в сайт. Cпасибо за то,
что открываете эту красоту. Спасибо за вдохновение и мурашки.
Присоединяйтесь к нам в Facebook и ВКонтакте

Активные пользователи сети интернет нередко сталкиваются с аббревиатурой ЧСВ. Также с этим понятием не понаслышке знакомы поклонники компьютерных игр. Что значит ЧСВ, как это расшифровывается?

Значение ЧСВ

Часто эта аббревиатура употребляется в словосочетаниях «ЧСВ зашкаливает», «ЧСВ завышено» и «повышенное ЧСВ». Что имеет в виду пользователь, употребляя эти слова?

ЧСВ – это чувство собственной важности . Другая расшифровка аббревиатуры – чувство собственного величия .

Человек с завышенным ЧСВ считает, что он осведомлен во всех делах гораздо лучше, чем другие люди. Он имеет личную точку зрения на все события и думает, что только она является правильной.

Такой человек имеет высокое мнение о своих суждениях. Он не прислушивается к мнению окружающих, игнорируя или высмеивая их слова. Он считает себя самым главным и самым важным.

История аббревиатуры ЧСВ

Родоначальником данной аббревиатуры считается писатель Карлос Кастанеда. Он разработал концепцию ЧСВ и использовал ее во многих своих трудах.

Кастанеда негативно относился к величию и эгоизму, он писал, как следует побороть свое эго, чтобы увидеть все краски окружающего мира. Избавление от ЧСВ освобождает массу энергии и наделяет человека безграничной силой. Сделать это не просто, ведь личность, как правило, наполнена ЧСВ на 90%.

Дон Хуан, альтер эго Карлоса Кастанеды, учит читателя перестать ставить личность в центр и призывает нас «снять корону». Он сравнивает человека с жуком, который, возможно, также имеет большое ЧСВ и видит этот мир сквозь призму личности.

Это мешает познать мир, насладиться гармонией вселенной и познать радость бытия.

Признаки ЧСВ

Чтобы понять, чсв что это такое, следует выделить ряд признаков, которые характерны для личности подобного типа:

Самовлюбленность и эгоцентризм
Самовосхваление своих талантов
Постоянная демонстрация превосходства над другими

Понятие ЧСВ стало популярным интернет-мемом. Этот мем характеризует людей, которые в комментариях или интервью подчеркивают собственную значимость и постоянно делают ссылки на важность своей персоны. Такие люди высокомерны, они насквозь фальшивы, и общение с подобными личностями приносит мало радости.

Истоки ЧСВ

С точки зрения психологии, человек с завышенным ЧСВ имеет много комплексов. Он прячет свой страх и неуверенность за эгоизмом. Человек так старательно скрывает комплексы, что и сам не догадывается об их существовании.

Также личности с ЧСВ интуитивно отталкивают других людей, так как они боятся общения. Они скрывают свою сущность за громкими высказываниями и фальшивыми похвалами, адресованными себе. Люди с высоким ЧСВ тонко чувствуют свою ущербность и неполноценность. Они боятся перемен, поэтому и вынуждены пропускать через свою личность все события и давать им точную характеристику.

Грамотная работа с психологом поможет выявить причину такого поведения. Чсв что это? Это травма, чаще всего она кроется в детстве. Обиды и слезы заставили маленького человека надеть на себя броню ЧСВ. Чтобы стать гармоничной личностью, надо от нее освободиться.

Как избавиться от ЧСВ

Чтобы перестать ставить свою личность выше других людей, стоит вспомнить афоризм: «Будь проще, и люди к тебе потянутся».

Научитесь смеяться над собой. Подшучивайте над собственными поступками. Критикуйте себя. Причем лучше это делать в присутствии других людей. Не бойтесь показаться смешным или глупым.
Попробуйте повысить уровень осознанности жизни. Не критикуйте перемен, не прячьтесь от неизбежного. Посмотрите на события с высоты птичьего полета и удивитесь, насколько все происходящее красиво и гармонично.
Не стоит забывать о духовном росте. Найдите список книг, которые благоприятно влияют на личность. Начните с классики, попробуйте найти ответы на свои вопросы в шедеврах мировой литературы. Пополните свою библиотеку книгами по духовному росту и развитию.

Человек с завышенным ЧСВ – это эгоист, не способный трезво смотреть на вещи.

Соцсети привнесли в язык много терминов, одним из них стало ЧСВ. Узнать, что это значит и где применяется, сложно, если человек не догадывается о расшифровке, а подсказать ему некому. Интернет-сленг использует аббревиатуру ЧСВ лишь для указания на задетую чрезмерную важность оппонента.

Что означает ЧСВ и как расшифровывается

Впервые сочетание ЧСВ появилось в русскоязычном интернете среди поклонников Карлоса Кастанеды – испанского эзотерика и мистика. Он описал в книгах моральное возвышение над другим человеком в речи, а не в делах. Заинтересовало сокращение ЧСВ – что аббревиатура значит? Эти три буквы раскрываются как «чувство собственной важности». Иначе ЧСВ можно назвать оцениванием себя, от которого сложно избавляться.

Из-за того, что человек постоянно оценивает свою значимость и достоинство высоко, это отнимает много времени, препятствует трезвому взгляду на ситуацию и принятию решения. Согласно книгам эзотерика, чувство собственной важности – отрицательное, от него надо избавляться, потому что оно задействует много энергии, оставляя силы лишь на следование социальным предписаниям и условностям.

Завышенное ЧСВ в соцсетях

Нередко использование словосочетания ЧСВ встречается в социальных сетях, где можно скрыться за фотографией аватара и утверждаться в значимости за счет других. Аналогом аббревиатуры служат термины высокомерия, чванства и гордыни. Люди с чувством собственной важности постоянно преподносят свои заслуги другим. Пренебрежение своими достоинствами также указывает на завышенное чувство собственной значительности.

Другой вариант, где можно встретить термин, – онлайн-игры. Там он применяется по-разному – в различных типах игр, но часто упоминается и в аналогичном социальным сетям контексте. Игрок, обладающий манией величия, переоценкой себя и своих возможностей, высокомерием и нарциссизмом, заслуживает «награждения» этим описанием. Из онлайна характеристика переходит и в жизнь, проявляясь как хвастовство и честолюбие. Избавляться от этого сложно.

Что значит ЧСВ Вконтакте

Не все люди знают, что такое ЧСВ в ВК. Узнать об этом чувстве, свойственном человеку, можно по следующим проявлениям:

человек гордится собой, считает себя важным, ставит мнение выше слов окружающих;
тщеславию, честолюбие, чрезмерное чувство достоинства;
человек не способен слышать критику в свой адрес;
не может нормально понимать людей, говорить с ним сложно;
требует по отношению к себе максимального уважения, даже при отсутствии реальных дел;
постоянно обращает внимание на свой аккаунт – оставляет сам себе комментарии, «лайкает» свои записи, пишет много статей, оставляет spoiler в рецензиях на фильмы, не уважая пожелания и мнения других людей.

Кто такой чсвшник в Доте

Если вам нравится соревновательная игра Дота 2, то не помешает лучше узнать: ЧСВ – что значит это при общении с другими пользователями. Все игроки достигают разного уровня мастерства, из-за чего в чате между лучшими и теми, кто справляется похуже, могут возникать конфликты. Большинство выигравших хвалятся мастерством невероятного уровня, и их можно обвинить в чрезмерном ЧСВ.

Чувство собственной важности подразумевает, что человек сильно преувеличивает и превозносит свою значимость или мастерство, демонстрируя окружающим несуществующие таланты. У игрока возникает агрессия на любые слова или действия, ведь на деле внутри он тоже считает себя неполноценным. Человек с завышенным чувством важности в Доте слишком зависим от мнения окружающих, придает ему много внимания, поэтому отличается тщеславностью.

Что такое чсвшник dark age

Другая популярная игра – Dark Age – в разделе популярных вопросов отвечает о ЧСВ – что значит этот термин. Расшифровывается это как число силы вещей. У каждого игрока есть слоты – вещи, которые повышают важность в игре и уровень защиты. К значимым категориям относятся сами вещи, заточка, самоцветы. Чем больше таких слотов на игроке, тем выше его сила. Подробнее об этих терминах можно узнать напрямую на сайтах MMORPG серверов Dark Age.

Число силы вещей выражается количественно, составляя сумму всех имеющихся предметов. Влиять на это могут одежда, камни умения, предметы, имеющиеся у питомцев и лошадей. Параметр числа силы вещей имеет прямую зависимость от количества приобретенных или полученных оберегов, магических предметов. Повышать их уровень можно заточкой, украшением самоцветами и камнями, переплавкой.

Видео: чем опасно чувство собственной важности

» или слово « «, но и сокращённых аббревиатур. Одна из таких аббревиатур — ЧСВ. В этой статье рассмотрим ЧСВ — что значит эта аббревиатура и устное её использование при общении.

Также как и «кек», ЧСВ является распространённым интернет-мемом, который люди используют, в основном, при общении в социальных сетях. Данное сокращение принимает два, очень близких друг-друг, значения. Это «Чувство Собственной Важности» и «Чувство Собственного Величия».

«Чувство Собственной Важности» и «Чувство Собственного Величия» (ЧСВ)

«Чувство Собственной Важности» или «Чувство Собственного Величия» (ЧСВ) — это чувство превосходства над чем-либо или кем-либо, чувство повышенной значимости самого себя, своих действий и поступков, не отражающего реальной картины происходящего. Концепцию ЧСВ использовал Карлос Кастанеда во многих своих книгах. Дон Хуан потратил много времени и усилий на разъяснение значения понятия ЧСВ, так как оно является чрезвычайно ёмким.

Используя все объяснения, который даём нам дон Хуан, ЧСВ имеет такое описание и значение:
«Данное чувство изначально не присуще человеку, оно привносится в человека снаружи. Заставляя конкретного человека в течении всей жизни, то есть постоянно, проверять собственную значимости и важность, жизненные ценности этого человека меняются. Результаты подобных проверок выдвигают на первое место, среди всех жизненных ценностей человека, ценности, которые удовлетворяют его ЧСВ. При этом не удовлетворяющие ЧСВ ценности — отодвигаются на второй план или вовсе отбрасываются.

К сожалению, в раздел понятий не удовлетворяющих ЧСВ (неважных) в результате попадает даже сама жизнь человека. Чтобы не утратить ЧСВ человек готов пойти на любую глупость и даже смерть. При этом ЧСВ деструктивно и кроме вышеуказанной переоценки самого себя не несёт существенных изменений в способностях и жизни человека. Главной предпосылкой достижения чувства воина, а также принятия ответственности за свои свои поступки и стирание личной истории, является потеря чувства собственной важности или величия. Понятие ЧСВ выделено во многих книгах, особенно в третьей книге «Путешествие в Икстлан».

Таким образом, часто используя понятие ЧСВ в интернете, само понятие ЧСВ стало распространенным интернет-мемом, характеризующем людей, которые чрезмерно демонстрируют и преувеличивают перед окружающими свою важность и значимость своей персоны в глазах других людей и сообщества в целом.

Симптомы и характеристики ЧСВ

Характеристиками и симптомами ЧСВ являются:

излишняя или исключительная самовлюблённость и эгоизм
преувеличение своих талантов и своей роли
демонстративное поведение

Увидев подобные симптомы, можно с уверенностью диагностировать у человека ЧСВ.

Афоризмы и фразы людей с ЧСВ

Люди с ЧСВ часто употребляют подобные афоризмы и выражения:

Я Д’Артаньян, а вы все п*дарасы
Мне на всех пофиг, я делаю своё дело и так, как считаю нужным (если произносится вне связи с чем-либо)
У меня +100500 правок каждого поста на форуме, при переписке
У меня значительный вклад в статьях, а ты флудер и троль
и так далее.

Как и когда используется ЧСВ

Наиболее часто ЧСВ применялось к таким деятелям, как Артемий Лебедев, Варракс, Катя Гордон, Ярослав Золотарёв, Димитрий Подковыров и так далее. Также ЧСВ приписывается активистам Википедии, которые в википроектах часто совершали самопиар — Аюз, Погребной-Александров и Голдберг.

Аббревиатуры, вроде как, полезный предмет — можно при помощи пары букв выдать сразу целое предложение. Очень удобно в плане административного управления, не приходится по десять раз перечислять все регалии какого-то заведения, когда их можно сократить до 7-8 букв и пустить одной строкой. Но вот в повседневном общении — беда, особенно когда пишут, что ты «ЧСВ». Как расшифровывается сокращение, приходится уже искать в сети, и так сразу не ответишь.

Как расшифровывается ЧСВ?

В самой аббревиатуре всего три буквы, так что запутаться сложно:

Ч — чувство.
С — собственной.
В — важности.

Это действительно старое сокращение и уже лет десять назад в сети его активно использовали, во всяком случае, в узких кругах. Но раньше его хоть правильно применяли «на практике»:

У тебя ЧСВ слишком высокое.
Непомерное ЧСВ, как у представителя «голубых кровей».
Твое ЧСВ может достать до Луны, а может даже и до Марса.
Машка, конечно, симпатичная зараза, но ЧСВ у нее до небес.

Но с годами что-то изменилось, что-то пошло не так и три буквы стали использовать уже даже не как сокращение, а в качестве какого-то определения. Сегодня вполне реально услышать:

Ты ЧСВ.
Ну он и ЧСВ.
Паша на самом деле ЧСВ-дурак.

Как бы изначальное значение не изменилось, речь все еще идет о раздутом самомнении. Но новый вариант применения кажется уже каким-то совсем не литературным, не подходит расшифровка.

Что такое ЧСВ в ВК?

Это намек на ваше раздутое чувство важности, по мнению собеседника.
Человек негативно настроен и склонен к конфронтации.
Стоит прислушаться к замечанию, если оно звучит не первый раз и от разных людей.
Вполне допустимо как-то едко ответить.

Но если у человека уже сформировалось определенное мнение, переубедить его будет сложно или практически невозможно. Любой дальнейший поступок будет трактоваться, как попытка сохранить ощущение собственной важности, ну та же защита своего ЧСВ.

С другой стороны, зачем пытаться оправдываться в глазах каждого встречного, иногда проще немного откорректировать свой круг общения и все вернется на круги своя. Если человек относительно вас предубежден, это только его проблемы и его неадекватное восприятие окружающего мира. Вы же не врач, чтобы лечить всех от их недугов.

Почему все не любят ЧСВ?

Иногда собеседник действительно «сильно много на себя берет». Здесь стоит запомнить пару вещей:

Человек ведет себя ровно так, как ему позволяют себя вести.
Если знакомый или знакомая пытается вытереть об вас ноги, значит, раньше вы активно подставляли себя в качестве этой самой тряпки.
Сбить спесь с человека очень сложно. Самомнение может вырасти за пару дней, а потом даже долгие месяцы работы не помогут исправить ситуацию. Сдувать эго — сложная задача.
Лучше всего прекратить общение, хоть на время. Если даже этот шаг не возымел эффекта и не сработал в качестве контрастного душа — для вас человек потерян, 100%. Может, для общества тоже.

Общаться с людьми, которые внезапно решили, что они значительно лучше окружающей серой массы — задача непосильная . Иногда спасает тот факт, что у некоторых особ действительно есть какие-то поводы так думать:

Незаурядные интеллектуальные способности.
Литературный талант.
Многочисленные награды в области науки или спорта.
Признанный музыкальный талант.

Но некоторые люди лелеют свое эго, опираясь лишь на недостатки воспитания. Родители «вбили», что дите лучшее в мире и все, теперь даже будучи посредственностью, чадо будет рассчитывать на внимание со всех сторон. Такие ситуации разрешаются очень быстро и, как правило — очень большими разочарованиями и разрывом шаблонов .

Как реагировать на замечание?

Стоит ли обращать внимание на своих знакомых, которые начали упрекать в слишком высоком ЧСВ? Сначала следует задаться парочкой вопросов:

Давно ли вы знаете человека?
Собеседник всегда давал только хорошие советы?
Вам кажется, что она заботится о вашем благополучии?
Сами ощущаете, что в последнее время в поведении что-то изменилось?

Если на все заданные вопросы ответ «да», это можно расценивать как первый тревожный звоночек. Окружающую реальность необходимо воспринимать максимально объективно, чтобы не возникло каких-то серьезных разочарований. Многие неудачи случаются лишь из-за того, что человек переоценивает свои скромные способности и без должной подготовки пытается добиться недостижимых для него, на этом этапе, результатов.

Чем больше ваше эго соответствует реальной картине мира, тем больше шансов со 100% эффективностью реализовать свои ресурсы и добиться какого-то вполне реального результата.

Непомерное ЧСВ у парня

Порой отношения в формате «парень-девушка» приводят к тому, что у одного из партнеров ЧСВ взлетает до небес. Точнее, ошибки другого партнера и завышение уровня значимости приводят к такому печальному результату. В плане контактов с остальными это может практически не проявляться, но вот в отношениях гарантированно появится «комнатный тиран». Бороться в этой ситуации следует, используя даже «грязные» методы:

Продемонстрируйте человеку, что он не вершина мира. Желательно, при людях и желательно так, чтобы этот «контрастный душ» партнер не связывал с вашей персоной.
Обзаведитесь новыми контактами, покажите, что не испытываете какой-то физической или психической зависимости.
Поучаствуйте в паре проектов, продемонстрируйте результат, добейтесь публичного признания собственных успехов. Все очень вариативно, в зависимости от сферы деятельности и увлечений.
Начните вести себя абсолютно так же, не обращая внимания на чувства и потребности партнера. Хуже уже не будет.

В любом случае, раздули ЧСВ ему или ей вы самостоятельно , так что теперь своими силами придется возвращать все к норме. Или прощаться, такова жизнь.

Что значит «ЧСВ» — расшифровка

Аббревиатура ЧСВ не так уж сложна, как это может показаться:

Расшифровывается как «чувство собственной важности ».
Употребляется в сети. Но в последние пару лет сокращение стали употреблять и в реальной жизни.
Указывает на раздутое самомнение человека, его непомерное эго, несоответствующее реальным возможностям.
Не несет в себе никакого оскорбления, но обычно говорит о том, что собеседник не прочь развить конфликтную ситуацию.

Сегодня в сети, вместо того чтобы подбирать правильные слова о раздутом эго и самомнении, просто пишут — «ЧСВ ». Три простых буквы, но в чьих-то глазах это настоящее клеймо для собеседника. На самом деле, заботитесь вы о своем имидже или нет, как-то публично на такое заявление реагировать бессмысленно. Но вот пересмотреть само поведение и кое-что в нем отредактировать может и стоит.

Когда говорят о чьем-то ЧСВ, как расшифровывается аббревиатура можно спросить у самого собеседника. Это, кстати, докажет, что вы готовы признать пробелы в своих знаниях и что вероятно у вас все в порядке с этим самым ЧСВ.

Видео о значении ЧСВ

ЧСВ, що значить на молодіжному сленгу, в ВК?

Це зовсім не переклад, слово не застосовується в іноземній лексиці. Це не що інше, як абревіатура, яка розшифровується як почуття власної важливості або почуття власної величі. В основному використовується в молодіжному сленгу, в ході інтернет-спілкування.

Що означає слово ЧСВ, переклад:

Це один з безлічі інтернет-мемів. Тому, якщо вам кажуть, що ви завищене ЧСВ, це не комплімент, означає завищену самооцінку. ЧСВ — це своєрідний прототип або синонім слова самооцінка.
Якщо кажуть, що ЧСВ занижена, значить, низька самооцінка. Якщо ж навпаки, то у людини корона на голові, і він хоче здатися більш важливим, ніж є насправді. Чому саме серед молоді?
Ця категорія населення ще не домоглася значних успіхів у своєму житті, характер в цей час формується, і це період, коли підліток вже відчуває себе дорослим, вважає, що має право заперечувати дорослим і висловлювати власну точку зору.

ЧСВ, що значить на молодіжному?

Для людей, які відрізняються завищеним почуттям власної важливості, притаманні такі риси характеру:

Постійно влазять у бесіду, перебивають
Часто висміюють людей, виставляючи їх не з найкращої сторони, звертаючи увагу на їх недоліки
Постійно намагаються висловити власну точку зору, та показати себе крутим, або вказати на перевагу

ЧСВ, що значить на молодіжному:

Без почуття власної важливості неможливо розвиватися. Наше суспільство побудоване таким чином, що люди прагнуть бути краще, ніж вони є насправді, тому іноді займаються тим, що їм не по душі, щоб отримати визнання оточуючих.
В результаті цього людина може домагатися великих успіхів. Коли індивідуум розуміє, що добився всього, чого хотів, його розпирає гордість за самого себе, а також почуття власної важливості.
Іноді існує продовження подібної ситуації, і людина стає надто зарозумілим, починає страждати манією величі. На жаль, в більшості випадків почуття власної важливості виявляється зовсім непотрібним, так як іноді заважає жити.

Що значить ЧСВ у молоді в ВК?

Незважаючи на те, що це інтернет-мем, проблема має більш глибоке коріння. Цю абревіатуру часто використовував у своїх творах Карлос Кастанеда. Люди старшого покоління поняття не маю що таке ЧСВ, так як абревіатура з’явилася кілька років тому. Останнім часом вона досить популярна в іграх, в Duty, Minecraft, а також в деяких соцмережах. Люди взагалі не часто застосовують цю абревіатуру. Що означає ЧСВ ВКонтакте?

Що значить ЧСВ у молоді в ВК:

Як зазначалося вище ВКонтакте це свого роду мем, який означає, що у людини дуже висока зарозумілість. Відповідно доводити йому що-небудь, або свою правоту практично неможливо, так як єдино правильним варіантом є запропонованої ним.
Психологи стверджують, що ЧСВ — це не просто мем, або одна з рис характеру. Це може викликати багато занепокоєння, а також проблем у спілкуванні зі школярами, однолітками і батьками.
Такі люди зазвичай дуже пихаті, зарозумілі, емоційні, завжди будуть доводити свою правоту. У таких підлітків виникає багато проблем з вчителями, так як вони не хочуть визнавати своїх помилок.

ЧСВ, що значить на молодіжному сленгу, небезпека

Крім того, ускладнюється повідомлення з батьками, так як вони для підлітка не є авторитетом. Єдино правильним варіантом, вибором і думкою є його особисте.

ЧСВ, що значить на молодіжному сленгу, небезпека:

Вперше термін став використовувати Карлос Кастанеда в своїх творах. Це філософ, мислитель, езотерик, а також антрополог, праці якого були сприйняті неоднозначно. Саме він придумав цю абревіатуру, вперше став використовувати у творі про Дона Хуана.
У даному випадку мова йшла про мага, який часто брав участь у різних ритуалах. На його думку, для того щоб з’єднатися з духами, з природою, необхідно повністю відмовитися від почуття власної важливості і гідності, як би знецінити себе.
Зараз же в основному в соцмережах, ВКонтакте абревіатура використовується з деяким негативним значенням, і означає, що людина зарозумілий, егоїстичний, егоцентрична і зарозумілий.

Фахівці вважають, що люди з високим ЧСВ можуть бути пацієнтами психологів, тому що нерідко зарозумілість перетікає в манію величі. Це вже психологічна проблема, яка може стати справжньою перешкодою успішного життя.

ВІДЕО: ЧСВ у молоді

Что такое чсв сленг.

Афоризмы и фразы людей с ЧСВ

Всемирная паутина затягивает в сети большую часть имеющего к ней доступ населения, особенно молодёжь. Интернет не статичен, постоянно меняется и развивается по собственным законам, что приводит к возникновению новых тенденций и веяний. Так, пользователи социальных сетей давно привыкли к постоянному мельканию в ленте слова ЧСВ, к возможному контексту и давно воспринимают его в качестве способа троллинга или формы оскорбления.

Огромное количество мемов, видео, шуточек по данной проблеме заполонило русскоязычную сеть (всё-таки Чувство Собственной Важности – продукт отечественной интернет-индустрии с изначально иностранным происхождением). Давайте разбираться, что такое ЧСВ и с чем его «едят».

Итак, начало истории с ЧСВ положил американец Карлос Кастанеда, который в своих книгах описывал его как ощущение мнимого превосходства, выделение собственной важности и важности своих действий.

Находясь в указанном состоянии, человек не способен трезво оценивать себя и других. Часто ЧСВ перекликается с эгоизмом, но это не синонимы. Прогрессирующее ощущение собственной важности заставляет человека видеть только факты и события, связанные непосредственно с его «скромной» персоной. Такая личность искренне считает, что её мнение в любой ситуации имеет значение, а внесённый вклад гораздо больше, чем у остальных – только масштабы, только раздутое эго!

Кстати, Чувство Собственного Величия (так тоже может расшифровываться эта аббревиатура) не зависит от того, положительно вы себя выделяете или отрицательно – вы ведь всё равно выделяетесь, требуя тем самым повышенного внимания к собственной персоне. Объясним проще: неважно, считаете ли вы себя «пупом земли» или распоследним неудачником, поздравляем – у вас ЧСВ.

В русскоязычной части Всемирной паутины мемчики, шуточки о ЧСВ появились, как обычно, благодаря Луркоморью. Точную дату появления указать сложно, поэтому скажем лишь, что мем до сих пор в ходу, но уже не пользуется столь бешеной популярностью.

Для тех, кто «не в теме», Луркоморье – аналог Википедии, но ребята рассказывают об интернет-фольклоре, известных фразах и мемах, летающих по просторам сети. Высказаться может каждый, предоставив пруфлинк (ссылку на источник), чтобы все и каждый понимали, о чём идёт речь.

Мемы о чрезмерном чувстве собственной важности затронули таких персон, как Тимати, уверенного, что его чихвостят исключительно из зависти, Джеймса Кэмерона, Мицгола, Стивена Кинга, Никиту Михалкова и многих других.

Симптомы ЧСВ

Несмотря на то что раздутое или заниженное ЧСВ – это ненормально, к болезням его официально не причисляют. Тем не менее, специалисты, да и просто неглупые люди определили ряд симптомов, по которым можно узнать чсвшника в обычной жизни и в интернете.

Проявление чувства собственной важности встречается преимущественно у молодёжи, особенно у подростков (переходный возраст – весьма неприятная штука).

Такие ребята считают себя лучше других, демонстрируют излишнюю самоуверенность и по всякому поводу высказывают мнение. Нуждаясь в одобрении, общественном признании и популярности, они пытаются любой ценой добиться востребованности, часто не понимая, какими методами действовать.

ЧСВ-шник выглядит тщеславным эгоистом, что провоцирует конфликты с родными и друзьями – то есть, эффект совершенно противоположный тому, чего хотелось добиться. Разглядеть человека с ЧСВ легко – просто посмотрите на его поведение, манеру общения в некомфортной ситуации.

Прослеживается взаимосвязь между наличием чувства собственной важности и уровнем личностного роста. Люди с низким показателем развития личности меньше страдают от ЧСВ, но не потому, что природная скромность оберегает их от этого – им просто в голову не приходит, что они могут быть настолько важны. Обладатели высокого уровня личностного развития обычно, как правило, таким не страдают.

К проявлениям синдрома относят:

ЧСВ в интернете

Гипертрофированное ЧСВ проявляется в той или иной степени у всех пользователей сети. Есть те, кто молча ненавидят всех и вся, считая ниже своего достоинства словесно указывать «плебеям» на их место, есть пользователи, слишком забитые, чтобы участвовать в перепалках, поэтому публичное страдание – ещё один симптом.

Самый распространённый тип, о котором говорят все мемчики и видео. Желая показать, какие они крутые и уникальные, в сети ЧСВ-шники пытаются учить всех жизни, исправляют малейшие ошибки, намекая на глупость и необразованность собеседника, много критикуют и привлекают внимание к своей персоне.

Во время или после игры этот человек доказывает, что он «вытащил» катку, а после поражения в ход идут фразы: «Я пытался, как мог, но остальные участники команды – полнейшие неумёхи и ничтожества». Оправдывают поражение или пытаются поднять свою значимость в глазах других – не так важно, главное, что с такими людьми безумно неприятно иметь дело.

Не ЧСВ

Чувство Собственного Величия иногда путают с другими похожими проявлениями, которые не имеют с ним ничего общего.

Известных и популярных личностей, с завидной регулярностью выходящих на красную дорожку, не стоит с ходу причислять к армии ЧСВ-шников. Не все актёры и музыканты считают себя пупами земли, которым должен поклоняться каждый встреченным им человек. О человеке, прежде всего, говорят поступки.
«Опасные» профессии тоже не показатель. Внутренние отношения в таких организациях строятся на силе и определённой иерархии, которую нужно чётко соблюдать. Поэтому, привыкнув к такому положению вещей на работе, армейцы и работники правоохранительных органов нередко переносят эту особенность на «гражданку», где их не всегда воспринимают так, как им того хотелось бы.
Аргументированная критика для неподготовленного человека ужасна, непонятна, а потому реакция на неё бывает неадекватной. Особенно у творческих людей. Поэтому не стоит задавать вопрос, если не готовы услышать ответ. Отвечать на подобные вопросы, если заранее знаете реакцию, тоже не надо. Будьте умнее.
Глубокие познания в той или иной теме. Классический пример с кинокритиками, которые иногда делают карьеру на ЧСВ, состоит в том, что критик за время своей карьеры повидал многое, а потому удивить или впечатлить его очень сложно. Не стоит делать поспешных выводов о том, что он «возомнил о себе», если вашу очередную романтическую комедию, книгу или пьесу назвал тривиальной и ничем не примечательной. Выясните для начала, насколько человек компетентен в данном вопросе.

Как обуздать Чувство Собственной Важности: практические советы

Повышенные показатели

Чтобы снизить Чувство Собственного Величия, главное – необходимо понять, что есть проблема, которую нужно решать. Справедлива фраза о том, что первым шагом на пути решения любой проблемы является её признание. Затем выполните простой комплекс «для незапущенных случаев».

Возьмите лист бумаги, честно и вдумчиво изложите свои положительные и отрицательные черты.
Подумайте, насколько справедливо вы поступаете по отношению к другим.
Запишите имена тех, кому в последнее время делали больно, оскорбили или обидели словом или делом.
Попробуйте самостоятельно разобраться в причинах такого поведения.
Заключите пари на то, что в ближайшую неделю (месяц) будете вести себя иначе: реагировать, воспринимать (напомним, для формирования привычки психологи советуют повторять действие хотя бы 21 день). Старайтесь переключить своё внимание на окружающих, их интересы, заботы – посмотреть на них в новом свете.

Помните, мы говорили, что ЧСВ может быть избыточным и заниженным? Чем плох переизбыток этого чувства, понятно, но ведь и пониженное чувство важности является проблемой. Чтобы поднять показатели, запомните несколько советов.

Относитесь к себе с большей уверенностью и любовью.
Не бойтесь выражать собственное мнение, если человек откровенно не прав или вас не устраивает ситуация, но не делайте из мухи слона.
Ввязавшись спор, будьте убедительны, руководствуйтесь логикой и хорошими аргументами.
Заслужили похвалу от начальства? Не прячьтесь под стол, насладитесь моментом – вас ведь хвалят за дело.

Резюме

В Интернет-пространстве слово «ЧСВ» носит негативный характер: как для обычных пользователей, так и для геймеров. В социальных сетях аббревиатура служит поводом для шуток: сколько мемов связано с этой проблемой! Всегда смешно, пока дело не касается тебя или твоего окружения, а когда ЧСВ становится ближе, бывает грустновато и тяжело. Не вам – окружающим.

Симптомы следующие: слишком высокое желание выделиться, показать, что человек другой, непохожий на остальных. Неважно, будете вы громко рассказывать, кто здесь молодец, или показательно страдать.

Есть ряд ситуаций, в которых люди могут вести себя в точности так, как описано выше. Не стоит их смешивать.

Обуздать Чувство Собственной Важности сложно, но при желании можно. Обе формы (с заниженными, и с завышенными показателями) нуждаются в исправлении. ЧСВ влияет на адекватную оценку действительности, сужает круг интересов до исключительно собственных и пробуждает в людях крайний эгоцентризм.

Мы предлагаем выше несколько практических советов, как выйти из сложившейся ситуации, но они не сработают, если вы сами не захотите решить эту проблему. Дело за вами!

Здравствуйте, я — Надежда Плотникова. Удачно отучившись в ЮУрГУ на специального психолога, несколько лет посвятила работе с детьми с проблемами в развитии и консультации родителей по вопросам воспитания малышей. Полученный опыт применяю, в том числе, и в деле создания статей психологической направленности. Конечно, ни в коем случае не претендую на истину в последней инстанции, однако надеюсь, что мои статьи помогут уважаемым читателям разобраться с какими-либо трудностями.

Вы наверняка сталкивались с тем, что понимаете не все слова, многие люди используют особый жаргон, выражения и аббревиатуры, например ИМХО , ХЗ , ТП , SFS и многие другие. Одной из таких аббревиатур является ЧСВ. Что значит ЧСВ при общении в устной и письменной форме?
Так же, как и «СПС » сокращение «ЧСВ» является одним из самых популярных на просторах всемирной паутины. Я думаю, что каждый из нас сталкивался с людьми, которые очень много думают о себе, я имею в виду, что они пафосны , тщеславны, и выпячивают свою значимость в обществе. Аббревиатура ЧСВ расшифровывается, как «Чувство собственной значимости «, либо чуть по другому «Чувство собственного Величия «. Многие интересуются, что значит ЧСВ в ВК, что значит ЧСВ Вконтакте, поэтому мы рассмотрим эти вопросы более подробно.

ЧСВ — это люди, которые считают себя незаменимыми, стоящими выше других, они обуяны гордыней, высокомерием, самомнением. Говоря простыми словами у этих особей явно завышенная оценка

Впервые эту концепцию разработал ещё Карлос Кастанеда , который является автором множества книг на мистическую тему. Впрочем, действительно ли этот человек являлся магом или был мошенником не известно, хотя хайп по этому поводу не утихает и поныне. У него был персонаж, Дон Хуан, который якобы обучал его таинственным знаниям, так вот, он достаточно долго пытался объяснить тому самому Кастанеде, что значит ЧСВ .

В итоге, подытоживая всё, что поведал Карлосу Кастанеде, его собственный книжный герой, можно сделать вывод, что люди не рождаются с чувством ЧСВ , оно привносится в человека извне. Капиталистический строй устроен таким образом, что постоянно провоцирует человека покупать больше вещей, чтобы в глазах других людей иметь высокий статус, при этом его эго и ЧСВ находятся на подъёме. Единственный минус такого образа жизни, что такие особи отбрасывают, как ненужное всё то, что не удовлетворяет его ЧСВ ценности.

Подобное видение мира может завести достаточно далеко, ведь в некоторых случаях люди прибегают к суициду , поскольку это становится их единственным шансом поддержать свою ЧСВ. Нужно понимать, что подобное чувство имеет деструктивные корни и ничего помимо переоценки своих возможностей не несёт.

К сожалению в интернете стало всё чаще и чаще использоваться понятие ЧСВ, которое стало одним из популярных мемов . В сети имеется множество изображений, в которых высмеивается преувеличенная важность отдельных индивидуумов и значимость своей персоны, как в лице всего общества, так и отдельных людей.

Характеристики и симптомы ЧСВ :

Демонстративное поведение;

Преувеличение своей роли и своих талантов;

Исключительный эгоизм и чрезмерная самовлюблённость.

Если вы нашли у вашего знакомого подобные симптомы, то будьте уверены, что он болен ЧСВ . Яркой особенностью этого состояния заключается в его убеждённости, что все вокруг УГ (унылое г@вно), а он один д»Артаньян в белом. Либо все вокруг маргиналы и люмпены , а он сам исключительно образованный и разумный человек, хотя на самом деле он явно не отличается большим интеллектом, разумностью и прогрессивностью.

Особая «каста» людей с ЧСВ — это красивые девушки . Такие марамойки ощущают на себе взгляды множества мужчин, и они понимают, что вагина поможет заработать денег не вставая с кровати. Поскольку они стараются развивать только ту часть своего тела, которое отвечает за внешний вид, то их интеллект не поднимается выше пятилетнего ребёнка. Они знают только слова «Дай», «Хочу», «Мне надо» . Отрезвление к этим дамочкам приходит только после сорока лет, когда внешность у них оставляет желать лучшего, сколько бы штукатурки на себя не намазывай, а им на смену приходят новые топовые тян с такими же запросами. Поэтому у этих бывших фавориток зачастую приходят в голову мысли, о том, что лучше выпилиться , чем прозябать в забвении.

Как расшифровывается ЧСВ?

В самой аббревиатуре всего три буквы, так что запутаться сложно:

Ч — чувство.
С — собственной.
В — важности.

У тебя ЧСВ слишком высокое.
Непомерное ЧСВ, как у представителя «голубых кровей».
Твое ЧСВ может достать до Луны, а может даже и до Марса.
Машка, конечно, симпатичная зараза, но ЧСВ у нее до небес.

Ты ЧСВ.
Ну он и ЧСВ.
Паша на самом деле ЧСВ-дурак.

Что такое ЧСВ в ВК?

Это намек на ваше раздутое чувство важности, по мнению собеседника.
Человек негативно настроен и склонен к конфронтации.
Стоит прислушаться к замечанию, если оно звучит не первый раз и от разных людей.
Вполне допустимо как-то едко ответить.

Почему все не любят ЧСВ?

Иногда собеседник действительно «сильно много на себя берет». Здесь стоит запомнить пару вещей:

Человек ведет себя ровно так, как ему позволяют себя вести.
Если знакомый или знакомая пытается вытереть об вас ноги, значит, раньше вы активно подставляли себя в качестве этой самой тряпки.
Сбить спесь с человека очень сложно. Самомнение может вырасти за пару дней, а потом даже долгие месяцы работы не помогут исправить ситуацию. Сдувать эго — сложная задача.
Лучше всего прекратить общение, хоть на время. Если даже этот шаг не возымел эффекта и не сработал в качестве контрастного душа — для вас человек потерян, 100%. Может, для общества тоже.

Незаурядные интеллектуальные способности.
Литературный талант.
Многочисленные награды в области науки или спорта.
Признанный музыкальный талант.

Как реагировать на замечание?

Давно ли вы знаете человека?
Собеседник всегда давал только хорошие советы?
Вам кажется, что она заботится о вашем благополучии?
Сами ощущаете, что в последнее время в поведении что-то изменилось?

Непомерное ЧСВ у парня

Продемонстрируйте человеку, что он не вершина мира. Желательно, при людях и желательно так, чтобы этот «контрастный душ» партнер не связывал с вашей персоной.
Обзаведитесь новыми контактами, покажите, что не испытываете какой-то физической или психической зависимости.
Поучаствуйте в паре проектов, продемонстрируйте результат, добейтесь публичного признания собственных успехов. Все очень вариативно, в зависимости от сферы деятельности и увлечений.
Начните вести себя абсолютно так же, не обращая внимания на чувства и потребности партнера. Хуже уже не будет.

Что значит «ЧСВ» — расшифровка

Аббревиатура ЧСВ не так уж сложна, как это может показаться:

Расшифровывается как «чувство собственной важности ».
Употребляется в сети. Но в последние пару лет сокращение стали употреблять и в реальной жизни.
Указывает на раздутое самомнение человека, его непомерное эго, несоответствующее реальным возможностям.
Не несет в себе никакого оскорбления, но обычно говорит о том, что собеседник не прочь развить конфликтную ситуацию.

Видео о значении ЧСВ

Взять бы в руки лопату и поправить им всем корону!

Нередко это желание может возникнуть в отношении людей, чей эгоизм, гордыня и напускное величие настолько зашкаливают, что терпеть уже становится практически невозможным. Справедливости ради стоит сказать, что проявления ЧСВ (чувства собственной важности) в той или иной степени свойственны каждому человеку, но есть индивиды, у которых эгоцентризм, желание самоутвердиться за чужой счет и неуемный самопиар достигают просто клинических масштабов.

Признаки ЧСВ

Самым ярким проявлением ЧСВ можно назвать обычное хвастовство, с помощью которого человек пытается привлечь к себе внимание, «набить» цену, вызвать восхищение или зависть. Сюда же можно отнести понты, чья симптоматика очень схожа с хвастовством, но имеет более сильный «налет» дешевой крутизны. Человеком движет желание показать всему миру свой статус: полезные знакомства, дорогие и стильные вещи, принадлежность к какому-то высокому сообществу или группе и т. п. Самым верным и правильным способом ослабить симптомы «звездной болезни» – равнодушная реакция окружающих.

Еще одним признаком завышенного ЧСВ является самоутверждение за чужой счет. Сюда относятся надменность, чванство, зависть, спесь, порицание, неконструктивная критика, высокомерие – в общем, весь тот набор приемов, помогающих в стремлении обесценить качества и достижения других людей, а значит выгоднее смотреться в собственных глазах.

Печальные последствия

Гипертрофированная потребность в признании и любви общественности заставляют некоторых людей прибегать к таким способам, как навешивание ярлыков, выпячивание своих реальных и мнимых положительных качеств, показное милосердие и т.д. При этом бедняги на «обслуживание» созданного ими образа тратят такое количество внутренней энергии и сил, что рано или поздно это приводит к неврозам из-за постоянного стремления не потерять статус, не уронить себя, соответствовать. А сколько таких примеров «падений с Олимпа», у подножия которого их ждали насмешки, позор и забвение?

Также к проблемам завышенного ЧСВ относят обыкновенную ложь. Такие люди часто лгут, причем делают это скорее по инерции, по привычке. Они настолько привыкли к тому, что путем лжи «добились» некоторых жизненных привилегий, что продолжают делать это на автомате, даже когда совсем не требуется. Все это, естественно, не может не сказаться на отношении со стороны окружающих.

Общество никогда не приветствовало тех, кто достигает его внимания таким образом. Тех, кто сегодня «выпрыгивает из штанов» чтобы откусить кусок пожирнее от признания и любви публики, завтра будут ждать разочарование и презрение. А вот искренность, естественность, самобытность всегда будут в почете у действительно думающих и здравомыслящих людей (очень хочется надеяться, что таких большинство).

Как избавиться от ЧСВ

Главный секрет настоящей внутренней свободы заключается, если не в полном искоренении чувства собственной важности (что не у всех получается), то хотя бы в минимизации его проявлений.

Что такое ЧСВ ВКонтакте?

В последнее время при общении в интернете часто используются слова и выражения понять которые довольно трудно, одно из таких выражений – это ЧСВ. Что такое ЧСВ в ВК? На самом деле это понятие говорит о чувстве собственной важности, к сожалению завышенное чувство собственной важности является актуальной проблемой в современном обществе.

Происхождение выражения чсв

Для начала необходимо понять откуда появилось такое понятие как ЧСВ, как оно попало в разговоры и переписки многих людей. Ввел его известный американский писатель, ученый-эзотерик Кастанеда. И именно из его творений люди впервые узнали о таком понятии как ЧСВ.

Но как множество людей могли узнать об этом понятии? Неужели этот учёный был настолько популярен? Нет, всё не так. Действительно не так много людей читают научные и эзотерические работы. Популяризировалось наше ЧСВ, благодаря множеству интернет ресурсов распространяющих информацию о различных мемах и интернет феноменах. В частности всё это благодаря русскоязычной викиэнциклопедии “Луркоморье”.

Значение ЧСВ

Аббревиатуру ЧСВ можно расшифровать как: Чувство Собственной Важности. Применяется данная аббревиатура зачастую на различных форумах или в социальных сетях чтобы показать человеку что он слишком много о себе возомнил. Проблема завышенной самооценки и чувства собственной важности, достаточно распространена в современном мире.

Но почему людей с завышенной самооценкой мы гораздо чаще встречаем на просторах интернета, чем в реальной жизни? Дело в том что интернет даёт таким людям прекрасную возможность заявить о себе максимально широка. Здесь они могут говорить и делать что угодно, но никто не сможет пресечь их выходки. Такая безнаказанность и привлекает людей с завышенным ЧСВ на просторы интернета.

Примеры использования

Чтобы лучше понять значение выражения ЧСВ, давайте рассмотрим его применение на конкретных примерах.

Да как ты можешь спорить с тем что я говорю? Всем известно, что это так и есть! – Да у тебя завышенное ЧСВ братан, если ты так говоришь, это не значит, что так и есть на самом деле.
Эй, девочка, освободи-ка мне место! Я старше мне нужно сидеть, а ты молодая постоишь! – Женщина да у вас завышенное ЧСВ, я между прочим всю ночь работала и мне тоже нужно отдохнуть.
Сейчас я всё порешаю! Как я скажу так и сделаете! – А почему мы должны делать как ты сказал? Да у тебя завышенное ЧСВ чувак!

Заключение

После прочтения данной статьи у вас больше не должен возникать вопрос — “Что такое ЧСВ ВКонтакте?”. Мы разобрали что ЧСВ это – Чувство Собственной Важности, а также увидели на примерах как можно использовать ЧСВ в разговоре.

Как накрутить сообщения ВК бесплатно

Мечтали вы о популярности? А о зависти со стороны окружающих? Многие полагают, что чем больше человек с вами общаются, тем больше вы кажетесь интересным. С этой целью многие пользователи накручивают личные сообщения в социальной сети ВКонтакте.

Что только не делают, чтобы завоевать признания в обществе… Существует и другая часть людей, которая осуждает накрутку. Попробуем разрешить данный конфликт между двумя воюющими лагерями, поэтому цель нашей статьи: «Как накрутить сообщения ВК бесплатно».

Зачем накручивать сообщения?

Как было отмечено выше, накрутка производится для «мнимой популярности» и поднятия ЧСВ. Да, именно мнимой. Вы не станете привлекательнее, умнее и заманчивым в реальной жизни, если будете иметь полмиллиона накрученных сообщений. Пожалуйста, помните об этом. Также читатели заметили странную аббревиатуру – ЧСВ. «Что это значит?», — спросят они. Объясняем! ЧСВ – чувство собственной важности, плохое качество человека.

Вторая причина – коммерческая. Пользователи, желающие подзаработать чуть-чуть денег, накручивают сообщения на аккаунте, а позже продают его другим. Согласитесь, это необычный способ заработка.

В-третьих, чем больше у тебя подписчиков и чем больше сообщений в день тебе присылается, тем больше шанс, что ваша страница будет верифицированной. Что такое верификация? Это обозначение в социальной сети, в данном случае, ВКонтакте использует голубую галочку.

Благодаря ей, пользователи понимают, что ваша страница является официальной, не фейковой. Обычно страницы верифицируют популярные люди, блогеры, артисты, журналисты и другие известные персоны.

Также многие специально засоряют свою страничку огромным количеством сообщений от других пользователей, а потом отвечают на них, знакомятся с новыми людьми. Остальные же накручивают «месседжи» для любопытства и азарта, ведь интересно посмотреть на большую цифру на вкладке, которая с каждым разом увеличивается.

Как накрутить сообщения ВК бесплатно

Итак, вы решились заняться накруткой. Первый способ заключается в применении групп сайта ВКонтакте. Обычно пользователи используют «Засори ЛС» или «Лайк-Тайм». Все, что вам нужно сделать – написать на стене сообщества сообщение, похожий на этот пример: «Пожалуйста, засорите личные сообщения.

С меня лайки и взаимный месседж». Рекомендуем скопировать эту запись с помощью нажатия клавиш Ctrl+C, а дальше просто вставлять ее в комментарии и в обсуждения группы. Далее вам всего лишь остается ждать наплыв новых личных сообщений.

Еще одним способом является биржа заданий для социальных сетей. Одним из таких сервисов является VK Target. Его суть работы проста. После несложной регистрации вам будут доступны задания, одни из таких – поставить лайк определенному человеку, сделать репост или поставить лайк. Взамен другие люди тоже будут совершать те действия, следовательно, и количество сообщений тоже будет расти.

Применение сторонних сервисов для накрутки

Есть способ – применение одного сайта – TakeFriend. ru. С помощью него можно приумножать себе количество лайков и сообщений. В сервис включена и доска заданий. Выполняя их, взамен тоже можно получить виртуальные «призы»: сообщения, комментарии, репосты, вступления в группы и лайки. Скриншот сайта представлен ниже.

Наиболее эффективным способом является использование специального бота. Примером является сервис BroBot. Советуем использовать именно его, ведь в нем можно на время активировать бесплатный пакет.

Если вы хотите достичь максимального результата, то вы можете воспользоваться одним из платных тарифов, подходящих именно вам. Также, благодаря ему существует возможность привлекать в свою группу новых подписчиков и накручивать лайки.

Конечно, приглашать подписчиков лучше белым методом. Заказывайте рекламу на площадках, ведь тогда подписчики будут вступать по собственному желанию, а не по нужде.

Хорошим конкурентом данному сервису является сайт vto.pe. Помимо «БроБота», он полностью бесплатен, а также есть возможность накручивать лайки в других социальных сетях: Спрашивай. ру, Одноклассники, АСК.фм, Instagram и даже YouTube.

Кстати, накрутка просмотров сможет вам сыграть вам на руку. Все знают, что чем больше пользователей просмотрело видео, тем больше денег получит автор, если он подключился к партнерской программе.

Но способ считается нечестным. Вы не заработаете много, если ваши видео будут неинтересными и плохого качества. Если вы имеете канал, то прикладывайте душу и ваше безграничное творчество в создание контента. Тогда у вас все обязательно получится, и вы станете популярным без каких-либо накруток.

Если вы желаете добавить в собственную группу новых подписчиков, то попробуйте воспользоваться сайтом «Socelin», использующий оригинальный метод привлечения на основе интересов, места жительства, пола и других параметров.

Привлекая аудиторию, вы увеличивайте шансы на стабильный заработок. Ведь если вы сделайте ваше сообщество рекламной площадкой, то сможете увеличить спрос на товар или услугу, что будет полезно вашим клиентам.

Заключение

Дорогие читатели сайта, наша статья подошла к концу. Мы будем счастливы, если ответ на вопрос, как накрутить сообщения ВК бесплатно, был вам понятен! Перечислим итоги:

У каждого пользователя своя цель, чтобы сделать свой личный аккаунт популярным: верификация, известность, банальный интерес или торговля виртуальными страницами.
Набрать большое количество непрочитанных сообщений вам помогут паблики ВКонтакте, созданный для данной цели, а также различные интернет-сервисы.
Именно сторонние сайты помогут вам достичь наиболее лучшего результата. Благодаря платным пакетам возможно достичь желаемого числа сообщений быстрее, благо, цены невысокие.

Помните, что сообщения не сделают вас желанным в реальной жизни. Если же вы хотите им стать, то работайте над своими недостатками, будьте веселыми и никогда не унывайте. Тогда люди сами к вам потянутся! Ставьте цель в жизни, спасибо за внимание!

самые быстрые и простые способы накрутить много сообщений ВКонтакте

Социальная сеть Вконтакте является самой популярной на территории Российской Федерации и стран СНГ. В многочисленных сообществах и блогах публикуется огромное количество контента на самые разные темы — от нарезок смешных моментов до документальных фильмов и познавательных роликов. Чаще всего пользователей интересуют возможности увеличения активности в личных блогах и группах для поднятия ее популярности. Однако накрутка лс вк также часто интересует пользователей социальной сети. Большое количество непрочитанных личных сообщений позволяет поднять чувство собственной важности владельца, а также показать его популярность с целью перепродажи. Существует множество различных способов получить много сообщений в вк.

Бесплатные методы накрутки

Для увеличения количества сообщения Вконтакте не обязательно сразу платить деньги за данную услугу. Для начала следует обратить внимание на бесплатные возможности.

Друзья, знакомые и случайные люди

Накрутить сообщения в вк таким способом достаточно легко. Необходимо искать в социальной сети случайных людей, отправлять им какие-то сообщения, дожидаться ответа и просто игнорировать. Можно упростить процесс и попросить знакомых написать вам что-то с основного или дополнительного аккаунта и так же проигнорировать. Способ малоэффективный, но пару десятков уведомлений набрать можно.

Засори ЛС

Накрутка сообщений вконтакте требуется достаточно большому количеству пользователей по известным только им причинам. Благодаря этому появились сообщества с названием, вынесенным в заголовок. После перехода в одну из подобных групп нужно внимательно посмотреть стену. На ней другие пользователи оставляют микро-заданию. Обычно просят поставить лайк или написать комментарий под определенной записью, а в качестве награды предлагают засорить ЛС.

Накрутка при помощи ботов

Народными умельцами довольно давно был создан еще один бесплатный способ, при помощи которого осуществляется накрутка уведомлений вк. Для этой цели достаточно перейти по ссылке. В новом окне будет опубликован код, который необходимо скопировать. После этого пользователю нужно открыть свой аккаунт и консоль браузера (по умолчанию клавиша F12). Скопированный код требуется вставить в консоль и запустить его работу. Автоматически начнется увеличение количества сообщений. Стоит учесть, что программисты социальной сети Вконтакте постоянно латают исходный код социальной сети, поэтому функциональность способа может пропасть в любой момент.

Платные методы

Бесплатные способы хороши, но они требуют достаточно долгой работы для достижения необходимого результата. Быстрая накрутка сообщений в вк возможно при помощи различных специальных сервисов и программ. Их особенность заключается в быстром увеличении количества уведомлений и плюсиков рядом с разделом «мессенджер». Стоит поближе познакомиться с частью из них.

Cashbox

Известная биржа для составления разнообразных заданий за небольшую цену. Пользователю необходимо пройти короткую и простую процедуру регистрации. Следующий этап — подтвердить создание личного кабинета и авторизоваться на сайте. Затем необходимо непосредственно создать задание и пополнить счет удобным способом. Заказчик указывает категорию (накрутка в вк сообщений), указывает более подробную информацию (ссылку на сам аккаунт) и выставляет стоимость выполнения. После запуска задания сообщения постепенно начинают добавляться. Пользователю остается проверять выполнение и оплачивать выполненную работу.

SMMLaba

Известнейший сервис, который используется клиентами для увеличения активности во всех известных социальных сетях. Клиентам предлагается создать личный кабинет при помощи аккаунта из любой известной соцсети или пары электронная почты/пароль. Затем нужно пополнить счет с запасом или для выполнения конкретной задачи. Далее можно воспользоваться простой инструкцией:

Выбрать конкретную категорию.
Выбрать конкретную задачу, накрутка беседы вк находится в категории «прочие услуги»
Выбрать подходящий тариф и заполнить небольшую заявку для начала работы сервиса
Дождаться начала выполнения поставленной задачи, при необходимости повторить шаги 1-3.

Чего стоит остерегаться

Любое желание сделать свой аккаунт, блог или сообщество популярнее сопровождается определенными рисками. Основной из них — вероятность получить некачественную услугу в связи с использованием ботов для раскрутки. Больших проблем это не принесет, но реальные подписчики или потенциальные покупатели могут увидеть, что аудитория накручена, что может уменьшить доверие к автору. Еще один риск — получить бан личного аккаунта или сообщества. Происходит это в случае превышения определенных лимитов. Не рекомендуется раскручивать только что созданные аккаунты, лучше дать им «отлежаться» какое-то время. Также у социальной сети имеются определенные лимиты на совершение определенных действий. ПРи большом количестве подписок или лайков за короткое время можно получить бан, сбросить который не получится.

Как и в любой сфере, сфера накрутки сообщений содержит большое количество мошенников. Самый популярный способ обмана — предложение пользователям скачать программу или зарегистрироваться в сервисе не совсем обычным методом — отправив сообщение на короткий номер или указав логин и пароль для входа в личный кабинет социальной сети. Ведет это либо к списанию денежных средств или утере аккаунта. По этой причине следует внимательно подходить к выбору сервиса по раскрутке.

Безопасность OAuth3 / Хабр

Данная блогозапись на хабр прежде всего обусловлена появлением

«Ключницы»

— хороший повод

связатьиперевестинакопленное

У нас в программе: вольный пересказ спек OAuth3, слабые стороны и Threat Model, ~~0day на хабре~~трюк с аутенфикацией.

OAuth3 это просто

Длинный, но правильный путь изучить его.

Для ленивых я опишу своими словами Authorization Code Flow как самый распространенный и безопасный, aka

Server-Side

Ключевые понятия — Клиент(website/online game/app), Юзер(you), Провайдер(facebook/vkontakte/google), Код(code) и Токен(access_token).

Клиент посылает Юзера — «авторизуй меня для доступа к твоим ресурсам». Юзер идет по ссылке к провайдеру, смотрит что от него требуют — scope параметр — жмет Разрешить. Далее Провайдер редиректит его назад на указанный redirect_uri на домене Клиента со следующими параметрами:
code — идентификатор Юзера у Провайдера, который нужен Клиенту чтобы получить Токен
state — то же значение что было передано на начальный URL. используется для защиты от CSRF и для удобства.

Код из себя не представляет никакой ценности для Юзера(и User-Agent соответственно) т.к. с его помощью нельзя совершать запросы API и нужен он лишь для одной цели — получения Токена.
Для получения Токена Клиент производит запрос на определенный эндпоинт, передав client_id, client_secret, code, redirect_uri по которому был получен код — таким образом Провайдер уверен что это нужный Клиент и по Коду он отдает Токен того самого Юзера. Как видите ни Юзер, ни User-Agent и клиентские скрипты не увидили настоящий Токен. Его знают только Клиент и Провайдер — в идеале.

Дальше Токен используют для совершения API запросов, впоследствии его можно рефрешить (для этого вместе с Токеном возвращается refresh_token).

Threat Model или Я Знаю О Чем Вы Подумали

Длинный, но правильный путь безопасно пользоваться OAuth.

Здесь же отмечу:

1. А что если я подставлю такой redirect_uri который будет вести на свой сайт а потом использую этот Код сам для аутенфикации?

Все redirect_uri должны находится на домене Клиента. Часто разрешен еще домен Провайдера. Ваша ссылка вернет redirect_uri_mismatch.

2. ОК а что если я найду такое место на сайте Клиента, которое сольет мне Код? Может открытый редирект вида site.com?url=http://outsite.com или hot-linked картинку которая сольет реферер?

Каждый Код привязан к тому redirect_uri для которого он был выпущен и для получения Токена Клиент передает «правильный» redirect_uri. Если ваш Код был выпущен для clientsite.com/leak_referer а Клиент при получении Токена отошлет clientsite.com/facebook_callback то Провайдер не отдаст Токен.

3. А можно ли как то слить Код передав правильный redirect_uri?

Нет, т. к. любая правильная реализация Клиента обязана сразу редиректить на другую страницу после получения Кода — так что Код не виден даже в истории браузера.
Даже если вам удалось достать код для правильного redirect_uri то т.к. он уже был 1 раз использован он больше не активен.

4. Допустим у меня есть Код для моего аккаунта в соц сети выпущенный для правильного redirect_uri. Что будет если я заставлю посетить эту ссылку Васю?

В таком случае сайт Клиента подумает что ваш аккаунт в соц сети принадлежит Васе. И присоеденит его. Чтобы типичного CSRF не происходило Клиент обязан сохранять рандомное значение state в сессии/куке и проверять по возврату на колбэк на соответствие. Хотя, так почти никто не делает (точнее не делали).

Реальность

FB Reply Attack

Facebook Connect уязвим для классической

Replay attack.

Демонстрирует пункт 3 — после одного использования кода он еще может быть использован для аутенфикации в течение 60-80 минут — стандартное expire_in токена. Реплай атака в чистом виде.

Допустим, на сайте нашли XSS — примерно такой инжект поможет вытащить код для правильного redirect_uri через document.referrer фрейма.

Репорт сделан, скоро исправят. Ну как скоро, месяца три, enterprise же

Hijacking Account

Самая частая уязвимость, присутствует например на хабре

— об этом ниже. Нарушается пункт 4.

Если вы видите в запросе state не спешите сдаваться. Что хабр, что digg.com не видели разницы между a12b6467c3fb385e237109502277ab26 и heyman0day123123

VK redirect_uri

Реализация сделана по каким-то древним манускриптам — отсутствие проверки для какого redirect_uri был выпущен Код это грубое нарушение пункта 3.

Смотрите,

вот ссылка

Жмите, не бойтесь, и откройте Network Panel. Видите запрос?

Реферер слился, код слился — теперь его можно использовать чтобы зайти в ваш аккаунт через ваш вконтакте(если вы его привязали) уже про правильному redirect_uri.

Репорт сделан неделю назад, ответов от живых людей и от ботов не поступало.

misc

Если вы используете Implicit Flow — т.е. получаете access_token от юзера напрямую, то нет никаких гарантий что этот токен принадлежит текущему юзеру. Он мог его просто украсть через вредоносного Клиента, и использовать чтобы попасть в аккаунт какого-то юзера на вашем сайте.

Обязательно проверяйте, был ли выпущен данный токен для вашего client_id.

Так же OAuth3 не дает никаких гарантий что пользователь дал вам те разрешения что вы запросили на этапе авторизации в параметре scope. Он мог просто удалить их — в итоге вы должны на колбэке проверить разрешил ли он что вы запросили.

Если на сайте найдена XSS то есть легкий способ украсть кучу access_token-ов. Возьмите authorize URL который сайт использует для facebook и замените response_type=code на token. Осталось вставить этот URL во фрейм, дождаться возврата токена в ссылке вида callback#access_token=123, срезать токен и слить его. Спамьте на здоровье!

0day на хабре?

Тот же эксплоит работает и для facebook/google только сложнее получить redirect_uri с кодом без использования его — нужен NoRedirect+FF

Поэтому демо на VK.

~~дяденька не бань~~

UPD:

уязвимость исправили

1. У вас не должно быть привязанного VK. Авторизуйтесь oauth.vk.com/authorize?response_type=code&client_id=3110645&redirect_uri=http%3A%2F%2Fhabrahabr.ru&scope=offline&display=page
2. Вас вернуло на habrahabr.ru/?code=CODE
3. Заставьте другого хабраюзера посетить habrahabr.ru/social/callback/vkontakte/?code=CODE&state=whogivesafuckaboutstate можно подкинуть саму ссылку, но лучше спрятать в img или iframe и тд. Если он залогинен на хабре ваш ВК привяжен к его хабрааккаунту.
4. Логинимся через ваш ВК в его хабрааккаунт, меняем его аватар на nayncat.

Мораль

Вконтакте

: перестаньте игнорировать письма в Поддержку, либо попросите ваших разработчиков снизойти поговорить с простым смертным. А еще введите bounty program (sarcasm: есть риск разориться на ней).

Хабр

: рекомендую выключить Ключницу на время и пофиксить уязвимость путем правильной проверки ‘state’ со значением из cookie/session.

Road to Hell короче. Вы можете присоедениться к разработке принципиально нового стандарта с нескучными токенами — OAuth3.a (Charm — Provider). Печенек, правда, нет.

Egor Homakov (@homakov) & isciurus #RT pls

UPD2:
Хабр закрыл уязвимость, вконтакте добавил проверку redirect_uri для всех новых приложений и нотификацию для старых, facebook «We will only allow authorization codes to be exchanged for access tokens once and will require that they be exchanged for an access token within 10 minutes of their creation » и «After reviewing the bug details you have provided, our security team has determined that you are eligible to receive a bounty payout of $2,000 USD», я опять поднял чсв, люди строят предположения о перспективах bounty vk.

VL Walkinshaw + VK SS Group A + Corvette Stingray + BMW E36 M3

Автор: Марк Хиггинс

Дата: 05. 06.2018

Горячие новости: VL Walkinshaw + HDT VK Group A + Corvette Stingray + BMW E36 M3

1988 HOLDEN COMMODORE VL GROUP AS SS WALKINSHAW

Продано: 340 000 долларов США
Burns & Co

Вот первый коммодор группы А, живущий после смерти Брока, из сарая давнего приятеля Холдена, HSV Тома Уолкиншоу.Он соответствующим образом окрашен в цвет Panorama Silver с почти такой же тканевой отделкой. Этот абсолютный жемчуг из семейной коллекции Д’Альберто не зарегистрирован и проехал всего 1308 км. Он носит номер сборки 333, что соответствует другим моделям Gp A SS, выставленным на продажу на том же аукционе. Неудивительно, что торги за этот кусок австралийской мускулистой истории были такими ожесточенными.

1985 HOLDEN VK COMMODORE SS GROUP HDT

Продано: 305 000 долларов США
Burns & Co

Еще одной рекордной ценой стал этот великолепный VK Blue Meanie 1985 года выпуска. Интересно, был ли покупатель лучшей работы Брока тем же человеком, который схватил другую Группу А, выставленную на аукцион. Было бы неплохо держать их в загоне. Как и все модели SS, принадлежащие D’Albertos, он имеет номер сборки 333 и проехал всего 2300 км. Вам будет трудно найти лучший пример.

1986 HOLDEN COMMODORE HDT VL SS

Продано: 155 000 долларов США
Burns & Co

Очередной вздор о цене последнего коммодора СС Броки.Это 333-й из 500 построенных автомобилей, которые принадлежат семье Д’Альберто с момента создания, и на его счету всего 5309 км. Лакокрасочное покрытие постоянного красного цвета безупречно, а серый салон чист, как свисток. Конечно, это много денег, но, поскольку это последний завод GM в Броке, у него отличная родословная и история.

1996 БМВ Е36 М3

Продано: 22 000 долларов США
Шеннон

Знаменитый BMW M3, особенно в кузове E36, — это доступная современная классика с огромным количеством поклонников. E36 — первая M3, которая будет продаваться здесь, и это красивое купе выполнено в редком сочетании цвета Boston Green со светло-серым салоном. Он оснащен фирменной рядной шестеркой объемом 3,2 литра, к которой прикручена шестиступенчатая механическая коробка передач. Предложенный без резерва, он в конечном итоге ушел за дверь по выгодной цене.

1969 ШЕВРОЛЕ КОРВЕТ СКАТ

Продано: 69 000 долларов США
Burns & Co

Трудно пройти мимо большого блока 427 Chev с прикрученной к нему четырехступенчатой механической коробкой передач.Особенно в Ветте 69-го года. Эта красавица проехала всего 30 852 мили и находится в семье Д’Альберто с 1971 года. За свою жизнь она перекрасилась в черный смокинг, соответствующий оттенку салона, и была преобразована в праворульный автомобиль.

Что движется и трясется:

ТОЙОТА СУПРА

Будучи звездой оригинального фильма «Форсаж », хотя и в сильно модифицированном состоянии, многие купили Toyota Supra и подражали модификациям автомобиля из фильма.

Таким образом, поиск беспроблемного твин-турбо может оказаться долгим путешествием, но если вы найдете подходящую машину, вы будете вознаграждены мощным, привлекательным, почти пуленепробиваемым, удобным двухдверным купе, на котором приятно кататься на лодке.

Цены на

Supra в последние годы взлетели до небес, и некоторые просят около ста тысяч за твин-турбо. В то время как вы или я могли бы не платить столько за один, кажется, что кто-то будет, или близко к этому, что означает, что если вы можете найти хороший, оригинальный дешевый, вы смеетесь.

Журнал Unique Cars Value Guides

Продайте свой автомобиль бесплатно прямо здесь

ПОДПИСАТЬСЯ НА ЖУРНАЛ UNIQUE CARS
Получайте ежемесячные новости, обзоры и истории о величайших автомобилях и умах автомобильного мира.

Что такое проблема со здоровьем человека. Видео о значении PSI. Накачанный ПСВ в соцсетях

В мемах, постах и комментариях ВКонтакте часто встречаешь аббревиатуру ЧСВ. Что это такое и почему эта аббревиатура так популярна среди молодежи? Мы расскажем, научим правильно понимать и применять это сленговое выражение в повседневном общении в ВК.

Извините, что?

Что такое PSV

В самой аббревиатуре всего три буквы, так что запутаться не получится, как ни старайся:

Н — чувство
С — собственный
В — важность.

Также ЧСВ иногда расшифровывается как «Чувство собственного величия», оба значения верны. Это сленговое выражение никак не может быть переведено с английского, потому что произошло от сокращения русских слов.

Я узнал, что я отсталый мамонт, умерший от старости (читай от невежества) своей смертью и вмерзший во льды. Ведь редукция используется в ВК уже лет 5-7 и достаточно активно. Раньше оно более-менее корректно использовалось в повседневной речи: «Вы заметили, что у вас резко увеличился ЦСЖ? 🙂 «Что вы имеете в виду сейчас?

А теперь оглянитесь вокруг, аббревиатура стала определением, своего рода ругательством. Кстати обидно. «Ты — ЧСВ!» Определение осталось прежним, но сокращение превратилось в обзывание. Речь идет о завышенном самомнении на пустом месте. Стоит ли прислушиваться к критике?

ЧСВ в ВК

В одноименной соцсети аббревиатура сейчас очень популярна, особенно в некоторых сообществах, где царят мемасики, демотиваторы, разные фокусы… То и дело в комментариях проскальзывает знакомая фраза, намекающая на низкое поведение противник.Намек на чувство значимости, разросшееся до непривычных размеров, печалит, заставляет взглянуть на себя. Стоит ли оно того?

Большинство адекватных пользователей на такие комментарии не реагируют. Стоит ли тратить калории на то, чтобы объяснять и отстаивать собственную точку зрения человеку, которого вы не знаете и который вас вообще не слышит? Первое впечатление о человеке – самое главное. Если в контакте о вас незнакомец сказал, что «Вы, гражданин, ЧСВ», то рекомендую отпустить его в лес.Ибо каждое ваше дальнейшее действие будет трактоваться как попытка сохранить чувство собственной значимости, ну и та же защита вашей личной чрезвычайной ситуации.

Почему не любят ЧСВ в ВК?

Чаще всего переписка с человеком с завышенным чувством собственной значимости является игрой в одну сторону. Конечно, если проблема эго реальна. Доказать им что-то нереально. У делового человека есть своя точка зрения, которую не пробьёт ни один, даже самый логичный аргумент.Даже если ты Лев Толстой, для них ты будешь просто…. Ну, вы поняли идею.

Можно сделать простой вывод:

В настоящее время CHSV — это просто словосочетание. Вас пытаются не столько оскорбить, унизить, а задеть. Просто ваш собеседник не прочь оказаться в эпицентре конфликта и подпитаться вашей энергией. Отпустите неадекватность с миром и выпейте чаю с печеньем.

Среди тысяч актуальных мемов в Интернете вы наверняка сотни раз встречали шутки про завышенный ПСВ.Это сленговое выражение чаще всего используется в молодежной среде.

Сегодня вы узнаете, что это значит для человека! Поговорим о расшифровке слова и других интересных подробностях, связанных с этим мемом.

В каком состоянии

Начнем с самого интересного — с расшифровки.

ПСВ — чувство собственной важности … Кстати, некоторые пользователи расшифровывают это как чувство собственного величия, что тоже можно считать правильным вариантом.К сожалению, в наше время этот недуг встречается у многих, и особенно у молодых людей.

Подросток, у которого ПСВ зашкаливает, требует к себе особого отношения. Он совершенно искренне считает себя лучше других парней, наделен уверенностью в себе и на все имеет свое мнение.

Но на самом деле значение таких молодых людей сильно преувеличено. Кстати, если кто-то пошутил по поводу того, что у вас завышенный PSI, знайте, это ни в коем случае не комплимент!

Нам кажется, что людей, которые то и дело потакают чувству собственной важности, можно назвать эгоистами!

Как переводится ЧСВ

Это просто сленг, который происходит от аббревиатуры слов Чувство собственной важности и никак не переводится. Другими словами, это просто аббревиатура, которая абсолютно ничего не значит на английском языке.

Подростковый ПСВ

ПСВ чаще всего используется в молодежном сленге, и не зря. Переходный возраст напрямую связан с появлением чрезмерного (и даже болезненного) чувства собственной важности.

Просто молодым людям нужно одобрение окружающих, им нужно любой ценой заслужить уважение сверстников. Вы очень хотите быть популярным и востребованным. ЧСВ ребят набирает обороты, но, к сожалению, результаты их очень разочаровывают.

Подросток с завышенной самооценкой кажется тщеславным и эгоистичным. И это, как правило, отталкивает от него окружающих.

Даже друзьям и родителям ребенка тяжело терпеть такое положение вещей, поэтому назревают конфликты и ссоры. Отношения дают трещину, и подросток начинает страдать.

На первый взгляд, ЧСВ — это просто забавный мем и связанные с ним едкие шутки. Но если копнуть глубже, то становится понятно, что это очень негативная черта характера, от которой нужно избавиться как можно скорее.

Завышенный ПСВ

Выявить людей с завышенным СЧЛ очень просто! Достаточно посмотреть на их манеру общения, поведение с друзьями и близкими и хотя бы раз увидеть человека в неудобной для него обстановке. Все сразу становится понятно.

Социальные сети ввели в язык множество терминов, одним из которых является ЧСВ. Сложно узнать, что это значит и где применяется, если человек не знает о расшифровке, а рассказать ему некому.Интернет-сленг использует аббревиатуру ЧСВ только для обозначения обиженной сверхважности оппонента.

Что означает ЧСВ и как расшифровывается

Впервые сочетание ЧСВ появилось в русскоязычном интернете среди поклонников Карлоса Кастанеды, испанского эзотерика и мистика. Он описывал в книгах нравственное возвышение над другим человеком в словах, а не в делах. Заинтересовала аббревиатура ЧСВ — что означает аббревиатура? Эти три буквы раскрываются как «важность».Иначе ПСВ можно назвать самооценкой, от которой сложно избавиться.

В связи с тем, что человек постоянно высоко оценивает свою значимость и достоинство, это отнимает много времени, мешает трезво взглянуть на ситуацию и принятие решений. Согласно книгам по эзотерике, чувство собственной важности отрицательно, от него надо избавляться, так как оно требует много энергии, оставляя силы только для следования социальным заповедям и условностям.

Надутый ПСВ в соцсетях

Часто употребление словосочетания ЧСВ встречается в соцсетях, где можно спрятаться за фото аватара и утвердиться в значимости за счет других.Аббревиатура аналогична терминам высокомерие, высокомерие и гордость. Люди с чувством собственной значимости постоянно преподносят свои заслуги другим. Пренебрежение к себе также свидетельствует о завышенном чувстве собственного достоинства.

Еще один вариант, где можно встретить этот термин, — онлайн-игры. Там он применяется по-разному — в разных типах игр, но часто упоминается в контексте, похожем на социальные сети. Игрок с манией величия, переоценкой себя и своих возможностей, высокомерием и самовлюбленностью заслуживает того, чтобы быть «награжденным» этим описанием.Из онлайна характеристика переходит в жизнь, проявляясь в хвастовстве и честолюбии. От этого трудно избавиться.

Что значит ЧСВ Вконтакте

Не все знают, что такое ЧСВ в ВК. Об этом чувстве, присущем человеку, можно узнать по следующим проявлениям:

человек гордится собой, считает себя важным, мнение ставит выше слов других;
тщеславие, честолюбие, чрезмерное чувство собственного достоинства;
человек не способен слышать критику в свой адрес;
не может нормально понимать людей, с ним трудно разговаривать;
требует максимального уважения к себе даже при отсутствии реальных дел;
постоянно уделяет внимание своему аккаунту — оставляет себе комментарии, «лайкает» его заметки, пишет много статей, оставляет спойлер в обзорах фильмов, не уважая пожелания и мнения других людей.

Кто чирлидер в Доте

Если вам нравится соревновательная игра Дота 2, то не помешает узнать получше: ЧСВ — что значит при общении с другими пользователями. Все игроки достигают разного уровня мастерства, что может привести к конфликтам в чате между лучшими и худшими. Большинство победителей могут похвастаться невероятным мастерством и могут быть обвинены в чрезмерном посттравматическом стрессе.

Самомнение подразумевает, что человек сильно преувеличивает и превозносит свою ценность или мастерство, демонстрируя другим несуществующие таланты.У игрока есть агрессия к любым словам или действиям, ведь на самом деле внутри он тоже считает себя неполноценным. Человек с завышенным чувством значимости в Доте слишком зависим от чужого мнения, уделяет ему много внимания, поэтому отличается тщеславием.

Что такое темный век чсвшник

Еще одна популярная игра — Dark Age — в разделе популярные вопросы ответы про ЧСВ — что означает этот термин. Оно обозначает число силы вещей.У каждого игрока есть слоты — вещи, повышающие важность игры и уровень защиты. К значимым категориям относятся сами вещи, заточка, драгоценные камни. Чем больше таких слотов у игрока, тем выше его сила. Вы можете узнать больше об этих терминах непосредственно на сайтах серверов Dark Age MMORPG.

Число силы вещей выражается количественно, составляя сумму всех имеющихся предметов. На это может повлиять одежда, камни навыков, предметы, которые держат домашние животные и лошади.Параметр количества силы вещей находится в прямой зависимости от количества приобретенных или полученных амулетов, магических предметов. Повышать их уровень можно затачивая, украшая самоцветами и камнями, переплавляя.

Видео: чем опасно чувство собственной важности

Что буквально означает « Чувство собственной важности «. Этот термин часто можно встретить на различных молодежных интернет-форумах, в социальных сетях и в онлайн-играх, таких как: « DotA », « Counter-Strike: Global Offensive », « League of legends » и т. д.Кроме того, шутки про завышенный ПСВ стали настоящим вирусным мемом, который и сегодня можно найти в Интернете.

Что такое ЧСВ — расшифровка простыми словами.

Простыми словами, ЧСВ — это привычная аббревиатура () выражения «Чувство собственной важности», которое употребляется в молодежном сленге для определения уровня собственного восприятия конкретного человека. Как правило, этот термин используется в сочетании со словами «переоцененный» или «недооцененный», что в свою очередь характеризует человека как того, кто считает себя слишком важным или недооценивает себя.

Примеры использования термина ПСВ в речи:

— !!! Да, ваша ЧСВ завышена;
— Ваш ЧСВ просто зашкаливает, будьте проще;
— Прекратите увеличивать свой ЧСС, унижая других;
— Друг, у тебя занижен ЧСВ. Вы явно недооцениваете себя.

Что такое завышенная ЧСВ.

Как уже стало понятно из определения, люди с завышенным ПСВ — персонажи, считающие себя слишком важными личностями.Они считают, что окружающие их люди менее важны и должны проявлять к ним повышенное внимание и лояльность. Как правило, такие люди очень самоуверенны и считают свое мнение единственно важным и правильным. Часто завышенное чувство собственной важности может сопровождаться хамским или аморальным поведением. По существу, они свои и искажают. Радует только то, что такие персонажи редко встречаются в реальной жизни. Их основной средой обитания являются просторы Интернета, где можно абсолютно безнаказанно оскорблять и унижать людей, повышая свой личный травматизм.

Что такое недооцененный ПСВ.

В отличие от завышенного, заниженный ПСВ характеризует людей очень неуверенных в себе, сомневающихся в своих способностях, навыках или внешности. Как правило, это очень спокойные, тихие, скромные и безынициативные люди, за счет угнетения которых, собственно, окружающие и утверждают свою ПСИ.

Самомнение и тщеславие — самые явные признаки эго. … Они всегда отталкивают людей.

Если у человека сильно развито эго и пульс, с ним невозможно общаться длительное время.

В словах, энергии и невербальном языке таких людей чувствуется фальшивая спесь, социальная обусловленность, тщеславие и честолюбие .

Понятие и толкование ЧСВ

Эго — это привязанность к собственной важности. .

CHSV расшифровывается как «Чувство собственной важности».

Человек с завышенным чувством собственной важности очень восприимчив и реагирует на действия и слова других.Часто испытывает чувство неполноценности и неполноценности.

Явные признаки завышенной ВСР у человека:

Эго — это ваше ложное я, ваша личность, ваша трусость.

Махарадж сказал: « Чтобы узнать, кто ты есть, ты должен узнать, кем ты не являешься. .

Признаки большого эго

Эго удерживает вас в зоне комфорта.
Он не хочет, чтобы ты встречался с новыми людьми. Эго против всего нового.
Эго всегда мало, оно постоянно жаждет чужого одобрения, признания, славы.
Он гоняется за числами. Больше денег, больше признания, больше чести.
Эго хочет чужого уважения.
Это мешает вам осознать, что вы уже самодостаточны без внешней стимуляции.
Если вы никому не доверяете, легко поддаетесь своим эмоциям, имеете плохое настроение, злитесь на всех — это значит, что ваше поведение диктует эго. Вы находитесь под его влиянием.
Эго мешает вам быть в моменте, сосредоточившись на чем-то одном. Хаотичные мысли, путаница в голове — это его рук дело. Если нет отождествления с мыслями, этого не произойдет.

Независимо от того, отождествляете ли вы себя с эго или нет, это всегда ваш выбор. Вы решаете сами.

Вы можете любить себя настолько естественно, насколько это возможно, без эго. У тебя не должно быть высокомерия .

Что нужно знать людям и почему они не меняются

Ваше эго — это привязанность к телу, его ограничениям, страхам.Это ваши мысли, которые преследуют вас, ваши эмоции, ваше тело, внутренний диалог.

Ошибка человека верить всему, что говорят ему его мысли. Он верит в свои мысли, которые подсказывают ему, что, как и когда делать .

Все, что приходит и уходит, — это не ты … Твои мысли, эмоции, тело — это не ты.

Эго – это ваша личность, это самомнение и гордость.

Личность – это то, что навязывается вам извне обществом , вашими масками, социальными слоями, проекциями не вашего настоящего я. Эго — это невидимые заборы вокруг вас, которые никого не держат рядом.

Будь личностью — это твоя правда, таким тебя создал Бог, когда ты родился, это твоя реальность.
Когда вы ненавидите, ваше эго удовлетворяется.
В ненависти вы чувствуете свое превосходство.
В ненависти вы отличаетесь от других.
В ненависти вы решительны. Человек чувствует отождествление с кем-то или чем-то.
Определить себя — значит ограничить себя.
Любовь есть растворение в других.Любовь требует жертвы эго.
Любить способны только те, кто готов стать ничем.

Видео «Как люди зависимы от чужого одобрения и признания»

Смотрите следующее видео. В ней говорится о том, что такое эго человека и чем оно является.

Как избавиться от ненужных вещей и стать более сознательным

Что нужно сделать, чтобы избавиться от посттравматического стресса :

Если вести себя высокомерно, смотреть на других свысока, то все отвернутся.

Никто не хочет, чтобы ты хвастался.

Никому не интересно слушать твои слова — какой ты пуп земли, какой ты классный и как умеешь красиво причесываться.

Если вы хотите повысить уровень своей осознанности и лучше замечать в себе признаки эго, то вам пригодятся следующие книги:

Ошо «Мужество. Радость жизни в опасности» .
Нисаргадатта Махарадж «Я есть То» .

О хвастливых и высокомерных людях

Не знаю почему, это происходит автоматически, я испытываю отвращение к парням, которые измеряют свою крутость, сравнивают себя со мной или говорят мне: Ты видел, что я сделал? Вы видели, какой я молодец?

Мне абсолютно все равно кто ты и что ты там делал. Можешь сказать маме, может она оценит и погладит тебя по головке . Мне не нужно об этом говорить .

Все это напоминает детский сад.Просто забери это.

: самоосознание, просветление, самопознание — выберись из бесконечного колеса страданий и пойми, кто ты есть.
: как правильно медитировать — поза, техника, практика + 2 видео.
: отличная статья о любви, счастье, внутреннем равновесии и гармонии.

Хвастовство — признак комплекса неполноценности

При общении, как только человек начинает хвастаться перед вами, он начинает ждать вашей реакции.

Человек хвастается и ждет восхищения и уважения, потому что сам себя не любит и не уважает.

Плохо относится к себе, много требует от других … Мне проще уйти от таких людей и не тратить свое время.

Ищущий сам найдет то, что ищет … Спящего будить не стоит. Он обидится на вас за правду.

Просто потому, что ты узнал что-то новое или прочитал пару книг, ты не изменишься.Недостаточно просто читать.

Ты должен много работать над собой ! Необходимо внедрять осознанность, наблюдать за собой и изменять себя с большим энтузиазмом.

Плакат Commodore серии Holden HDT HSV VL и VK Calais SS

### ПО СПЕЦПРЕДЛОЖЕНИЮ! ###

Чтобы получить бесплатную доставку: Приобретите минимальное количество из Австралия (минимум 3 плаката), Новая Зеландия (минимум 4 плаката) или США и Канада (оба минимум 5 плакатов). Он рассчитывается на странице оформления заказа.

Серия Holden VK & VL Commodore, печать плаката с диаграммой модели

Отпечатано на глянцевой бумаге премиум-класса плотностью 240 г/м² | Прокрутите вниз, чтобы увидеть увеличенное изображение и купить этот принт

На этом принте представлены автомобили Holden от VK до VL серии f, включая модели HDT и HSV. Вверху есть большой раздел текста, подробно описывающий развитие и историю модельного ряда, и у каждого автомобиля есть этикетка и краткий тест, подводящий итоги модели.

Включает в себя:

VK Holden Commodore Executive
VK Holden Commodore Berlina
VK Holden Calais
VK Holden Commodore Executive универсал
VK Holden Commodore Vacationer универсал
VK Holden Commodore SS
VK HDT Commodore LM5000
VK Commodore AMT HDT Commodore SS2 Group Three
VK HDT Calais Director
VL Holden Commodore SL
VL Holden Commodore Turbo
VL Holden Commodore Berlina
VL Holden Calais
VL Holden Commodore универсал
VL Holden Commodore универсал
VL Holden Calais универсал
VL Holden Calais VLT 90 AT 2 Commodore HD Group
VL HD Calais LE
VL HDT Commodore Corsa
VL HDT Director
VL HDT Bathurst Aero
VL HSV Commodore SS Group A SV
VL HDT Commodore SS Group Three

Подходит в качестве принта в рамке для автолюбителей Холдена или Австралии!

ФОРМАТ ПЕЧАТИ: 19×13 дюймов
НАБОР БУМАГИ: Глянцевая премиум-класса, 240 г/м² (плотная и блестящая)

Слово ОБРАЗЕЦ появляется на изображении плаката только для целей размещения на веб-сайте, его нет на фактическом распечатке, который вы получаете. На создание этого издания ушло много часов планирования, исследований, иллюстраций и написания, и я очень горжусь этим. Мои работы покупают энтузиасты со всех уголков мира, а также часто покупают для подарков.

Примечание: Я оставляю за собой право вносить незначительные изменения в отпечатки в целях улучшения или точности. Я стараюсь обновлять изображения на своем веб-сайте как можно скорее, но вы можете получить более новую версию печати с некоторыми изменениями.Цвета заводских красок, представленные на оттисках, воспроизведены максимально точно. Фактические отпечатки могут незначительно отличаться из-за различий между экранами отдельных компьютеров или мобильных устройств и принтером, а также запасами бумаги и чернил.

Цена:	AUD $ 55,25
Конвертация валюты:
	USD $ 39,78 GBP £ 29,84 EUR € 35,36 CAD $ 50,83

Количество: 12345678121314151617181920

Нажмите здесь для просмотра информации о доставке >
* Вам НЕ НУЖНО иметь учетную запись PayPal для оплаты картой.
Classic Holden уйдет с молотка
Лимитированная серия Holden Commodore выставлена на аукцион с шестизначной суммой торгов, продолжая недавнюю тенденцию высоких цен на австралийские маслкары и другие классические модели.
Группа HSV VN SS 1990 года выпуска — одна из 302 машин, построенных Holden и проехавших 36 358 километров.
За последние 30 лет у четырехдверного седана было два владельца. Он оснащен 5,0-литровым двигателем V8 в сочетании с механической коробкой передач и имеет ограниченные модификации.
Главный операционный директор аукциона Lloyds Ли Хеймс говорит, что та же самая модель Holden была продана с аукциона в апреле и также стоила шестизначную сумму.
Количество запросов о последнем предложении было высоким.
«Этот культовый автомобиль — часы в истории австралийского автоспорта», — сказал г-н Хеймс.
Серия 1990 года была последней из автомобилей группы A Holden, и в то время, когда эти автомобили производились, правила гонок группы A требовали, чтобы производитель построил не менее 500 автомобилей для публичной продажи, прежде чем выпустить их на трассу.
Несмотря на то, что Holden построил всего 302 автомобиля VN SS Group A, Конфедерация автоспорта Австралии предоставила им исключение для участия в чемпионатах 1991 и 1992 годов.
К пятнице максимальная цена за автомобиль достигла 341 000 долларов, но ожидалось, что она будет легко превышена до закрытия аукциона в субботу.
Вероятная высокая цена продажи появилась после того, как Commodore, когда-то принадлежавший великому гонщику Питеру Броку, был продан более чем за 1 миллион долларов.
Автомобиль VK Group A 1985 года был тем, на котором Брок ездил во время сборки и выпуска серии VK Group A, ставшей теперь очень коллекционной.
Позже он был продан семье, которая ездила на нем только в особых случаях, прежде чем выставить его на аукцион.
Цена автомобиля выросла со скромных 3759 долларов до пика в 1 057 509 долларов.
Но не только Holdens привлекает большие деньги резким ростом стоимости целого ряда классических автомобилей, отчасти вызванным пандемией COVID-19, и растущим осознанием того, что деньги можно заработать на новом классе активов.
Автомобили, которые не обязательно любили или считали вершиной автомобильного совершенства, когда они были выпущены, теперь продаются во много раз дороже их первоначальной стоимости, поскольку сообразительные инвесторы ищут возможность заработать.
В некоторых случаях автомобили, которые продавались новыми за несколько тысяч долларов в 1970-х, 80-х или 90-х годах, теперь привлекают более 100 000 долларов.
Даже такие автомобили, как Holden Kingswood, могут стоить около 50 000 долларов, Ford Cortina — 70 000 долларов, а Ford Escort — около 30 000 долларов.
Винтажные полноприводные автомобили также привлекают большие деньги: например, Toyota Landcruiser FJ40 1971 года стоит почти 120 000 долларов.
На субботнем аукционе Lloyds также будут представлены Jaguar XJS 1977 года, когда-то принадлежавший медиа-магнату Керри Пэкеру, Ford Falcon, победивший в чемпионате с двигателем V8 Гленна Сетона, Holden Torana LC GTR 1971 года и суперкар Castrol V8 2000 года Рассела Ингалла.
Г-н Хеймс сказал, что Packer Jaguar был единственным в своем роде с его конфигурацией с двойным турбонаддувом в результате запроса г-на Пэкера к победителю Bathurst Кевину Бартлетту «заставить его работать» после дня, проведенного за рулем на гоночной трассе Oran Park в Сиднее.
Оттуда автомат British Racing Green XJS V12 претерпел серьезные механические модификации.
Но во время одного из его многочисленных выездов в мастерскую в здании вспыхнул пожар и полностью выпотрошил машину.
Затем он был куплен Гэри Уокером и перестроен с нуля до максимальной скорости 320 км/ч.
как расшифровывается аббревиатура и что она означает в интернете. Что такое чсв на молодежном сленге
Что такое ЧСВ ВКонтакте?
V В последнее время при общении в Интернете часто используются слова и выражения, которые достаточно сложны для понимания, одним из таких выражений является ЧСВ. Что такое CSV в ВК? На самом деле это понятие говорит о чувстве собственной важности, к сожалению, завышенное чувство собственной важности является актуальной проблемой в современном обществе.
Происхождение выражения hsv
Во-первых, нужно понять, откуда появилось такое понятие, как ЧСВ, как оно попало в разговоры и переписку многих людей.Его ввел известный американский писатель, ученый-эзотерик Кастанеда. И именно из его творений люди впервые узнали о таком понятии, как ЧСВ.
Но как многие люди могли знать об этой концепции? Был ли этот ученый действительно так популярен? Нет, это не так. Действительно, мало кто читает научные и эзотерические труды. Наш CSV популяризировался благодаря множеству интернет-ресурсов, распространяющих информацию о различных мемах и интернет-феноменах. В частности, все это благодаря русскоязычной викенциклопедии «Луркоморье».
Значение ЧСС
Аббревиатуру ЧСВ можно расшифровать как: Чувство собственной важности. Применяют эту аббревиатуру часто на различных форумах или в социальных сетях, чтобы показать человеку, что он слишком много о себе думает. Проблема завышенной самооценки и собственной важности достаточно распространена в современном мире.
Но почему людей с завышенной самооценкой мы встречаем в Интернете гораздо чаще, чем в реальной жизни? Дело в том, что интернет дает таким людям прекрасную возможность максимально широко заявить о себе.Здесь они могут говорить и делать все, что хотят, но никто не может остановить их выходки. Такого рода безнаказанность привлекает в Интернет людей с завышенным PSI.
Примеры использования
Чтобы лучше понять значение выражения HSP, давайте рассмотрим его применение на конкретных примерах.
Как ты можешь спорить с тем, что я говорю? Все знают, что это так! — Да ЧСВ у тебя завышено бро, если ты так говоришь, это не значит, что так оно и есть на самом деле.
Эй, девочка, дай мне место! Я старше, мне нужно сидеть, а ты молод, вставай! — Женщина, да, ЧСВ у вас завышено, кстати, я всю ночь работал и мне тоже нужно отдохнуть.
Сейчас я все решу! Как скажу, так и сделаю! — Почему мы должны делать, как вы сказали? Да у тебя накачанный ЧСВ чувак!
Заключение
После прочтения этой статьи у вас больше не должно возникать вопроса — «Что такое ЧСВ ВКонтакте?». Мы выяснили, что CHSV — это чувство собственной значимости, а также увидели примеры того, как можно использовать CHSV в разговоре.
Мы более чем уверены, что большинство людей хоть раз видели SSV во всемирной сети или смеялись над местами с уморительными шутками про переоцененный SSV.
Это сленговое выражение используется в основном молодыми людьми, но имеет свое место в лексиконе людей всех возрастов.
Что означает ЧСВ?
Приступим к расшифровке этой аббревиатуры, чтобы всем было понятно, в чем заключается конкретный смысл этой аббревиатуры.ЧСВ — это чувство собственной важности , как человек оценивает себя в обществе и видит себя со стороны.
Также следует учитывать, что некоторые пользователи расшифровывают это как ощущение собственного величия. Этот вариант также можно считать правильным – по сути, это степень оценки человеком самого себя.
К сожалению, сегодня большое количество людей не совсем адекватно оценивают себя, от чего ПСВ стал ассоциироваться с самым, что есть, настоящим недугом. Страдают от него и взрослые, и молодежь, но чаще всего он встречается именно у молодежи.
Молодой человек с завышенным чувством собственной значимости слишком много думает о себе, говоря о себе как о незаурядном сверхчеловеке, которого все должны любить и обожать по умолчанию и, конечно же, которому следует уделять все внимание окружающих его.
Подросток, обладающий сильным чувством собственного превосходства, испытывает острую потребность в огромном количестве внимания со стороны и просто не может иначе поступить с окружающими его родными и близкими, кроме как постоянно выпрашивать внимание всеми доступными способами — от глупые шутки до самых настоящих истерик со скандалами.
Тем не менее, уровень значимости и значимости для общества таких детей очень сильно приукрашен. И если кто-то говорит о вас, что у вас чрезмерно преувеличенное чувство собственной важности, имейте в виду, что это далеко не комплимент и пора задуматься о своем поведении на публике — скорее всего, оно очень некрасиво.
Как переводится ЧСВ
Большое количество наших сограждан считает, что эта распространенная аббревиатура имеет какой-то особый смысл и что она произошла от одного из множества иностранных идиом.
На самом деле предположения этих людей в принципе неверны — это не что иное, как сленг, образованный от слияние нескольких слов в сочетании «Чувство собственной важности/величества» и не имеет абсолютно никакого конкретного перевода . Другими словами, это просто аббревиатура, которая на английском языке не означает ничего особенного.
Конечно, у англичан есть свои идиомы для обозначения собственной важности, но, в любом случае, было бы неправильно переводить всю аббревиатуру напрямую.
ПСВ у подростков
ЧСВ вспоминают с завидной частотой в молодежной среде и их сленг, но дело не только в этом. Подростковый возраст – это сложное время, когда болезненно неадекватная самооценка начинает проявляться во всей красе.
Это легко объясняется тем, что подростки очень требовательны к одобрению окружающих. Они прилагают все усилия, чтобы завоевать уважение и восхищение своих сверстников практически любой ценой.
Поскольку желание быть популярным и востребованным наиболее обостряется именно в этом возрасте, ПСИ молодежи все больше набирает обороты. К сожалению, даже для самих ЧСВ-шников завышенная самооценка отнюдь не радость, а становится очередным сильным разочарованием.
Подросток, который слишком много думает о себе, выглядит слишком тщеславным и сосредоточенным только на себе.
Такой человек, кроме себя, практически никого не видит, потому что он центр мироздания. Эта характеристика человека далеко не самая привлекательная для окружающих его людей, а также для установления новых знакомств и общения. Такое поведение отталкивает.
Такое поведение не нравится не только окружающим и знакомым людям, так как особую тягость в таком положении вещей испытывают друзья и родители, по этой причине часто возникают разного рода конфликты и ссоры. Отношения начинают «трещать», в результате страдает подросток.
Как может показаться на первый взгляд, разговоры о чьем-то завышенном самомнении не более чем забавная тема для обсуждения с друзьями.Но, если опустить взгляд поглубже, становится понятно, что эта черта имеет отрицательный характер , требующий скорейшего избавления от него.
Завышенный ПСВ: как выявить человека с таким недугом
Люди с завышенным ПСИ, определить не составит труда … Все что для этого нужно — наблюдать за манерой общения человека, его поведением с друзьями, родственниками и близкими ему людьми; а также, хотя бы раз, увидеть этого человека в некомфортных условиях и окружении.И сразу все станет ясно.
В цифровом мире встретить излишне эгоцентричных людей проще простого — обратите на них свое внимание.
Возьми в руки лопату и почини всем корону!
Часто это желание может возникнуть по отношению к людям, чей эгоизм, гордыня и напускное величие настолько зашкаливают, что терпеть становится практически невозможно. Справедливости ради надо сказать, что проявления ПСВ (важности) в той или иной степени свойственны каждому человеку, но есть личности, у которых эгоцентризм, стремление самоутвердиться за чужой счет и неутомимая самореклама доходят до просто клинической пропорции.
Знаки ПСВ
Самым ярким проявлением ПСВ можно назвать обычное хвастовство, с помощью которого человек пытается привлечь к себе внимание, «набить» цену, вызвать восхищение или зависть. Сюда же относится и понты, симптоматика которых очень похожа на хвастовство, но имеет более сильный «налет» дешевой крутизны. Человеком движет желание показать всему миру свой статус: полезные знакомства, дорогие и стильные вещи, принадлежность к какому-то высшему обществу или группе и т. д.правильный способ ослабить симптомы «звездной болезни» — безразличная реакция окружающих.
Еще одним признаком завышенного ПСИ является самоутверждение за счет других. Сюда относится заносчивость, высокомерие, зависть, высокомерие, порицание, неконструктивная критика, высокомерие — в общем, весь набор приемов, помогающих в стремлении обесценить качества и достижения других людей, а значит, более выгодно выглядеть в собственных глазах.
Печальные последствия
Гипертрофированная потребность в признании и любви публики заставляет некоторых людей прибегать к таким приемам, как навешивание ярлыков, выпячивание своих реальных и мнимых положительных качеств, показное милосердие и т.п.При этом бедолаги тратят столько внутренней энергии и сил на «обслуживание» созданного ими образа, что рано или поздно это приводит к неврозам из-за постоянного стремления не терять статус, не ронять себя, соответствовать. А сколько таких примеров «падений с Олимпа», у подножия которых их ждали насмешки, позор и забвение?
Также к проблемам завышенного PSI относится обыкновенная ложь. Такие люди часто врут, и делают это больше по инерции, по привычке.Они настолько привыкли к тому, что ложью «добивались» каких-то жизненных привилегий, что продолжают делать это автоматически, даже когда это совсем не требуется. Все это, естественно, не может не сказаться на отношении окружающих.
Общество никогда не приветствовало тех, кто таким образом привлекал его внимание. Тех, кто сегодня «выпрыгивает из штанов», чтобы откусить кусок пожирнее от признания и любви публики, завтра ждет разочарование и презрение. Но искренность, естественность, оригинальность всегда будут в почете у действительно думающих и здравомыслящих людей (очень хочется надеяться, что таких большинство).
Как избавиться от ПСВ
Главный секрет истинной внутренней свободы заключается если не в полном искоренении чувства собственной важности (что удается далеко не всем), то, по крайней мере, в минимизации его проявлений.
«Или слово «» , но и сокращенные аббревиатуры. Одна из таких аббревиатур — ЧСВ. В данной статье мы рассмотрим КСВ — что означает эта аббревиатура и ее устное употребление в общении.
Также как и «торт», ПСВ является распространенным интернет-мемом, который люди используют в основном при общении в социальных сетях.Эта аббревиатура принимает два очень близких друг другу значения. Это «чувство собственной значимости» и «чувство своего величия».

«Чувство собственной значимости» и «Чувство собственного величия» (ПСВ)
«Чувство собственной значимости» или «Чувство своего величия» (ПСВ) — чувство превосходства над чем-то или кем-то, чувство повышенной значимости себя, своих поступков и поступков, не отражающее реальной картины того, что это происходит.Концепция CSV использовалась Карлосом Кастанедой во многих его книгах. Дон Хуан потратил много времени и сил на объяснение смысла понятия ПСИ, так как оно чрезвычайно емкое.
Используя все пояснения, которые дает нам дон Хуан, CSV имеет следующее описание и значение:
«Это чувство изначально не присуще человеку, оно привносится в человека извне. Заставляя конкретного человека на протяжении всей его жизни, то есть постоянно, проверять собственную значимость и значимость, меняются жизненные ценности этого человека.Результаты таких проверок выдвигаются на первое место среди всех жизненных ценностей человека, ценностей, удовлетворяющих его ПСВ. При этом ценности, не удовлетворяющие ФСЗ, отодвигаются на второй план или вовсе отбрасываются.
К сожалению, в результате даже сама жизнь человека попадает в раздел понятий, не удовлетворяющих ПСВ (неважно). Чтобы не потерять ПСВ, человек готов пойти на любую глупость и даже смерть. В то же время ПСВ носит деструктивный характер и, кроме указанной выше переоценки самой себя, не несет существенных изменений в способностях и жизни человека.Основной предпосылкой достижения чувства воина, а также принятия на себя ответственности за свои действия и стирания личной истории является потеря чувства собственной важности или величия. Концепция PSI освещена во многих книгах, особенно в третьей книге «Путешествие в Икстлан».
Таким образом, часто употребляя в Интернете понятие ПСМ, само понятие ПСМ стало распространенным интернет-мемом, характеризующим людей, чрезмерно демонстрирующих и преувеличивающих перед окружающими свою значимость и значимость своей личности в глазах других людей и сообщество в целом.
Симптомы и характеристики PSV
Характеристики и симптомы PSV:
чрезмерный или исключительный нарциссизм и эгоизм
преувеличивать свои таланты и свою роль
демонстративное поведение
Видя такие симптомы, можно с уверенностью диагностировать у человека ПСВ.
Афоризмы и фразы людей с ПСВ
Люди с ограниченными возможностями часто используют подобные афоризмы и выражения:
Я Д’Артаньян, а вы все ебаные дары
Мне все равно, я делаю свою работу так, как считаю нужным (если произносится вне связи с чем-либо)
У меня +100500 правок к каждому сообщению на форуме, при переписке
У меня весомый вклад в статьи, а ты флудер и тролль
и т.д.
Как и когда использовать PSV
Чаще всего ЧСВ применяли к таким деятелям, как Артемий Лебедев, Варракс, Катя Гордон, Ярослав Золотарев, Дмитрий Подковыров и так далее. К ЧСВ также относят активистов Википедии, которые часто занимались саморекламой на Википроектах — Аюза, Погребного-Александрова и Гольдберга.
Среди огромного количества мемов в интернете есть один широко распространенный и невероятно актуальный в наше время — ЧСВ, расшифровка которого многим известна и, к сожалению, близка.Это о чувстве собственной важности. Как ни крути, но у подавляющей части населения (если не страны, то интернета точно) чрезмерно высокого мнения о себе и собственных суждениях. Их взгляд на некоторые вещи априори является самым разумным, правильным и не подлежащим обсуждению. Такие люди требуют к себе особого отношения, хотя их значение обычно преувеличено и сомнительно. Про таких говорят: «ЧСВ зашкаливает!»
А еще их высмеивают с помощью забавных афоризмов, тематических картинок в социальных сетях.Откуда берутся такие личности? Кто придумал, кто стал таким известным человеком, можно ли диагностировать синдром посттравматического стрессового расстройства? Как понять, есть ли у вас предпосылки для его развития? Чем это опасно и как с этим бороться? Обо всем этом читайте ниже.
Как мы узнали о ПСВ
Начнем с того, откуда взялся этот термин. Его ввел известный ученый-эзотерик Кастанеда. Именно от него мы впервые узнали о таком явлении, как ЧСВ. Расшифровка этой аббревиатуры сегодня не вызывает затруднений ни у кого из активных интернет-пользователей.А все благодаря русскоязычной викенциклопедии «Луркоморье» — именно она популяризировала мем ЧСВ, как и многие другие известные интернет-феномены. Благодаря отсутствию строгих формальностей (как и в самой Википедии) этот ресурс охватывает большее количество самых разнообразных объектов современного мира и дает более полное и понятное представление о них.
Кто они — люди с завышенным ВЧЧ?
Итак, мы понимаем, ЧСВ, расшифровка известна, известен и источник, распространивший о ней сведения.Но чувство собственной важности не могло появиться само по себе, должны быть его «носители». И, конечно же, они есть. Таких людей всегда было достаточно, просто интернет помогает им «выйти в мир», огромное количество людей (пользователей сети) и, соответственно, продемонстрировать свою яркость. Носителя ЧСВ найти очень просто — нужно всего пару раз наткнуться на его сообщения, комментарии к постам, и все сразу станет ясно. Все его разговоры ведутся с одной главной целью — привлечь к себе внимание, заявить публике о собственной крутости и уникальности, тем самым заодно и подпитать свой посттравматический стресс.
Среди людей с завышенным и непоколебимым ПСВ немало известных медийных личностей. Так, например, часто в социальных сетях данная характеристика применялась к российскому дизайнеру и блогеру Артемию Лебедеву, теле- и радиоведущему, а также скандальному блогеру, российскому публицисту, блогеру и популяризатору сатанизма Варраксу. Все они известны своими возмутительными выходками, эгоистичной позицией и экспрессивными выражениями в работе/творчестве. Вокруг них всегда какие-то споры, шум, обсуждения и эмоции (часто негативные), однако в большинстве случаев это входит в их планы.
ПСВ в реальной жизни
Что касается знаменитостей и популярных фигур в СМИ, то здесь все вроде бы вполне логично — им нужен пиар, им важно, чтобы о них говорили. А как быть с обычными, непубличными людьми вроде нас с вами? Обращали ли вы когда-нибудь внимание на свое поведение и то, как вы себя позиционируете при общении с другими людьми (хоть в Интернете, хоть в реальной жизни)? В конце концов, чрезмерный PSV может быть очень и очень разрушительным.
Чем может быть опасен завышенный PSI?
Во-первых, это может негативно сказаться на общении с другими людьми: друзьями, любимыми, коллегами и просто окружающими нас повсюду каждый день.Как ваш PSI влияет на них? Расшифровка этого понятия может звучать так: «Я пуп Земли». Кому понравится эта должность? Вряд ли ваш коллега, не говоря уже о начальнике, будет рад работать с человеком, для которого собственные интересы превыше всего. А люди тебе дороги? Легко ли им ужиться с вами и стараться угодить всем капризам? Рано или поздно у человека, который общается с носителем ПСВ, лопнет терпение, и отношения дадут трещину.
Во-вторых, завышенный PSI вредит вам больше всего. Позиция «я лучший/идеальный/всегда прав» легко может привести к деградации, отсутствию саморазвития, глухоте и слепоте к мнениям и желаниям других. В результате вы можете уйти в себя и потерять связь с реальностью. Конечно, это в особо сложных случаях, но все начинается с малого.
Как не попасть в ловушку ЧСВ?
Если вы замечаете за собой такое поведение, мысли, высказывания, то стоит остановиться и подумать: «Почему я так себя веду и к чему это может привести?» Безусловно, сам по себе ПСВ должен присутствовать у каждого человека, но в разумной пропорции.так же опасны и вредны, как и завышены. Попробуйте найти баланс. Придерживайтесь своих взглядов и суждений, если они обоснованы, взвешены и сбалансированы, но уважайте противоположные, разные мнения. Будьте верны себе, но слушайте других — это может быть полезно. Что касается соцсетей, то иногда лучше «пропустить» пост, чем ввязываться в пустые разговоры, лучше заняться чем-то более полезным и продуктивным. Удачи!
границ | Клеточное программирование HSV-2 обеспечивает продуктивную ВИЧ-инфекцию в дендритных клетках
Введение
Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) — это заболевание, передающееся половым путем, от которого, по сообщениям, во всем мире страдают почти 37 миллионов человек (1).Риск заражения ВИЧ-1 во время полового контакта в три раза выше у лиц, инфицированных вирусом генитального простого герпеса типа 2 (ВПГ-2) (2, 3), а наибольший риск наблюдается у лиц, столкнувшихся с ВПГ-2 недавно (4). Многие серопозитивные лица, инфицированные ВПГ-2, не знают о своем инфекционном статусе, и известно, что выделение вируса и эпителиальные микроязвы часто возникают у бессимптомных лиц. Кроме того, данные указывают на то, что противовирусное лечение неспособно полностью подавить инфекцию ВПГ-2 (5–7).Присутствие как ВИЧ-1, так и ВПГ-2 создает среду, в которой иммунные клетки, такие как дендритные клетки (ДК) и клетки Лангерганса (ЛК), могут подвергаться воздействию и кондиционироваться либо вирусами, либо факторами вирусного происхождения. Интересно, что присутствие как ВПГ-2, так и ВИЧ-1, по-видимому, в несколько раз увеличивает уровни ДНК ВИЧ в ДК (8), LC (9) и макрофагах (10).
Усугубление ВИЧ-инфекции присутствием ВПГ-2, по-видимому, имеет несколько объяснений, включая микроокружение, обусловленное инфильтрацией и персистенцией ВПГ-2-специфических CD4+ Т-клеток в слизистой оболочке (11).CD4+ Т-клетки из-за их экспрессии α4β7+ особенно восприимчивы к ВИЧ-инфекции (12–14). Кроме того, усиленная инфильтрация миелоидными ДК и плазмоцитоидными ДК (12), вероятно, способствует усилению инфекции слизистой за счет привлечения дополнительных клеток-мишеней ВИЧ. Причина усиления инфекции, помимо большего количества присутствующих иммунных клеток, может быть связана с активацией DCs, расположенных в слизистой оболочке (15). Активированные ДК продуцируют высокий уровень ФНО, который обуславливает микроокружение, а также соседние ДК и Т-клетки, делая их более восприимчивыми к ВИЧ-1 за счет увеличения их экспрессии CCR5 (8).Кроме того, HSV-2 может также прекондиционировать DC и T-клетки, обеспечивая патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (PAMP), что приводит к усилению ВИЧ-инфекции.
Микроокружение в месте инфекции обогащено множеством растворимых факторов, которые, вероятно, влияют на инфекцию ВИЧ-1 и ВПГ-2, включая компоненты системы комплемента (16–18). Вирионы ВИЧ-1 защищены от нормального лизиса, опосредованного комплементом, благодаря включению ингибирующих комплемент молекул, таких как CD55 и CD59, в их липидную мембрану (19), что приводит к опсонизации частиц ВИЧ-1 инактивированными фрагментами комплемента, такими как iC3b и C3d (20–22).Кроме того, вирионы, передаваемые половым путем, должны представлять собой частицы, опсонизированные комплементом и/или комплементарными антителами, при контакте с семенной жидкостью и/или выделениями шейки матки (19). Считается, что оба вируса используют эту часть механизма врожденного иммунитета для усиления тяжести инфекции и уклонения от комплемент-опосредованного лизиса вирионов (18, 20, 21, 23).
Активация врожденного иммунитета является важным компонентом механизмов противовирусной защиты. До сих пор значительно меньше известно о врожденном клеточном программировании, генерируемом HSV-2 в DC, которое, вероятно, усиливает ВИЧ-инфекцию.И ВПГ-2, и ВИЧ распознаются набором рецепторов распознавания образов (PRR) в организме хозяина. Толл-подобный рецептор (TLR) 2, TLR3, TLR9 и некоторые внутрицитоплазматические сенсоры, такие как отсутствующие в меланоме 2 (AIM2), интерферон-гамма-индуцируемый белок 16 (IFI16) и белок 5, ассоциированный с дифференцировкой меланомы (MDA5), ранее были показаны. для распознавания ВПГ в различных типах клеток мыши и/или человека (24, 25). Раннее распознавание HSV-1 в первичных клетках человека, например, макрофагах, включает два внутриклеточных пути восприятия нуклеотидов для индукции IFN I типа и воспалительных факторов.При этом MDA5/MAVS имеет первостепенное значение для индукции IFN типа I, тогда как путь TLR2, по-видимому, играет менее важную роль в ранних врожденных ответах (24). Недавние открытия установили участие врожденных сенсоров IFI16 и синтазы цГМФ-АМФ (цГАС) в защите хозяина от ДНК-вирусов, таких как ВПГ (26). Определение ДНК ВПГ с помощью IFI16 активирует механизм воспаления и ответы IFN-β в некоторых типах клеток (26). В фибробластах, инфицированных HSV-1, ДНК HSV-1 воспринимается как IFI16, так и cGAS (27).IFI16 и cGAS стимулируют путь STING, что приводит к активации TBK1 и IRF3, что приводит к продукции IFN-β (28). ВИЧ-1 распознается TLR, RIG-1-подобными рецепторами, NOD2, IFI16 и cGAS (29–31). Мы обнаружили, что передача сигналов в ДК, происходящих из моноцитов ВИЧ-инфицированного человека, включает путь TLR8 с последующей активацией сигнальных каскадов p38 MAPK, ERK, NF-kB, IRF1 и IRF7, тогда как опсонизированные комплементом вирионы обладали способностью подавлять эти и активируют сигнальные пути Lyn, PI3K, IRF3 (20).
В свете повышенного уровня ВИЧ-инфекции и выделения вируса на слизистой оболочке гениталий у лиц, серопозитивных к ВПГ-2 (2, 3, 5–7), а также того факта, что ВИЧ-1 становится мишенью для ДК во время передачи половым путем, мы стремились расшифровать ВПГ-2 индуцировал клеточное программирование, лежащее в основе усиленной ВИЧ-1-инфекции ДК. Прекондиционирование ДК человека ВПГ-2 перед воздействием ВИЧ-1 повышало воспалительный и противовирусный ответы, а также уровень ВИЧ-инфекции в ДК. Мы обнаружили, что множественные сигнальные пути были активированы на уровне транскрипции как в свободных, так и в комплементарных опсонизированных ВПГ-2/ВИЧ-1 ДК, подвергшихся воздействию.Усиление инфекции ВИЧ-1 зависело от активации пути STING и требовало распознавания структурно интактной ДНК ВПГ-2. Кондиционирование HSV-2 как свободным, так и комплементарным опсоном в ДК с двойным воздействием снижало уровни белков IFI16, cGAS, TBK1 и IRF3, которые участвуют в пути STING. Кроме того, активация пути STING в ДК, инфицированных HSV-2/ВИЧ-1, приводила к снижению уровней нескольких факторов рестрикции ВИЧ, например, SAMHD1, TREX1 и APOBEC3G, что снижало их клеточную рестрикцию инфекции ВИЧ-1 в ДЦ.Наша работа показала, что репрограммирование, опосредованное ВПГ-2, повышает способность ВИЧ инфицировать ДК и создает благоприятную микросреду для инфицирования и передачи ВИЧ.
Материалы и методы
Реагенты
В культуральную среду
DC RPMI1640 (GIBCO, Швеция) добавляли 2 мМ глутамина, 20 мкг/мл гентамицина (GIBCO), 10 мМ HEPES (GIBCO) и 1% плазмы человека. Рекомбинантный человеческий GM-CSF (Genzyme) (100 ЕД/мл) и 300 ЕД/мл рекомбинантного человеческого IL-4 (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота, США) использовали для размножения DC in vitro .
ДК, полученные из моноцитов, и культура клеток THP1
Была собрана цельная кровь здоровых добровольцев или лейкоцитарная пленка из банка крови университетской больницы Линчепинга (этические разрешения M173-07 и M75-08/2008). Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) отделяли центрифугированием в градиенте плотности с использованием Ficoll-Hypaque (Amersham Pharmacia Biotech, Пискатауэй, Нью-Джерси, США) и инкубировали в чашках для клеточных культур (BD, Европа) в течение 1 ч при 37°C, чтобы обеспечить адгезию DC-предшественники и иметь возможность отбрасывать неприлипшие клетки.Прогениторы дифференцировали в незрелые ДК, происходящие из моноцитов (далее именуемые незрелыми ДК), путем добавления 100 ЕД/мл GM-CSF и 300 ЕД/мл IL-4 в день 0, 2 и 4 культивирования. После этого DC оценивали на экспрессию маркеров CD14 и CD83 в качестве контроля качества перед использованием в экспериментах. В некоторых экспериментах использовали клетки THP1 дикого типа или THP1-Dual™ KO-STING (Invivogen, Франция). Клетки THP1 культивировали в соответствии с инструкциями производителя, активировали с использованием форбол-12-миризата-13-ацетата (ФМА, 10 мкг/мл) и инкубировали за 2 дня до инфицирования клеток и обрабатывали так же, как описано ниже для ДК.
Размножение и титрование вирусов
HSV-2, штамм вируса был приготовлен в клетках почки африканской зеленой мартышки (GMK), культивированных в среде DMEM с добавлением 10% инактивированной нагреванием (HI) FCS, как описано ранее (32). Штамм 333 ВПГ-2 использовали либо как инфекционный, либо как γ-облученный (30 мин) инактивированный вирус. HIV-1BaL/SUPT1-CCR5 CL.30 (лот 4235, 4238, 4313 и 4366) был получен с использованием хронически инфицированных культур клеточной линии ACVP/BCP (№ 204), первоначально полученных путем инфицирования SUPT1-CCR5 CL.30 клеток (любезно подаренных доктором Дж. Хокси, Университет Пенсильвании) с инфекционным запасом ВИЧ-1BaL (Программа исследований и эталонных реагентов NIH AIDS, каталог № 416, партия № 59155). Вирус очищали и концентрировали, как описано ранее (33), и аликвоты замораживали. Все препараты вируса проверяли на инфекционность.
Поколение GFP Reporter CCR5-Тропический вирус
Провирусную конструкцию
NLENG1-IRES использовали для создания NLENG1-IRES-70 путем замены ENV на YU-2 ENV, как описано в другом месте (34, 35).Провирусная конструкция была щедро подарена доктором Дэвидом Н. Леви (Нью-Йоркский университет, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк, США). Клетки HEK-293T культивировали в среде DMEM, содержащей 10% HI FCS, и при слиянии ~70% клетки трансфицировали провирусной конструкцией NLENG1-IRES-70 с использованием метода CaPO ₄. Через 8 ч после трансфекции среду заменяли средой DMEM с добавлением 1% HI FCS. GFP-ВИЧ собирали на следующий день путем сбора супернатанта, а клеточный дебрис удаляли осаждением при 2500 об/мин в течение 5 мин.Вирусные запасы разделяли на аликвоты и замораживали при -80°C.
Опсонизация ВПГ-2 и ВИЧ
Комплементарную опсонизацию ВПГ-2, ВИЧ и GFP-ВИЧ проводили путем инкубации вирионов с равным объемом человеческой сыворотки (HS) (этические разрешения M173-07 и M75-08/2008). Для опсонизации использовали разные ГВ; Серонегативные HSV-1 и HSV-2 использовали для опсонизации вируса HSV-2 (называемого CHSV), а серонегативные HS на ВИЧ и HSV-2 использовали для опсонизации вирусов HIV-1 или GFP-HIV-1 (называемых CHIV). и CHIV-GFP).ГС тестировали на антитела к ВПГ с использованием наборов HerpeSelect ^® 1 ELISA IgG и HerpeSelect ^® 2 ELISA IgG (Focus Diagnostics, Cypress, CA, USA). Свободные вирусы HSV-2, HIV-1 и GFP-HIV-1 (обозначаемые как HSV, HIV и GFP-HIV) разводили до той же концентрации, что и опсонизированный вирус. Отрицательный контроль, т.е. макет, обрабатывали культуральной средой. Все группы вирусов инкубировали в течение 1 ч при 37°С и использовали в экспериментах по коинфекции.
ВПГ-2 и ВИЧ-инфекция ДК
незрелых ДК (10 ⁶ клеток/мл) были инфицированы псевдо-, (30 нг/мкл) ВИЧ или CHIV в виде одиночной инфекции.HIV/HSV или CHIV/CHSV использовались в двух установках: прямая и отсроченная коинфекция. В группе с отсроченным введением HSV-2 и CHSV 1 MOI добавляли к ДК на 2 часа, после чего клетки промывали перед добавлением ВИЧ и CHIV на 4, 6 или 22 часа. В установке прямого коинфицирования оба типа вируса добавляли к ДК одновременно на 3 часа, промывали и затем инкубировали в течение дополнительных 21 часа во всех установках. ДК культивировали в среде с 1% плазмы человека. ДК собирали, промывали и лизировали буфером для лизиса Bioline RLY (Bioline, Великобритания) для выделения РНК или фиксировали 4% параформальдегидом (PFA) в течение 10 мин при 4°C для иммунного фенотипирования методом проточной цитометрии.
Для изучения уровня продуктивной ВИЧ-инфекции были проведены две установки коинфекции, и супернатанты были собраны на 1, 4, 7 и 10 день. После сбора супернатанта клетки ресуспендировали в 10% FBS перед добавлением IL-4 и GM-CSF. Уровень p24 ВИЧ определяли с помощью лабораторного анализа ELISA p24 (36). Кроме того, продуктивную ВИЧ-инфекцию оценивали с использованием репортерного CCR5-тропного вируса GFP с использованием той же экспериментальной установки, которая была описана ранее для других вирусов.DC были инфицированы GFP-ВИЧ в течение 3 и 5 дней, прежде чем процент положительных клеток GFP был проанализирован с помощью проточной цитометрии.
Экстракция тотальной РНК, обратная транскрипция и количественная ПЦР
Тотальную РНК из ДК, подвергшихся воздействию различных условий, экстрагировали с использованием коммерческого набора Isolate II RNA Mini или Micro Kit (Bioline, UK), а общую кДНК получали с помощью набора SuperScript III Reverse Transcriptase First Strand cDNA Synthesis kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, США). Количественную оценку транскриптов генов проводили с использованием набора SensiFAST SYBR ^® Hi-ROX (Bioline, Великобритания) и системы CFX96 Touch Real-Time (BIO-RAD Inc.). Праймеры, нацеленные на β-актин и GAPDH, использовали в качестве генов домашнего хозяйства для сравнения, как описано другими (37). Праймеры были приобретены у CyberGene AB (Стокгольм, Швеция). Чтобы компенсировать различия между планшетами, значения были нормализованы, как описано ранее (38).
ELISA и набор цитометрических шариков
Уровни белков TNF (Mabtech, Швеция) и IFN-β (VeriKine kit; PBL Assay Science, США) определяли в супернатантах культур ДК после примерно 20 ч заражения методом ИФА в соответствии с протоколами производителей.Цитометрические матрицы шариков (BD Biosciences, Стокгольм, Швеция) использовали для измерения уровней цитокинов и хемокинов в клеточных супернатантах и для измерения уровней фосфорилированного белка в лизатах ДК (BD Biosciences, Стокгольм, Швеция) в соответствии с протоколами производителя.
Проточная цитометрия
Качество незрелых ДК оценивали путем окрашивания PE-конъюгированными антителами против CD83 и CD14 человека (BD, Европа). ДК использовали, если их чистота была >95%, а их экспрессия CD14 и CD83 <10%.Экспрессию антигенов HSV-2 в подвергшихся воздействию HSV-2 DC осуществляли с помощью поликлонального антитела против HSV-2 (B0116, Dako, Дания). Воздействие инфекции на различные белки оценивали путем окрашивания PE-Cy7-конъюгированным антителом к человеческому APOBEC3G (Abcore, США), Alexa Fluor 647-конъюгированным антителом к SAMHD1 человека (Bioss Inc. США), Alexa Fluor 647-конъюгированным анти- TREX1 человека, антитела против IRF3 человека, PE-конъюгированные антитела против NAK/TBK1 человека, IFI16 человека (Abcam, Великобритания), CF150 человека (cGAS) (Thermofisher Scientific) и PE-конъюгированные антитела против STING человека ( БД Европа).Неконъюгированные антитела окрашивали конъюгированными вторичными антикроличьими антителами (DAKO). Образцы окрашенных DC оценивали с помощью проточной цитометрии (FACS Canto II, BD) и анализировали с помощью FlowJo (Treestar, Ashland, OR, USA).
Лиганды и ингибиторы
В экспериментах использовали следующие лиганды и ингибиторы TLR: лиганд TLR2 PAM (5 мкг/мл), лиганд TLR3 Poly I:C (40 мкг/мл), 2’3′-cGAMP, (10 мкг/мл), Poly dA:dT (0,5 мкг/мл), HSV-60 Naked DNA (10 мкг/мл), олигонуклеотид A151 ODN TTAGGG (1–3 мкМ) (Invivogen, Франция), человеческий рекомбинантный белок pp65 (UL83) (10–15 мкг/мл) (Miltenyi Biotec, Швеция), рекомбинантный белок Е7 папилломавируса человека типа 18 (10–20 мкг/мл) (SMS-gruppen, Дания) и ацикловир (20–50 мкМ) (SIGMA).Ацикловир добавляли за 1 ч до добавления вируса, инкубировали с вирусом в течение 2 ч, отмывали, пополняли и затем оставляли в культуре на протяжении всей инкубации. Внутриклеточную доставку cGAMP, Poly dA:dT, голой ДНК HSV-60, олигонуклеотида A151, белка UL83 и белка E7 осуществляли с использованием коммерческой системы DOTAP (SIGMA). Вкратце, различные лиганды и ингибиторы смешивали с забуференным HEPES физиологическим раствором и DOTAP в течение 30 минут при комнатной температуре, инкубировали в течение 2 часов при 37°C с ДК и промывали перед заражением.ДОТАП сам по себе служил в качестве контроля эффекта системы доставки.
РНКсек
РНК (5 нг) подвергали амплификации всего транскриптома с использованием набора NuGEN’s Ovation RNA-Seq V2 (Сан-Карлос, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, кДНК амплифицировали из тотальной РНК с использованием изотермической амплификации с одним праймером (SPIA). Образцы амплифицированной кДНК впоследствии очищали с использованием набора MinElute Reaction Cleanup Kit (Qiagen; Валенсия, Калифорния, США). Образцы кДНК фрагментировали на более мелкие фрагменты, затупляли на концах и лигировали с индексированными (со штрих-кодом) адаптерами и амплифицирули с использованием набора Ultralow System V2 в соответствии с протоколом производителя.Окончательное распределение размера библиотеки определяли с использованием Agilent Bioanalyzer 2100. Пять библиотек от пяти разных доноров секвенировали на платформе Illumina NextSeq500 (Сан-Диего, Калифорния, США). Файлы FASTQ были загружены в UPPMAX, а их качество проверено с помощью fastQC (39). Trimmomatic (40) был использован для удаления адаптеров и некачественных оснований, а затем чтения были картированы с эталонным геномом человека hg19 с использованием STAR (41). Количество для каждого гена было рассчитано с использованием featureCounts (42). Данные были нормализованы, а дифференциально экспрессированные гены определены с использованием R/DeSeq2 (43).Анализ путей был выполнен с помощью анализа пути изобретательности (Qiagen), R-анализа, анализа обогащения онтологии генов (GO) (Geneontology.org) и пользовательских списков генов.
Статистический анализ
GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) использовали для анализа всех данных, кроме RNAseq. Для проверки статистической значимости использовали повторные измерения ANOVA с последующим апостериорным тестом Бонферрони или двусторонним парным тестом t . Результаты считались статистически значимыми, если p < 0.05. Все эксперименты проводились не менее четырех раз с использованием клеток, полученных от разных доноров крови. Когда экспериментальные значения были нормализованы, среднее значение свободного вируса или имитатора было установлено равным 1. Результаты количественной ПЦР были нормализованы для различий между планшетами, как описано ранее (38). Вкратце, каждое значение вычиталось из среднего значения всех значений, а затем полученные значения делились на среднее значение ложного или свободного вируса в зависимости от различных экспериментов.
Результаты
Кондиционирование ДК человека вирусом HSV-2 сделало их более восприимчивыми к ВИЧ-инфекции
В настоящее время очевидно, что инфицирование ВПГ-2 половых путей предрасполагает к ВИЧ-инфекции и повышенному выделению вируса на слизистых оболочках (2, 3, 5–7).Тем не менее механизмы, лежащие в основе повышенной инфекции, остаются неоднозначными. Здесь мы оценили роль ДК в усилении инфекции, оценив эффекты предварительного воздействия ВПГ-2 на ВИЧ-инфекцию человеческих ДК, происходящих из моноцитов, и роль опсонизации вирусов комплементом. Уровни транскриптов мРНК gag ВИЧ были значительно повышены в ДК с двойным воздействием ВПГ / ВИЧ по сравнению с уровнями, индуцированными только ВИЧ, как через 6, так и через 24 часа (рис. 1А). Связанное с ВПГ-2 усиление ВИЧ-инфекции согласуется с выводами Marsden et al.(8). Более того, ДК, подвергшиеся воздействию опсонизированного комплементом ВПГ-2, давали более высокий уровень тирозинкиназы (ТК) как в ДК с двойной, так и с одиночной экспозицией по сравнению со свободным вирусом, как показано ранее, но не было никаких изменений в инфекции ВПГ-2 при измерении по экспрессии ТК. в ДК с двойным воздействием ВИЧ / ВПГ по сравнению с ДК с одиночным воздействием ВПГ-2 (дополнительная фигура 1). Продуктивная ВИЧ-инфекция также была значительно повышена в клетках с двойным воздействием ВПГ/ВИЧ, что было измерено по проценту GFP-ВИЧ-положительных DC с помощью проточной цитометрии и конфокальной микроскопии на 3 и 5 день после воздействия (рис. 1B), а также по уровням p24 ВИЧ в клетках. культуральные супернатанты на 4-й и 1-9-й день (рис. 1С).Опсонизация вирионов существенно не изменила уровень ВИЧ-инфекции в инфицированных ВПГ/ВИЧ клетках (рис. 1А-С). Следует отметить, что присутствие ВПГ-2 усиливало ВИЧ-инфекцию, как тогда, когда ДК были предварительно кондиционированы ВПГ-2 до заражения ВИЧ, так и когда ВПГ-2 и ВИЧ вводились в ДК одновременно. В нормальных условиях только небольшая часть ДК будет продуктивно инфицирована ВИЧ (рис. 1В), то же самое относится и к ВПГ-2 (18). Тем не менее, все ДК в культурах подвергаются воздействию вирусов и подвергаются их влиянию либо косвенно, либо прямо, а также в отсутствие продуктивной инфекции (18, 36).Количество ДК, которые поддерживают продуктивную инфекцию как ВИЧ, так и ВПГ-2, невелико, и это было показано Marsden et al. представлять только 1% клеток. В нашей системе мы определили, что уровень ДК с продуктивной ВИЧ-инфекцией и положительным на антиген HSV-2 должен составлять 5% для ДК, подвергшихся воздействию свободного ВИЧ/ВПГ, и ~ 12% для ДК, подвергшихся воздействию опсонизированного комплементом CHIV/CHSV (рис. 1D), это может отражать то, что не все клетки, положительные по антигену HSV-2, продуктивно инфицированы, а некоторые клетки имеют абортивную инфекцию HSV (44–46).Данные для прямой и отсроченной коинфекции дали очень похожие данные, поэтому представленные и проведенные в дальнейшем эксперименты относятся к установке отсроченной коинфекции. В совокупности наши данные ясно демонстрируют, что воздействие ВПГ-2 повышает способность ВИЧ продуктивно инфицировать DC, что побудило нас выяснить основной механизм, ответственный за усиление ВИЧ-инфекции.
Рисунок 1 . Кондиционирование дендритных клеток человека ВПГ-2 сделало их более восприимчивыми к ВИЧ-продуцирующей ВИЧ-инфекции.Дендритные клетки подвергали воздействию свободного HSV-2 (HSV) или комплемент-опсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 ч, затем промывали и инфицировали свободным ВИЧ, либо ВИЧ-1 BaL, либо GFP-меченым CCR5, тропным ВИЧ-1 (GFP-ВИЧ) или комплементарным. опсонизированный ВИЧ (CHIV) в течение 6 или 22 часов. ВПГ-2-положительные ДК измеряли с использованием поликлональных антител против ВПГ-2, а затем вторичных антител, конъюгированных с флуорохромом (A). Данные нормированы на свободный вирус, который устанавливается за единицу. (B) GFP-ВИЧ-положительные клетки оценивали с помощью проточной цитометрии через 3 и 5 дней после заражения ВИЧ или с помощью конфокальной микроскопии (40×) через 5 дней после заражения. Продуктивно инфицированные GFP-ВИЧ клетки (зеленые), окрашенные окрашиванием ядер с помощью DAPI (синий). Размерная полоса = 20 мкм. (C) Высвобождение р24 ВИЧ-1 продуктивно инфицированными ДК определяли с помощью ИФА с 1-го по 9-й день после инфицирования ВИЧ. (D) Процент положительных по GFP ВИЧ и положительных по антигену HSV-2 DC, измеренный с помощью проточной цитометрии через 24 часа после заражения.* р < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Различное клеточное программирование было вызвано в ДК различными условиями инфицирования ВИЧ и ВПГ-2
Чтобы лучше понять клеточное программирование во время инфекции ВПГ/ВИЧ, мы выполнили секвенирование РНК, которое предоставило полный профиль транскриптома в ДК, индуцированных однократным воздействием ВИЧ по сравнению с двойным воздействием ВПГ-2 и ВИЧ. Анализ транскриптома продемонстрировал активацию и участие различных наборов путей в одиночных и двойных инфицированных ДК соответственно.ДК, подвергшиеся воздействию двойного вируса, активировали или подавляли значительно больше генов, чем ДК, подвергшиеся воздействию только ВИЧ и CHIV (рис. 2А). Это продемонстрировало, что воздействие как ВПГ, так и ВИЧ было более мощным активатором ДК, чем один ВИЧ, и что дополнительная опсонизация вирионов подавляла активацию ДК. Затем наш анализ обогащения генов четко установил, что каждое из различных вирусных состояний приводит к уникальным паттернам экспрессии генов в различных сигнальных путях (рис. 2B, C; дополнительная рис. 2).Условия CHIV и CHIV / CHSV имели менее обогащенные пути по сравнению с группами со свободным вирусом (рис. 2B, C). Гены в сигнальных путях интерлейкина и JAK / STAT были обогащены как ВИЧ, CHIV, так и ВИЧ / ВПГ с двойным воздействием ДК, но только ВИЧ / ВПГ имел значительное обогащение (дополнительная фигура 2). Недавно было показано, что убиквитин-протеасомный путь играет важную роль в вирусном патогенезе (47). Гены, участвующие в этом пути, были значительно обогащены в свободных DC и подверженных воздействию ВИЧ / ВПГ, но только ограниченное количество генов было обогащено в группах, подвергшихся воздействию комплемента (дополнительная фигура 2).Анализ обогащения генов со сниженными уровнями экспрессии после ВИЧ-инфекции показал, что гены пути биосинтеза холестерина были значительно обогащены в ДК, подвергшихся воздействию CHIV, а гены, участвующие в метаболизме пиримидина, были обогащены в ДК, подвергшихся воздействию как ВИЧ / ВПГ, так и CHIV / CHSV (Дополнительное Фигура 2). Более конкретный, углубленный анализ обогащения генов, сосредоточенный на воспалении, противовирусных и иммунных реакциях, выявил картину значительно обогащенных путей, отчетливо различающихся для каждого типа инфекционного состояния, хотя в группах было некоторое совпадение (рис. 2B, C; Дополнительный рисунок 2).Например, активированные гены в каскаде JAK-STAT были значительно обогащены для всех групп, кроме CHIV (дополнительная фигура 2).
Рисунок 2 . Клеточное программирование дендритных клеток при одиночной инфекции ВИЧ и двойной инфекции ВИЧ/ВПГ. Дендритные клетки подвергали воздействию HSV-2 (HSV) или комплементопсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 часов, а затем инфицировали ВИЧ или комплементопсонизированным ВИЧ (CHIV) в течение 24 часов. Было выполнено полное секвенирование транскриптома. (A) Анализы количества генов со значительной активацией или подавлением экспрессии с оценкой общих, двух-, четырех- и восьмикратных изменений по сравнению с имитацией (B) р ≥ 0.05 с упором на воспалительные и противовирусные пути/факторы. (C) Анализ обогащения генов генов, значительно активизированных в три раза или более, с p ≥ 0,05. Анализ обогащения GO был выполнен с набором данных путей PANTHER. Термины со статистической значимостью в любом списке генов показаны в виде гистограммы с накоплением. * р < 0,05, ** р < 0,005, *** р < 0,0005. Ось Y = количество перечисленных генов, участвующих в указанном пути PANTHER.Ref = ожидаемый номер гена из ссылки (полные гены человека в базе данных). Н = 5.
Факторы воспаления были сильно повышены в ДК с двойным контактом с ВПГ-2 и ВИЧ
Известно, что ВИЧ и ВПГ-2 индуцируют воспалительные пути в иммунных клетках, при этом ВПГ-2 является более мощным активатором (18, 20), и наш анализ транскриптома ясно продемонстрировал активацию и участие нескольких воспалительных путей. HSV/HIV или CHSV/CHIV индуцируют различные паттерны экспрессии генов в DC для воспалительных генов по сравнению с одиночной инфекцией ВИЧ или CHIV (рис. 3А).Более того, группы с опсонизированным комплементом имели более низкие уровни транскрипции многих воспалительных факторов (рис. 3А). Только ВИЧ, HSV/HIV и CHSV/CHIV активировали несколько воспалительных факторов, таких как IL-6, TNF, CXCL1 и CCL20, с максимальной экспрессией, активированной в группах коинфицированных. Опсонизация комплемента снижала транскрипцию нескольких факторов, таких как CCL1, CCL5, CCL8 и IL-1β, поскольку они были ниже в опсонизированных группах по сравнению со свободным вирусом. CCL21, CCL28 и IL34 активировались только в группах с двойным воздействием.Несколько генов имели более высокие уровни экспрессии генов в группе CHIV и включали CXCR3 и IL-10. Затем мы проверили характер экспрессии некоторых воспалительных факторов с помощью количественной ПЦР и трансляции с помощью ELISA или массива гранул цитокинов на основе потока. Сам по себе HSV был ведущим индуктором TNF и CCL3, тогда как ВИЧ-1 был более мощным для индукции CXCL8 и IL-1β (дополнительная фигура 3). HSV/HIV и CHSV/CHIV приводили к более высоким уровням экспрессии мРНК TNF, CXCL8 и CCL3 по сравнению со свободным и опсонизированным комплементом ВИЧ (рис. 3B).Уровни мРНК IL-1β были одинаковыми в ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ и ВИЧ/ВПГ (рис. 3В), тогда как уровни белка были выше в ДК, подвергнутых двойному воздействию (рис. 3С). Секреция TNF и хемокинов CCL3 и CCL5 соответствовала характеру экспрессии мРНК и/или данных транскриптома (рис. 3A–C; данные не показаны). Уровни белка других воспалительных факторов, таких как CXCL10, были ниже в DC, подвергшихся воздействию обоих вирусов, по сравнению с одним только ВИЧ (рис. 3C). Эти расхождения между уровнями белка и данными транскриптома могут быть объяснены посттранскрипционной регуляцией и/или протеолитической деградацией (48-50).Транскрипция воспалительных факторов активируется несколькими сигнальными путями, включая путь MAPK p38, а двойное воздействие значительно повышает уровень фосфорилированного p38 с тенденцией к тому, что опсонизация вирионов снижает фосфорилирование p38 (рис. 3D). Фосфорилирование JNK демонстрировало аналогичный характер активации MAPK p38, но существенных различий не было (данные не показаны), что могло быть связано с моментом времени, выбранным для измерения.
Рисунок 3 .Воспалительные пути были сильно активированы в ДК, подвергшихся воздействию ВПГ/ВИЧ, при транскрипции мРНК. (A) Дендритные клетки подвергали воздействию свободного HSV-2 или комплемент-опсонизированного вируса (CHSV-2) в течение 2 часов, а затем инфицировали ВИЧ или комплемент-опсонизированным ВИЧ (CHIV) в течение 22 часов. Тепловая карта по воспалительным факторам со значительным повышением или понижением уровня регуляции в одной или нескольких группах DC ВИЧ, CHIV, HSV-2/HIV или CHSV-2/CHIV по сравнению с ложно обработанными DC из экспрессии мРНК RNA seq (B) уровни IL-1β, TNF, CCL3, CXCL8 определяли методом ПЦР.Данные были нормализованы к фиктивному набору, равному 1. (C) Уровни белка секретируемых цитокинов оценивали с помощью ELISA для TNF и матрицы гранул цитокинов для IL-1β, CCL5 и CXCL10. (D) Уровень фосфорилирования MAPK p38 оценивали в лизатах DC, подвергшихся воздействию HSV-2 или CHSV-2 в течение 2 часов с последующим воздействием ВИЧ или CHIV в течение 4 часов с помощью массива фосфопротеиновых гранул. * р < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н =5–8.
Воздействие ВИЧ/ВПГ вызывало более высокую экспрессию нескольких противовирусных факторов, включая IFN-β, в ДК по сравнению с воздействием только ВИЧ
Анализ транскриптома (рис. 2) ясно продемонстрировал активацию и участие множества противовирусных путей в ДК, подвергшихся воздействию как только ВИЧ, так и ВПГ и ВИЧ.Здесь мы оценили факторы, участвующие в активации и регуляции клеточной противовирусной защиты (рис. 4А). Характер многих противовирусных факторов, индуцированных в ДК, был сходным между ВИЧ и ДК с двойным вирусом, и в целом более низкий уровень активации противовирусных факторов в группах комплемента. Несколько генов TRIM, гены IFN типа I, гены SOCS и гены IRF активировались в свободном ВИЧ и ДК с двойной экспозицией, при этом самые высокие уровни транскрипции в основном обнаруживались в ДК с двойной экспозицией.Многие противовирусные гены были активированы в DC, подвергшихся воздействию ВИЧ / ВПГ и CHIV / CHSV, тогда как было обнаружено, что несколько антивирусных генов активировались только в DC, подвергшихся воздействию ВИЧ, и включают IFITM3, SOCS5 и TBK1 для свободного ВИЧ и IFITM3 для CHIV (рис. 4A). Затем мы подтвердили наличие некоторых из этих противовирусных факторов на уровне мРНК и белка. Однократное воздействие ВПГ и двойное воздействие ВПГ/ВИЧ повысило уровни экспрессии мРНК IFN-β и MX1 по сравнению с однократным воздействием ВИЧ (рис. 4А, В; дополнительная рис. 4), ясно показывая, что ВПГ является компонентом, ответственным за сильное противовирусное действие. ответы.Кроме того, секреция IFN-β была выше в образцах, подвергшихся двойному воздействию, с самыми высокими уровнями, индуцированными ВПГ/ВИЧ (рис. 4C). Интересно, что уровни IFN-β не коррелировали отрицательно с уровнями ВИЧ-инфекции, что позволяет предположить, что IFN-β оказывал ограниченное влияние на инфекцию даже при высоких уровнях IFN-β, наблюдаемых в DC с двойным воздействием. Петля обратной связи IFN-β индуцирует активацию STAT1 и транскрипцию регулируемых IFN генов (ISG). Наши данные ясно показали, что воздействие на ДК ВИЧ вызывало значительно более высокое фосфорилирование STAT1 через 6 часов по сравнению с CHIV, HSV/HIV и CHSV/CHIV (рис. 4D).Кроме того, ВИЧ и ВПГ/ВИЧ также значительно активировали несколько ISG, включая IFITM1, RSAD2 и ISG15 (рис. 4А).
Рисунок 4 . Противовирусные факторы и пути были сильно активированы в дендритных клетках, подвергшихся воздействию ВПГ/ВИЧ. Дендритные клетки подвергали воздействию HSV-2 или опсонизированного комплементом вируса (CHSV-2) в течение 2 часов с последующей инфекцией ВИЧ или опсонизированным комплементом ВИЧ (CHIV) в течение 22 часов. (A) Тепловая карта из данных секвенирования РНК антивирусных факторов, значительно повышающих или понижающих регуляцию при одном или нескольких состояниях инфекции ВИЧ, CHIV, HSV-2/ВИЧ или CHSV-2/CHIV по сравнению с ДК, подвергнутыми имитации лечения ( B) Уровни экспрессии мРНК IFN-β и MXA были получены с помощью ПЦР.Данные были нормализованы к ложному набору как 1. (C) Уровни секретируемого IFN-β оценивали с помощью ELISA. (D) Уровень фосфорилирования STAT1 оценивали в лизатах DC, подвергшихся воздействию HSV-2 или CHSV-2 в течение 2 часов с последующим воздействием ВИЧ или CHIV в течение 4 часов с помощью массива фосфопротеиновых гранул. * р < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н = 5–8.
HSV-2 Увеличение ВИЧ-инфекции в ДК Необходима интактная структура ДНК HSV-2
Чтобы оценить, является ли усиленная ВИЧ-инфекция в ДК следствием продуктивной инфекции ВПГ-2 с полноразмерной репликацией ДНК или ее было достаточно с доставкой интактной доступной двухцепочечной ДНК вирионами, мы использовали ацикловир и инактивированный ВПГ-облученный γ- 2 (51).В отсутствие репликации ДНК ВПГ-2 γ-облученный инактивированный ВПГ-2 не смог повысить уровень ВИЧ-инфекции и уровни экспрессии TNF и IFN-β (рис. 5А), что ясно указывает на то, что повышенная ВИЧ-инфекция ДК зависит от наличия доступной и/или интактной ДНК ВПГ-2. Инактивация HSV-2 γ-облучением вызывает повреждение ДНК, которое может сделать вирусную ДНК менее реактивной с внутриклеточными PRR, повлиять на транспорт ДНК в ядро и/или повлиять на высвобождение ДНК из вирусного капсида.Мы использовали ингибитор репликации ВПГ-2 ацикловир, чтобы проверить, достаточно ли присутствия интактной ДНК ВПГ-2 в ДК для усиления ВИЧ-инфекции или требуется ли активная репликация ДНК ВПГ-2. Ингибирование активной репликации ДНК HSV-2 в DC мало влияло на ВИЧ-инфекцию и IFN-β, но снижало ответ IFN-β, однако эти результаты не были статистически значимыми (фиг. 5B). Чтобы дополнительно установить роль двухцепочечной ДНК, мы доставили HSV60, последовательность двухцепочечной ДНК длиной 60 п.н. из HSV-1 с использованием DOTAP в DC.Внутриклеточная двухцепочечная ДНК значительно усиливала инфекцию FHIV и CHIV по сравнению с одним только ВИЧ (рис. 5C). В совокупности усиленная ВИЧ-инфекция и повышенная продукция IFN-β в ДК с двойным воздействием требовали присутствия двухцепочечной ДНК ВПГ-2 в ее естественной конфигурации, что позволяет предположить, что активация внутриклеточных PRR, таких как ДНК-сенсоры, может лежать в основе усиления ВПГ-2. ВИЧ-инфекции ДК.
Рисунок 5 . Интактная дцДНК ВПГ необходима для усиления ВИЧ-инфекции в ДК. (A) Дендритные клетки подвергали воздействию инфекционного или гамма-облученного ВПГ-2 (γ-HSV-2) или комплементопсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 ч, затем промывали и инфицировали ВИЧ или комплементопсонизированным ВИЧ (CHIV) в течение 22 ч . Уровни экспрессии мРНК транскрипта gag ВИЧ-1, TNF и IFN-β определяли с помощью ПЦР. (B) ДК предварительно обрабатывали ацикловиром (20–50 мкМ) в течение 1 ч, а затем подвергали воздействию HSV или CHSV в течение 2 ч, затем промывали и инфицировали ВИЧ или CHIV в течение 22 ч с добавлением ацикловира в культуру.Уровни экспрессии генов транскрипта gag ВИЧ-1, TNF и IFN-β определяли с помощью ПЦР. (C) ДК обрабатывали HSV60 или без него, доставленным с помощью DOTAP, после чего подвергали воздействию HSV или CHSV в течение 2 часов, затем промывали и инфицировали ВИЧ или CHIV в течение 22 часов с добавлением ацикловира в культуру. Уровни экспрессии генов транскрипта gag ВИЧ-1, TNF и IFN-β определяли с помощью ПЦР. Данные были нормализованы к набору ВИЧ, равному 1, для транскрипта gag ВИЧ-1 и фиктивному набору, равному 1, для TNF и IFN-β. * р < 0.05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Внутриклеточные PAMP, полученные из HSV, являются основными факторами, участвующими в усилении ВИЧ-инфекции DCs
Чтобы оценить роль различных PAMP в индуцированном ВПГ-2 усилении ВИЧ-инфекции в ДК, мы исследовали, может ли активация TLR2, TLR3 или cGAS/STING имитировать эффекты, наблюдаемые после заражения ВПГ-2. Известно, что TLR2 и TLR3 вовлечены в инфекцию ВПГ-2 (52, 53). Стимуляция TLR2 одновременно с ВИЧ-инфекцией не влияла на экспрессию кляпа ВИЧ по сравнению с одним ВИЧ (рис. 6А).Нацеливание на TLR3 дало лишь немного повышенную экспрессию кляпа ВИЧ по сравнению с резко повышенной экспрессией кляпа ВИЧ в DC, подвергшихся воздействию как HSV-2, так и ВИЧ (рис. 6A). В то время как воспалительные реакции на агонист TLR3 отдельно и агонист TLR3 в комбинации с ВИЧ были выше, чем воспалительные реакции только на ВИЧ, ни TNF, ни IL1-β не приближались к уровням, наблюдаемым при двойном воздействии HSV-2 (рис. 6A; данные не показаны). Увидев, что TLR2 показан как важный фактор индуцируемой HSV-2 клеточной активации (52, 54), мы исследовали влияние ингибирования пути TRL2 с помощью антагонистического лиганда TLR2 на ВИЧ-инфекцию.Наши результаты исключают участие передачи сигналов TLR2 в усиление ВИЧ-инфекции (дополнительная фигура 5). Принимая во внимание, что несколько межклеточных сенсоров, вовлеченных в инфекцию ВПГ, например, IFI16 и cGAS, которые объединяют свои сигнальные пути при активации STING (28, 48, 55), мы исследовали влияние активации STING на ВИЧ-инфекцию. Исследовали уровни ВИЧ-инфекции в ДК после экзогенной и эндогенной стимуляции цГАМФ, активатором STING через цГАС. Экзогенно доставленный cGAMP оказывал незначительное влияние на уровень ВИЧ-инфекции, тогда как эндогенно доставляемый cGAMP, т.е.е., доставленные в цитозоль с помощью DOTAP, значительно усиливали ВИЧ-инфекцию до уровней, сходных с DC, подвергшимися воздействию ВИЧ/ВПГ (фиг. 6B). Это указывает на то, что путь cGAS/STING, чувствительный к внутриклеточной ДНК, является одним из путей, участвующих в опосредованном HSV-2 усилении ВИЧ-инфекции в ДК. ВИЧ-инфекция в сочетании с эндогенным cGAMP, т. е. cGAMP, доставленным в цитозоль, индуцировала более высокие уровни экспрессии IFN-β в DC по сравнению с ВИЧ отдельно и ВИЧ в сочетании с экзогенно доставленным cGAMP (фиг. 6B).Более высокие уровни IFN-β, экспрессируемые ДК, подвергшимися воздействию ВПГ/ВИЧ, по сравнению с уровнями, индуцированными ВИЧ в сочетании с эндогенным цГАМФ, указывают на то, что другие сигнальные пути/факторы могут быть вовлечены в противовирусный ответ в дополнение к пути цГАМФ/STING. Примечательно, что высокие уровни IFN-β, вызванные двойным воздействием, не препятствовали заражению ВИЧ в ДК, поскольку воздействие как cGAMP, так и ВИЧ/ВПГ вызывало высокие уровни рвотного рефлекса ВИЧ (рис. 6B).
Рисунок 6 . Нуклеотиды внутриклеточного происхождения HSV-2 являются основными факторами, участвующими в усилении ВИЧ-инфекции в ДК. (A) Незрелые DC подвергались воздействию TLR2 или агонистов TLR3 отдельно или в комбинации с ВИЧ в течение 16 часов или подвергались воздействию HSV-2 (HSV) в течение 2 часов, а затем ВИЧ в течение 16 часов. Транскрипт gag ВИЧ, экспрессию IL1-β, TNF и IFN-β оценивали с помощью количественной ПЦР. (B) cGAMP вводили напрямую или доставляли через DOTAP в DC отдельно или вместе с ВИЧ в течение 16 часов, или DC подвергали воздействию HSV в течение 2 часов с последующим воздействием ВИЧ в течение 16 часов. Транскрипт gag ВИЧ, экспрессию IL1-β, TNF и IFN-β оценивали с помощью ПЦР.Данные транскрипта gag ВИЧ были нормализованы к набору ВИЧ как 1, а данные TNF, IL1-β, IFN-β были нормализованы к фиктивному набору как 1. * p < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Двойное воздействие ВПГ/ВИЧ на ДК, которые активировали и впоследствии снизили уровни белков сенсоров цитозольной ДНК и факторов, участвующих в их сигнальных путях
Оценивали влияние ВПГ-2 на межклеточные сенсоры в ДК. Анализ транскриптома показал, что экспрессия сенсоров цитозольной ДНК и РНК AIM2, MB21D1 (cGAS), IFIh2, DDX58 (RIG1) и ZBP1 (DAI) была сильно повышена, а IFI16 был слегка повышен в ДК, подвергшихся воздействию только ВИЧ, и в Двойные открытые DC.Экспрессия MAVS, DDX41 и DHX9 снижалась или не изменялась при различных состояниях ВИЧ и ВПГ/ВИЧ (рис. 7А). Некоторые вирусы, включая вирусы герпеса, обладают способностью регулировать факторы клеточных врожденных и адаптивных ответов путем вмешательства в передачу сигнала или деградацию белков. Например, ICP27 HSV1 ингибирует экспрессию IFN I типа в макрофагах человека путем взаимодействия с STING/TBK1 (56). Литическая реактивация герпесвируса, ассоциированного с саркомой Капоши, вызывает деградацию IFI16 (25), а STING расщепляется протеазой вируса денге (57).Более того, стимуляция врожденных сигнальных путей, например, STING, TBK1 и IRF3, может привести к подавлению белков после активации противовирусных реакций патогенами (58–60). В свете этого мы оценили уровни белка нескольких ДНК-сенсоров и сигнальных молекул в ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ, ВПГ или ВИЧ/ВПГ, соответственно, и обнаружили, что только ВПГ и двойное воздействие вируса значительно снижали экспрессию ДНК-сенсоров IFI16. , и cGAS, оба активатора пути STING, что ясно указывает на то, что это был прежде всего эффект, полученный от HSV (фиг. 7B).Не было никаких существенных различий в эффектах, наблюдаемых с опсонизацией или без нее. Затем мы исследовали экспрессию белка факторов пути STING и не обнаружили значительного влияния на белок STING, даже если существовала четкая тенденция к снижению белка STING для ВИЧ/ВПГ, но нижележащий фактор STING TBK1 был значительно снижен, а наблюдалась тенденция к снижению экспрессии IRF3 в DC с двойным воздействием по сравнению с одним ВИЧ (рис. 7C). В совокупности эти данные указывают на то, что протеолитическая деградация этих белков индуцируется в первую очередь ВПГ и может происходить в ДК, подвергшихся воздействию ВПГ-2, либо в результате прямого воздействия вирусных белков, либо из-за вирусной активации путей, включающих эти факторы, что впоследствии приводит к к их деградации (58).
Рисунок 7 . ВИЧ-инфекция ДК, вызванная ВПГ-2, индуцировала активацию и деградацию цитозольных ДНК-сенсоров. Дендритные клетки подвергали воздействию свободного HSV-2 (HSV) или комплементопсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 часов, а затем инфицировали ВИЧ или комплементопсонизированным ВИЧ (CHIV) в течение 22 часов. (A) Тепловая карта по противовирусным факторам, значительно повышающая или понижающая регуляцию в одной или нескольких группах DC ВИЧ, CHIV, HSV/HIV или CHSV/CHIV DC по сравнению с DC, обработанными имитацией, с помощью РНК seq. (B) Уровни IFI16 и cGAS в ДК при различных условиях инфекции путем окрашивания клеток и анализа с помощью проточной цитометрии. (C) Уровни STING, TBK1 и IRF3 в ДК при различных условиях инфекции путем окрашивания клеток и анализа с помощью проточной цитометрии. *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Активация пути STING была необходима для усиления ВИЧ-инфекции ДК, индуцированной ВПГ-2
Путь STING активируется восходящими сенсорами ДНК, такими как cGAS и IFI16, оба реализуются в цитозольном распознавании ДНК HSV (27, 61). Кроме того, недавние данные указывают на сотрудничество между IFI16 и cGAS в активации STING (62), при этом IFI16 и cGAS играют разные роли в противовирусных реакциях против вирусов герпеса (63).Примечательно, что в других исследованиях утверждается, что cGAS является основным сенсором двухцепочечной ДНК, ответственным за активацию пути STING/TBK/IRF3 (29, 64). Здесь мы оценили роль cGAS/IFI16 в усилении ВИЧ-инфекции в ДК, обусловленных ВПГ-2, с использованием ингибирующего олигодезоксинуклеотида A151 (65). Первоначально предполагалось, что внутриклеточный A151 ингибирует IFI16, но недавние открытия показали, что он также влияет на активность cGAS (65, 66). Ингибирующий олигодезоксинуклеотид A151 немного увеличивал ВИЧ-инфекцию, оцениваемую по транскрипту gag в ранний момент времени (8 ч) в ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ и ВПГ/ВИЧ.Через 24 часа не было различий между обработанными A151 и необработанными ДК с двойной экспозицией (рис. 8А). Интересно, что ингибирующий олигодезоксинуклеотид A151 снижал экспрессию мРНК IFN-β в условиях HSV/HIV как через 8, так и через 24 часа (фиг. 8A). Чтобы подтвердить цитозольный результат A151, мы также проверили эффект цитозольной доставки белка герпеса UL83, который обладает способностью вмешиваться в функции IFI16 (67) и cGAS (68), в ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ или ВПГ/ВИЧ. UL83 показал тот же профиль, что и A151, для кляпа ВИЧ и экспрессии транскрипта мРНК IFN-β (рис. 8; дополнительная фигура 6).Данные показали, что ингибирования cGAS/IFI16 ингибирующим олигодезоксинуклеотидом A151 или UL83 было недостаточно для подавления усиленной ВИЧ-инфекции, но удалось снизить, но не полностью подавить ответ IFN-β, поэтому мы не могли исключить остаточную активность. этих путей в ДК. Для дальнейшего изучения роли пути STING в усилении инфекции и усилении противовирусного ответа в DC с двойным воздействием мы нацелились на белок STING, используя рекомбинантный белок HPV 18 E7, который, как известно, ингибирует этот путь, связывая и блокируя STING (69, 70).Внутриклеточно доставленный E7 успешно снижал экспрессию транскрипта gag и IFN-β в ДК с двойной инфекцией. Однако снижение было незначительным для кляпа, но можно было увидеть тенденцию (рис. 8B). Затем, чтобы проверить и усилить роль STING, мы оценили роль пути STING, используя клеточную линию THP1, лишенную sting из-за нокаута STING с помощью siRNA, и обнаружили снижение экспрессии gag в клетках, подвергшихся воздействию ВИЧ/ВПГ, но не нашли четких доказательств этого в CHSV/CHIV (рис. 8C), что может быть связано с низким уровнем CR3 у THP1.Взятые вместе, наши результаты показывают, что путь STING участвует в усилении ВИЧ-инфекции в DC, подвергшихся воздействию HSV-2.
Рисунок 8 . Путь STING был вовлечен в усиленную ВИЧ-инфекцию DC, подвергшихся воздействию HSV-2. Ингибирующий IFI16/cGAS олигонуклеотид A151 доставляли внутриклеточно с помощью DOTAP в DC. Затем клетки подвергали воздействию свободного HSV-2 (HSV) или комплемент-опсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 часов до заражения ВИЧ или комплемент-опсонизированного ВИЧ (CHIV) в течение (A) 6 часов (B) или 22 часов. (B) Ингибитор белка STING Белки HPV 18 E7 доставляли внутриклеточно с помощью DOTAP в DC. Затем клетки подвергали воздействию свободного HSV или CHSV в течение 2 часов перед заражением ВИЧ или CHIV в течение 22 часов. Транскрипт gag ВИЧ и экспрессию IFN-β оценивали с помощью количественной ПЦР. (C) Клетки THP1 с нокаутом STING или клетками дикого типа подвергались воздействию свободного HSV-2 или комплементопсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 часов, затем инфицировались ВИЧ или комплементопсонизированным ВИЧ (CHIV) в течение 22 часов. Транскрипт gag ВИЧ и экспрессию IFN-β оценивали с помощью количественной ПЦР.Данные кляпа ВИЧ были нормализованы к набору свободных вирусов, равному 1, а данные IFN-β были нормализованы к набору фиктивных вирусов, равному 1. * p < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Усиление ВИЧ-инфекции в ДК, обусловленных ВПГ-2, вероятно, было связано со снижением уровней регуляторных факторов ВИЧ как следствие активации пути cGAS-STING
Профили транскриптома четко продемонстрировали комбинированные эффекты воздействия ВПГ-2 и ВИЧ на многие основные регуляторы ВИЧ-инфекции в ДК, включая SAMHD1, TREX, APOBEC3G, PPIA (циклофилин А) и BST2 (тетерин) (рис. 9А).Экспрессия генов большинства регуляторных факторов ВИЧ была увеличена в ДК, инфицированных ВИЧ отдельно или в сочетании с ВПГ-2, по сравнению с контролем, тогда как экспрессия SAMHD1 была снижена. Кроме того, BST2 был немного снижен в группе CHIV/CHSV. Инфекция ВПГ-2 может модулировать экспрессию нескольких белков (25, 71), а активация противовирусных и врожденных путей может влиять на экспрессию и уровни белков, поэтому мы изучили влияние воздействия ВПГ-2 на уровни белков регуляторов ВИЧ. в ДК.Уровни белка SAMHD1, APOBEC3G и TREX1 были значительно ниже в одиночных HSV и CHSV и в ДК с двойным воздействием HSV/HIV и CHIV/CHSV по сравнению с ложно обработанными клетками. ВИЧ и CHIV не влияли на эти факторы или оказывали минимальное влияние (рис. 9В). Затем мы оценили, зависело ли снижение регуляторных факторов ВИЧ от внутриклеточной активации пути cGAS-STING с помощью двухцепочечной ДНК, полученной из HSV-2, с использованием cGAMP, который продуцируется после активации cGAS двухцепочечной ДНК (61, 72). DC, подвергшиеся воздействию как цитозольного cGAMP, так и ВИЧ, имели более низкие уровни белка как SAMHD1, так и TREX1 по сравнению с DC, подвергшимися воздействию только ВИЧ (рис. 9C).В случае APOBEC3G на экспрессию не влиял cGAMP, что указывает на более сложную активацию и/или протеолиз, индуцированную факторами, полученными из HSV-2, по сравнению с одним только cGAMP (фиг. 9C). Эти результаты демонстрируют, что путь cGAS-STING, активируемый интактной ДНК HSV-2, способствует опосредованному HSV-2 усилению ВИЧ-инфекции в ДК за счет снижения количества нескольких ключевых регуляторных факторов ВИЧ.
Рисунок 9 . Активация пути STING в ДК с двойной инфекцией снижала уровни белков нескольких факторов рестрикции ВИЧ.Дендритные клетки подвергали воздействию свободного HSV-2 или комплементопсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 часов, а затем инфицировали ВИЧ или комплементопсонизированным ВИЧ (CHIV) в течение 22 часов. (A) Тепловая карта из данных транскриптома РНК seq внутриклеточных сенсоров, значительно повышающая или понижающая регуляция в одном или нескольких состояниях инфекции ВИЧ, CHIV, HSV/ВИЧ или CHSV/CHIV по сравнению с ложно обработанными ДК. (B) Уровни SAMHD1, ABOBEC3G и TREX1 в ДК при различных условиях инфекции оценивали путем окрашивания клеток и анализировали с помощью проточной цитометрии. (C) cGAMP вводили экзогенно или доставляли внутриклеточно через DOTAP в DC, после чего DC оставляли без воздействия или подвергали воздействию вместе с ВИЧ в течение 16 часов. Кроме того, одна группа ДК подвергалась воздействию ВПГ в течение 2 часов, а затем ВИЧ или ВПЧ в течение 16 часов. Уровни SAMHD1, ABOBEC3G и TREX1 оценивали путем окрашивания клеток и анализировали с помощью проточной цитометрии. * р < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Обсуждение
Более глубокое понимание факторов, влияющих на ВИЧ-инфекцию, имеет большое значение, и было показано, что ранее существовавшая инфекция и/или воспаление слизистой оболочки половых органов повышают риск заражения ВИЧ.В случае ВПГ-2 риск заражения ВИЧ-инфекцией возрастает в три раза (2, 9, 14). Во время первичной ВИЧ-инфекции слизистых оболочек ВПГ-2, как инфекционные, так и нейтрализованные вирусы, а также остатки отмирающих инфицированных клеток будут влиять на локальные врожденные и адаптивные иммунные реакции. ДК, расположенные в слизистой оболочке, являются одними из первых клеток-мишеней для ВИЧ. Здесь мы стремились установить эффекты, вызванные кондиционированием DCs HSV-2 до заражения ВИЧ. Мы обнаружили более высокую восприимчивость и уровень продуктивной ВИЧ-инфекции в ДК, подвергшихся воздействию ВПГ-2, что зависело от структурно интактной ДНК ВПГ-2 в ДК.Примечательно, что высокие уровни продукции IFN-β, вызванные в ДК воздействием ВПГ-2, не смогли контролировать инфекцию, поскольку IFN-β увеличивался параллельно с увеличением ВИЧ-инфекции в ДК с двойным воздействием. Эффект HSV-2 на репликацию ВИЧ в ДК не зависел от TLR2, TLR3 или IFI16, все три PRR, которые, как известно, активируются вирусом герпеса (55), а скорее от активации пути cGAS-STING и последующего снижения белка. уровни нескольких ключевых регуляторов ВИЧ-инфекции, т.е. TREX1, SAMHD1 и ABOBEC3G, что может быть связано с протеолитической деградацией.
ДК, расположенные в слизистой оболочке, считаются мишенью для ВИЧ-1, что было показано на макаках, инфицированных ВИО, и на слизистой оболочке шейки матки и крайней плоти in vitro (73–75). Первоначальное взаимодействие вируса-хозяина в слизистой оболочке также включает активацию системы комплемента (19), и как врожденный, так и адаптивный иммунитет находятся под влиянием системы комплемента, и комплемент может быть вовлечен в патогенез хронических заболеваний (76). Вирионы, передаваемые при половой передаче в ДК, должны быть комплементарными и/или комплементарными антителами, опсонизированными частицами, наблюдаемыми при контакте с семенной жидкостью и/или секретами шейки матки (19).Результаты нашего исследования с использованием ДК, происходящих из моноцитов, которые мы считаем хорошей моделью для in vivo ДК ткани/слизистой оболочки, обнаружив аналогичные результаты для свободной и комплементарной опсонизированной инфекции ВИЧ-1 и для инфекции ВПГ-2 в ДК слизистой оболочки шейки матки. [(75) и Svanberg et al. работа в процессе]. ДК, происходящие из моноцитов, которые мы использовали, по-видимому, похожи на недавно определенные эпидермальные ДК CD11c+, которые являются мишенью для ВИЧ-инфекции (77). Эпидермальные CD11c+ DC и клетки Лангерганса могут играть важную роль в передаче ВИЧ-1 половым путем (8, 77).Тот факт, что лишь несколько процентов ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ и ВПГ-2, продуктивно инфицированы обоими вирусами (8), ясно указывает на то, что усиленная ВИЧ-инфекция ДК требовала воздействия только вирионов ВПГ-2 или ДНК, полученной из вируса. Это создаст среду, в которой ранее существовавшая инфекция ВПГ-2 привлекает и обеспечивает больше клеток-мишеней для ВИЧ, например, Т-клетки CD4 и ДК (2, 8, 9), а также среду с микрообластями с ВПГ-2, провоспалительные цитокины и ДНК ВПГ-2, высвобождаемые умирающими клетками.В совокупности все эти факторы обуславливают предкондиционирование ДК слизистых оболочек и делают их более восприимчивыми к продуктивной ВИЧ-инфекции.
Первоначальный анализ транскриптома показал, что все инфекционные состояния имели различные профили экспрессии с некоторым сходством между состояниями со свободными вирусами, т. е. ВИЧ и ВИЧ/ВПГ, и между вирусами с комплементарной опсонизацией, т. е. CHIV и CHIV/CHSV. Многочисленные пути, участвующие в противовирусных и воспалительных реакциях, были сильно затронуты в ДК, инфицированных свободным ВИЧ или комплемент-опсонизированным или неопсонизированным ВПГ/ВИЧ, тогда как комплемент-опсонизированные вирусы в целом активировали меньшее количество путей.Эффективное подавление активации ДК с помощью опсонизированного комплементом ВИЧ должно быть в первую очередь связано с подавлением врожденных и адаптивных путей, опосредованных передачей сигналов рецептора комплемента 3 (CR3), задействованных инактивированным фрагментом C3b на поверхности вируса (20). Прекондиционирование ДК с помощью ВПГ-2 с последующей ВИЧ-инфекцией явно потенцировало активацию ДК по сравнению с одной только ВИЧ-инфекцией. Это должно зависеть в первую очередь от сильной и продолжительной активации, вызванной ВПГ-2, поскольку сам по себе ВИЧ вызывает слабую и более временную активацию ДК.
Наблюдалась массовая активация транскрипции воспалительных и противовирусных факторов в ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ/ВПГ, однако это не полностью отражалось на уровне белка, без каких-либо изменений или даже со снижением уровня некоторых белков. Это соответствует нашим предыдущим наблюдениям для ДК, инфицированных ВПГ-2 (18). Это несоответствие может быть вызвано несколькими причинами, такими как посттранскрипционная модификация, деградация белками, происходящими от ВПГ-2 (25, 56), и/или целенаправленная протеолитическая деградация белков, участвующих в клеточных процессах, вследствие активации вирусами клеточного стресса, такого как аутофагия и постпатогенная активация, подавление факторов.Вирусы герпеса обладают широким спектром стратегий уклонения от врожденного иммунного восприятия и повышения собственной выживаемости. Общие стратегии, используемые вирусами герпеса, заключаются в ингибировании или деградации белков, участвующих в противовирусных иммунных реакциях (25, 48, 78). Некоторые белки ВПГ и вирусные некодирующие РНК могут модулировать экспрессию белка, например, предполагается, что белок UL41, кодируемый ВПГ, обладает способностью вызывать быстрое и избирательное отключение синтеза белка в клетке-хозяине для нескольких белков, включая гадюку, и тетерин (79–82).
Было показано, что множественные PRR участвуют в клеточном распознавании и защите от герпесвирусов (55), когда мы тестировали TLR2 и TLR3, мы не обнаружили, что ни один из этих TLR не участвует в повышенной ВИЧ-инфекции, наблюдаемой в обусловленных ВПГ-2 ДК. Вместо этого недавние сообщения указывают на активацию пути STING и его важную роль в противовирусной защите против HSV (83, 84). певческий каскад STING может пересекаться как с TBK1/IRF3, так и с NFκB путем (85–87). В активации STING участвуют несколько ДНК-сенсоров, таких как IFI16, DDX41 и cGAS, но накопленные данные ясно показали, что cGAS-сенсор необходим для большинства типов клеток.Это верно, даже если существует взаимодействие в активации STING между IFI16 и cGAS в кератиноцитах (62), и IFI16 способствует продукции cGAS cGAMP в макрофагах человека (72). Все наши данные указывают на активацию пути cGAS STING в ДК с двойной инфекцией. Когда дело доходит до повышенного уровня ВИЧ-инфекции, мы можем исключить участие IFI16, поскольку блокирование этого фактора не привело к снижению ВИЧ-инфекции, в то время как прямое нацеливание на STING помогло сделать то же самое. Опять же, мы не можем исключить участие IFI16 в обнаружении двойной инфекции и сотрудничество этого сенсора с cGAS в активации противовирусных ответов IFN-β, поскольку блокировка IFI16 снижала ответ IFN-β.Важная роль IFI16 в восприятии внутриклеточной ДНК ранее была показана в макрофагах человека посредством усиления продукции и функции cGAMP (72).
ВИЧ-инфекция ДК строго регулируется и ограничивается множеством противовирусных факторов, таких как SAMHD1, APOBEC3G, TRIM5α, SLFN11 и IFITM, которые проявляют свои эффекты на разных этапах цикла репликации ВИЧ (88–90). Эти факторы контролируют или подавляют способность ВИЧ индуцировать продуктивную инфекцию SAMHD1 как основного супрессивного фактора ВИЧ (90, 91).SAMHD1 ингибирует ранние стадии ВИЧ-инфекции, ограничивая синтез вирусной кДНК за счет истощения дезоксинуклеотидтрифосфатов (dNTP) (90), а деградация SAMHD1 с помощью VPX ВИЧ-2 приводит к усилению инфекции DC и продукции IFN I типа (91). ВИЧ использует 3′-репарирующую экзонуклеазу 1 хозяина (TREX1), наиболее распространенную 3′-5′ ДНКазу в клетках, для связывания и деградации избытка цитозольной дцДНК ВИЧ-1 и, таким образом, ограничения ответа IFN I типа (88). Было показано, что в дополнение к ограничению ВИЧ-инфекции SAMHD1 и TRIM5α также участвуют в регуляции инфекции HSV-1 путем ограничения репликации ДНК (92, 93).Мы обнаружили высокую степень протеолитической деградации нескольких факторов рестрикции ВИЧ-1, включая SAMHD1, IFI16, TREX1 и APOBEC3G (88–90), в ДК с двойным воздействием. Субоптимальные уровни нескольких ключевых рестрикционных факторов могут объяснить потерю контроля ДК над ВИЧ-инфекцией и усиление продуктивной ВИЧ-инфекции в ДК. Интересно, что активация пути cGAS-STING в ДК параллельно с воздействием ВИЧ индуцировала деградацию SAMHD1 и TREX1, но не APOBEC3G.Более того, внутриклеточная активация пути cGAS-STING с помощью cGAMP оказывала такое же влияние на репликацию ВИЧ и выработку цитокинов, как и предварительное кондиционирование с помощью HSV-2, что указывает на существенную роль этого пути в клеточной модуляции HSV-2 функций DC. Активация пути STING в ДК, подвергшихся воздействию как ВИЧ, так и ВПГ-2, должна впоследствии привести к накоплению большего количества нуклеотидов в цитозоле из-за более низких уровней 3′-5′-экзонуклеазы TREX1 и фосфогидролазы SAMHD1, которые должны поддерживать вирусная репликация.Отсутствие деградации APOBEC3G экзогенной активацией STING cGAMP указывает на то, что в этом были задействованы другие процессы/факторы, индуцированные HSV-2, и какие именно факторы еще предстоит установить, но они могут включать факторы, полученные из HSV, или факторы, активированные воздействием вируса. Например, открытие Marsden et al. тот факт, что TNF, продуцируемый DC, подвергшимися воздействию HSV-2, был вовлечен в усиленную ВИЧ-инфекцию сторонних DC (8), указывает на то, что TNF может быть одним из факторов, участвующих в распространении ВИЧ-инфекции в DC.
Многие цитозольные ДНК-сенсоры и кофакторы, т. е. IFI16, cGAS, STING, TBK1 и IRF3, важные для распознавания вирусных PAMP, также были нацелены на деградацию в ДК, подвергшихся двойному воздействию ВИЧ и ВПГ-2, но не подвергшихся воздействию ВИЧ. ДК, демонстрирующие прямое и/или косвенное участие ВПГ-2 в этом процессе. Снижение количества некоторых белков, участвующих в пути STING, например, IFI16, cGAS, STING, TBK1 и IRF3, вероятно, было связано с вирусной активацией пути STING (58, 94) и/или прямой деградацией белками вирусного происхождения (95). .Чтобы разобраться в этом, необходимы будущие исследования, изучающие фосфорилирование и локализацию этих белков. Некоторые белки ДНК-вируса могут расщеплять или разрушать сенсоры ДНК. Например, сенсор dsDNA IFI16, который активирует ответы IFN-β и образует инфламмасому, деградирует в клетках, инфицированных HSV-1, путем нацеливания на протеасомы ICP0 (48) и в клетках с литической саркомой Капоши, ассоциированной с герпесвирусной инфекцией (25). STING и cGAS также являются обычными мишенями для ДНК-вирусных белков, которые разрушают эти факторы или препятствуют их последующей передаче сигналов (57, 70, 96-98).В ДК с двойным воздействием уровни цГАС были ниже по сравнению с неинфицированными или одиночными ВИЧ-инфицированными клетками, что должно снижать продукцию цГАМФ и активацию STING в результате клеточной регуляции и контроля этого фактора после активации ( 56). Несколько вирусов обнаруживаются и регулируются путем STING, включая ВПГ-1, ВПГ-2 и ВИЧ-1 (29, 56). ДНК ВИЧ-1 можно обнаружить с помощью cGAS и пути STING (29), однако этому противодействует и предотвращается капсид ВИЧ-1 за счет рекрутирования клеточных белков, т.е.g., циклофилин А и TRIM5α (99). HSV-1 противодействует пути STING-cGAS с помощью нескольких белков, включая ICP27, который может ингибировать экспрессию IFN типа I, воздействуя на сигнальный комплекс STING (56). Ясно, что и ВИЧ, и ВПГ-2 регулируются STING-путем и развили стратегии для установления инфекции путем подавления активации STING и последующего ответа IFN I типа.
Мы обнаружили и ранее показали (20), что в ДК, происходящих из моноцитов, воздействие только ВИЧ-1 действительно вызывает всплеск низкого уровня IFN-β, этот ответ является временным и слабым по сравнению со многими другими вирусами, включая ВПГ-2 (18).Мы считаем, что этот вывод соответствует предыдущим исследованиям Harman et al. и Gringhuis et al. которые демонстрируют, что ВИЧ-1 обладает способностью с помощью нескольких механизмов препятствовать выработке IFN-β и избегать противовирусной защиты хозяина (100–102). Двойное воздействие индуцировало высокий уровень противовирусного фактора IFN-β и последующего ISG, такого как MX1 и MX2, в DC через активацию ДНК HSV-2 пути STING. Высокий уровень продукции IFNβ в двойных свободных и комплементарно опонизированных ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ/ВПГ, не смог блокировать ВИЧ-инфекцию, но ясно, что он подавлял инфекцию, видя, что ВИЧ-инфекция была еще больше повышена в ДК, где IFN-β был подавлен. путем ингибирования ДНК-сенсора IFI16.Это продемонстрировало уравновешивающее действие пути STING, играющего роль как в усилении ВИЧ-инфекции, так и в контроле уровня инфекции путем активации IFN I типа. Ранее мы установили, что ВИЧ-1 может индуцировать продукцию IFN-β в ДК зависимым от IRF1/7 образом, тогда как комплемент опсонизировал ВИЧ, активируя IRF3, но это не приводило к продукции IFN-β или вызывало очень низкую продукцию (20). Вероятно, это связано с индуцированной CR3 супрессией вирусом, подвергнутым комплементарной опсонизации, и с тем, что супрессия CR3 IFN-β подавляется сильной активацией, которую HSV-2 индуцирует в DC.
Мы ясно продемонстрировали, что зависимое от HSV-2 усиление ВИЧ-инфекции требовало интактной двухцепочечной ДНК HSV-2, но не активной репликации ДНК HSV. Клеточная поддержка продуктивной ВИЧ-инфекции должна осуществляться за счет регуляции и протеолитической деградации факторов рестрикции ВИЧ, т. е. SAMHD1, APOBEC3G, IFI16 и TREX1. Механизм, ответственный за протеолитическую деградацию белков SAMHD1, TREX1 и APOBEC3G, по-видимому, облегчается активацией пути STING, который, насколько нам известно, до сих пор не описан, и эффектом одного или нескольких белков HSV-2. .Деградация нескольких регуляторных факторов ВИЧ, наблюдаемая, когда мы активировали STING через путь cGAMP-cGAS путем добавления экзогенного cGAMP, подтверждает роль пути STING в деградации этих белков в ДК, подвергшихся воздействию двойного ВИЧ-ВПГ. Кроме того, противовирусные и воспалительные пути, активируемые одним ВИЧ или двойным воздействием ВИЧ/ВПГ, имели различную форму в присутствии или отсутствии молекул комплемента. Эти данные показали, что внутриклеточное репрограммирование ВПГ-2 усиливает способность ВИЧ инфицировать ДК и обеспечивает кондиционированное микроокружение, благоприятное для передачи ВИЧ и установления инфекции.
Заявление о доступности данных
Наборы данных, созданные для этого исследования, можно найти в GEO — номер доступа GSE140612. Другие необработанные данные, подтверждающие выводы этой рукописи, будут предоставлены авторами без неоправданных оговорок любому квалифицированному исследователю.
Заявление об этике
Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Шведским советом по этике. Разрешения на этику M173-07 и M75-08/2008. Письменное информированное согласие на участие в этом исследовании не требовалось в соответствии с национальным законодательством и институциональными требованиями.
Вклад авторов
Исследования, разработанные ЕС, CS и ML. EC, RE, CS, PB, MK, JH и SN провели исследование. KE предоставила новые реагенты и аналитические инструменты. KO, EC, RE, CS, KE, ES и ML проанализировали данные. EC, KE, CS, ES и ML написали статью. ML руководил проектом.
Финансирование
Эта работа поддержана: AI52731, Шведским исследовательским советом, Шведским фондом исследований врачей против СПИДа, Шведским агентством по международному сотрудничеству в целях развития, SIDA SARC, VINNMER for Vinnova, Исследовательским фондом университетской больницы Линчепинга, CALF, Шведским медицинским обществом. , и Совет медицинских исследований Юго-Восточной Швеции для ML.
Конфликт интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Расчеты для RNAseq были выполнены на ресурсах, предоставленных SNIC через Многопрофильный центр передовых вычислительных наук Упсалы (UPPMAX) в рамках проекта b2015293.
Дополнительный материал
Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2019.02889/full#supplementary-material
Каталожные номера
2. Фриман Э.Э., Вайс Х.А., Глинн Дж.Р., Кросс П.Л., Уитворт Дж.А., Хейс Р.Дж. Инфекция, вызванная вирусом простого герпеса 2, увеличивает риск инфицирования ВИЧ у мужчин и женщин: систематический обзор и метаанализ продольных исследований. СПИД . (2006) 20:73–83. doi: 10.1097/01.aids.0000198081.09337.a7
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
3. Уолд А., Линк К.Риск инфицирования вирусом иммунодефицита человека у лиц, инфицированных вирусом простого герпеса 2 типа: метаанализ. J Заразить Dis . (2002) 185:45–52. дои: 10.1086/338231
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
6. Schiffer JT, Swan DA, Corey L, Wald A. Быстрая вирусная экспансия и короткий период полувыведения лекарства объясняют неполную эффективность современных противовирусных препаратов против вируса простого герпеса 2. Антимикробные агенты Chemother . (2013) 57:5820–9.doi: 10.1128/AAC.01114-13
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
7. Шиффер Дж.Т., Свон Д.А., Магарет А., Шакер Т.В., Уолд А., Кори Л. Математическое моделирование предсказывает, что повышенное выделение ВПГ-2 у ВИЧ-1 инфицированных лиц связано с плохим иммунологическим контролем в ганглиях и слизистой оболочке половых органов. ПЛОС ОДИН . (2016) 11:e0155124. doi: 10.1371/journal.pone.0155124
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
8. Марсден В., Донахи Х., Бертрам К.М., Харман А.Н., Наср Н., Кеошкериан Э. и соавт.Дендритные клетки, инфицированные вирусом простого герпеса типа 2, продуцируют TNF-альфа, который усиливает экспрессию CCR5 и стимулирует продукцию ВИЧ соседними инфицированными клетками. Дж Иммунол . (2015) 194:4438–45. doi: 10.4049/jimmunol.1401706
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
9. де Йонг М.А., де Витте Л., Тейлор М.Е., Гейтенбек Т.Б. Вирус простого герпеса типа 2 повышает восприимчивость к ВИЧ-1, влияя на функцию клеток Лангерганса. Дж Иммунол . (2010) 185:1633–41.doi: 10.4049/jimmunol.0
7
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
10. Sartori E, Calistri A, Salata C, Del Vecchio C, Palu G, Parolin C. Вирус простого герпеса типа 2 увеличивает проникновение вируса иммунодефицита человека типа 1 в первичные макрофаги человека. Вирол Дж . (2011) 8:166. дои: 10.1186/1743-422X-8-166
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
11. Rebbapragada A, Wachihi C, Pettengell C, Sunderji S, Huibner S, Jaoko W, et al.Отрицательная синергия слизистых оболочек между Herpes simplex типа 2 и ВИЧ в женских половых путях. СПИД . (2007) 21:589–98. дои: 10.1097/QAD.0b013e328012b896
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
12. Zhu J, Hladik F, Woodward A, Klock A, Peng T, Johnston C, et al. Сохранение клеток, положительных по рецептору ВИЧ-1, после реактивации ВПГ-2 является потенциальным механизмом повышенного заражения ВИЧ-1. Nat Med . (2009) 15:886–92. doi: 10,1038/нм.2006
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
13. Martinelli E, Tharinger H, Frank I, Arthos J, Piatak M Jr, Lifson JD, et al. Инфекция ВПГ-2 дендритных клеток амплифицирует высокочувствительные клетки-мишени ВИЧ-1. Патог PLoS. (2011) 7:e1002109. doi: 10.1371/journal.ppat.1002109
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
14. Goode D, Truong R, Villegas G, Calenda G, Guerra-Perez N, Piatak M, et al. Увеличение экспрессии альфа4бета7, вызванное ВПГ-2, коррелирует с повышенной восприимчивостью к вагинальной инфекции SHIV (SF162P3). PLoS Pathog . (2014) 10:e1004567. doi: 10.1371/journal.ppat.1004567
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
15. де Йонг М.А., де Витте Л., Аудхофф М.Дж., Грингхьюс С.И., Галлай П., Гейтенбек Т.Б. Агонисты TNF-альфа и TLR повышают восприимчивость к передаче ВИЧ-1 клетками Лангерганса человека ex vivo . Дж Клин Инвест . (2008) 118:3440–52. дои: 10.1172/JCI34721
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
16.Булал Х., Чомонт Н., Хеффнер-Кавайон Н., Казачкин М.Д., Белек Л., Хочини Х. Опсонизация ВИЧ-1 комплементом спермы усиливает инфекцию эпителиальных клеток человека. Дж Иммунол . (2002) 169:3301–6. doi: 10.4049/jimmunol.169.6.3301
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
17. Reis Machado J, da Silva MV, Cavellani CL, dos Reis MA, Monteiro ML, Teixeira Vde P, et al. Мукозальный иммунитет в женских половых путях, ВИЧ/СПИД. Биомед Рез Инт .(2014) 2014:350195. дои: 10.1155/2014/350195
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
18. Crisci E, Ellegard R, Nystrom S, Rondahl E, Serrander L, Bergstrom T, et al. Опсонизация комплемента способствует инфицированию дендритных клеток человека вирусом простого герпеса 2 типа. Дж Вирол . (2016) 90:4939–50. doi: 10.1128/ОВИ.00224-16
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
19. Штойбер Х., Банки З., Вилфлингседер Д., Дирих М.П.Взаимодействие комплемента с ВИЧ на всех этапах вирусного патогенеза. Вакцина . (2008) 26:3046–54. doi: 10.1016/j.vaccine.2007.12.003
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
20. Ellegard R, Crisci E, Burgener A, Sjowall C, Birse K, Westmacott G, et al. Опсонизация комплемента ВИЧ-1 приводит к снижению противовирусного и воспалительного ответа в незрелых дендритных клетках через CR3. Дж Иммунол . (2014) 193:4590–601. doi: 10.4049/иммунол.1401781
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
21. Байтай З., Спет С., Эрдей А., Дирих М.П. Передний край: продуктивная инфекция ВИЧ-1 дендритных клеток через рецептор комплемента типа 3 (CR3, CD11b/CD18). Дж Иммунол . (2004) 173:4775–8. doi: 10.4049/jimmunol.173.8.4775
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
22. Saifuddin M, Parker CJ, Peeples ME, Gorny MK, Zolla-Pazner S, Ghassemi M, et al. Роль связанных с вирионом гликозилфосфатидилинозитол-связанных белков CD55 и CD59 в устойчивости к комплемента клеточных линий и первичных изолятов ВИЧ-1. J Exp Med . (1995) 182:501–9. doi: 10.1084/jem.182.2.501
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
23. Bouhlal H, Chomont N, Requena M, Nasreddine N, Saidi H, Legoff J, et al. Опсонизация ВИЧ комплементом усиливает инфицирование дендритных клеток и перенос вируса на CD4 Т-клетки зависимым от CR3 и DC-SIGN образом. Дж Иммунол . (2007) 178:1086–95. doi: 10.4049/jиммунол.178.2.1086
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
24.Melchjorsen J, Rintahaka J, Soby S, Horan KA, Poltajainen A, Ostergaard L, et al. Раннее врожденное распознавание вируса простого герпеса в первичных макрофагах человека опосредуется через MDA5/MAVS-зависимый и MDA5/MAVS/независимый от РНК-полимеразы III пути. Дж Вирол . (2010) 84:11350–8. doi: 10.1128/ОВИ.01106-10
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
25. Рой А., Датта Д., Икбал Дж., Писано Г., Гджиши О., Ансари М.А. и соавт. Сенсор ДНК ядерного врожденного иммунитета IFI16 деградирует во время литической реактивации герпесвируса, ассоциированного с саркомой Капоши (KSHV): роль IFI16 в поддержании латентности KSHV. Дж Вирол . (2016) 90:8822–41. doi: 10.1128/ОВИ.01003-16
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
26. Dutta D, Dutta S, Veettil MV, Roy A, Ansari MA, Iqbal J, et al. BRCA1 регулирует опосредованное IFI16 ядерное врожденное распознавание ДНК вируса герпеса и последующую индукцию врожденных воспалительных ответов и ответов интерферона-β. PLoS Pathog . (2015) 11:e1005030. doi: 10.1371/journal.ppat.1005030
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
27.Orzalli MH, Broekema NM, Diner BA, Hancks DC, Elde NC, Cristea IM, et al. cGAS-опосредованная стабилизация IFI16 способствует врожденной передаче сигналов во время инфекции, вызванной вирусом простого герпеса. Proc Natl Acad Sci USA . (2015) 112:E1773–81. doi: 10.1073/pnas.1424637112
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
28. Hansen K, Prabakaran T, Laustsen A, Jorgensen SE, Rahbaek SH, Jensen SB, et al. Listeria monocytogenes индуцирует экспрессию IFNβ через IFI16-, cGAS- и STING-зависимый путь. EMBO J . (2014) 33:1654–66. doi: 10.15252/embj.201488029
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
29. Gao D, Wu J, Wu YT, Du F, Aroh C, Yan N, et al. Циклическая GMP-AMP-синтаза является врожденным иммунным сенсором ВИЧ и других ретровирусов. Наука . (2013) 341:903–6. doi: 10.1126/наука.1240933
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
30. Jakobsen MR, Bak RO, Andersen A, Berg RK, Jensen SB, Tengchuan J, et al.IFI16 определяет формы ДНК цикла репликации лентивируса и контролирует репликацию ВИЧ-1. Proc Natl Acad Sci USA . (2013) 110:E4571–80. doi: 10.1073/pnas.1311669110
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
32. Schon E, Harandi AM, Nordstrom I, Holmgren J, Eriksson K. Вакцинация дендритными клетками защищает мышей от гибели, вызванной вирусом простого генитального герпеса 2 типа. J Reprod Immunol . (2001) 50:87–104. дои: 10.1016/S0165-0378(00)00094-2
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
33. Россио Дж.Л., Эссер М.Т., Сурьянараяна К., Шнайдер Д.К., Бесс Дж.В. мл., Васкес Г.М. и соавт. Инактивация инфекционности вируса иммунодефицита человека 1 типа с сохранением конформационной и функциональной целостности белков поверхности вириона. Дж Вирол . (1998) 72:7992–8001.
Реферат PubMed | Академия Google
34. Кутч О., Бенвенист Э.Н., Шоу Г.М., Леви Д.Н.Прямой и количественный одноклеточный анализ реактивации вируса иммунодефицита человека типа 1 из латентного периода. Дж Вирол . (2002) 76:8776–86. doi: 10.1128/ОВИ.76.17.8776-8786.2002
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
35. Леви Д.Н., Альдрованди Г.М., Кутч О., Шоу Г.М. Динамика рекомбинации ВИЧ-1 в его естественных клетках-мишенях. Proc Natl Acad Sci USA . (2004) 101:4204–9. doi: 10.1073/pnas.0306764101
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
36.Тьомсланд В., Эллегард Р., Че К., Хинкула Дж., Лифсон Дж. Д., Ларссон М. Опсонизация комплемента ВИЧ-1 усиливает поглощение дендритными клетками и включает семейства эндоцитарных лектиновых и интегриновых рецепторов. ПЛОС ОДИН . (2011) 6:e23542. doi: 10.1371/journal.pone.0023542
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
37. Vandesompele J, De Preter K, Pattyn F, Poppe B, Van Roy N, De Paepe A, et al. Точная нормализация количественных данных ОТ-ПЦР в реальном времени путем геометрического усреднения нескольких генов внутреннего контроля. Геном Биол. (2002) 3:0034. doi: 10.1186/gb-2002-3-7-research0034
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
39. Бабрахам-биоинформатика. FastQC: инструмент контроля качества для высокопроизводительных данных о последовательностях . Кембридж: Бабрахам-биоинформатика (2017).
Академия Google
41. Добин А., Дэвис К.А., Шлезингер Ф., Дренков Дж., Залески С., Джа С. и соавт. STAR: сверхбыстрый универсальный выравниватель RNA-seq. Биоинформатика .(2013) 29:15–21. doi: 10.1093/биоинформатика/bts635
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
42. Liao Y, Smyth GK, Shi W. featureCounts: эффективная программа общего назначения для присвоения считываний последовательностей геномным признакам. Биоинформатика . (2014) 30:923–30. doi: 10.1093/биоинформатика/btt656
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
44. Goldwich A, Prechtel AT, Muhl-Zurbes P, Pangratz NM, Stossel H, Romani N, et al.Вирус простого герпеса типа I (HSV-1) реплицируется в зрелых дендритных клетках, но может передаваться только в зависимости от межклеточного контакта. J Лейкок Биол . (2011) 89:973–9. doi: 10.1189/jlb.0310180
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
45. Abaitua F, Hollinshead M, Bolstad M, Crump CM, O’Hare P. Сигнал ядерной локализации в белке герпесвируса VP1-2 необходим для инфекции через капсидный путь к ядерной поре. Дж Вирол .(2012) 86:8998–9014. doi: 10.1128/ОВИ.01209-12
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
46. Миклоска З., Босняк Л., Каннингем А.Л. Незрелые дендритные клетки, происходящие из моноцитов, продуктивно инфицированы вирусом простого герпеса типа 1. J Virol . (2001) 75:5958–64. doi: 10.1128/ОВИ.75.13.5958-5964.2001
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
48. Orzalli MH, DeLuca NA, Knipe DM. Индукция ядерного IFI16 передачи сигналов IRF-3 во время герпесвирусной инфекции и деградация IFI16 вирусным белком ICP0. Proc Natl Acad Sci USA . (2012) 109:E3008–17. doi: 10.1073/pnas.1211302109
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
49. Liu Y, Li M, Zhang D, Zhang M, Hu Q. Гликопротеин gD HSV-2 нацелен на домен CC тетерина и способствует деградации тетерина через лизосомальный путь. Вирол Дж . (2016) 13:154. doi: 10.1186/s12985-016-0610-7
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
50. Усидзима Ю., Луо С., Камакура М., Гошима Ф., Кимура Х., Нишияма Ю.Вирус простого герпеса UL56 взаимодействует и регулирует убиквитинлигазу семейства Nedd4 Itch. Вирол Дж . (2010) 7:179. дои: 10.1186/1743-422X-7-179
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
51. Стефаниду М., Рамос И., Мас Касулло В., Трепанье Дж. Б., Розенбаум С., Фернандес-Сесма А. и соавт. Вирус простого герпеса 2 (ВПГ-2) предотвращает созревание дендритных клеток, индуцирует апоптоз и запускает высвобождение провоспалительных цитокинов: возможная связь с синергией ВПГ-ВИЧ. Дж Вирол . (2013) 87:1443–53. doi: 10.1128/ОВИ.01302-12
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
52. Сато А., Линехан М.М., Ивасаки А. Двойное распознавание вирусов простого герпеса с помощью TLR2 и TLR9 в дендритных клетках. Proc Natl Acad Sci USA . (2006) 103:17343–8. doi: 10.1073/pnas.0605102103
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
53. Свенссон А., Танбак П., Нордстрем И., Падюков Л., Эрикссон К.Полиморфизмы Toll-подобного рецептора 3 придают естественную устойчивость к вирусу простого герпеса человека типа 2. Дж Ген Вирол . (2012) 93:1717–24. doi: 10.1099/vir.0.042572-0
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
54. Triantafilou K, Eryilmazlar D, Triantafilou M. Индуцированная вирусом простого герпеса 2 активация в вагинальных клетках включает Toll-подобные рецепторы 2 и 9 и сенсоры ДНК DAI и IFI16. Am J Obstet Gynecol . (2014) 210:122.e1–10.doi: 10.1016/j.ajog.2013.09.034
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
56. Christensen MH, Jensen SB, Miettinen JJ, Luecke S, Prabakaran T, Reinert LS, et al. HSV-1 ICP27 нацеливается на активируемую TBK1 сигнальную сому STING, чтобы ингибировать вирус-индуцированную экспрессию IFN I типа. EMBO J . (2016) 35:1385–99. doi: 10.15252/embj.201593458
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
57. Aguirre S, Maestre AM, Pagni S, Patel JR, Savage T, Gutman D, et al.DENV ингибирует продукцию IFN I типа в инфицированных клетках путем расщепления STING человека. PLoS Pathog . (2012) 8:e1002934. doi: 10.1371/journal.ppat.1002934
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
58. Конно Х., Конно К., Барбер Г.Н. Циклические динуклеотиды запускают ULK1 (ATG1) фосфорилирование STING для предотвращения устойчивой передачи сигналов врожденного иммунитета. Сотовый . (2013) 155:688–98. doi: 10.1016/j.cell.2013.09.049
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
59.Хиггс Р., Ни Габханн Дж., Бен Ларби Н., Брин Э.П., Фицджеральд К.А., Джеффрис К.А. Убиквитинлигаза E3 Ro52 негативно регулирует продукцию IFN-бета после узнавания патогена посредством полиубиквитин-опосредованной деградации IRF3. Дж Иммунол . (2008) 181:1780–6. doi: 10.4049/jimmunol.181.3.1780
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
60. Cui J, Li Y, Zhu L, Liu D, Songyang Z, Wang HY, et al. NLRP4 негативно регулирует передачу сигналов интерферона типа I, нацеливаясь на киназу TBK1 для деградации через убиквитинлигазу DTX4. Нат Иммунол . (2012) 13:387–95. doi: 10.1038/ni.2239
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
62. Almine JF, O’Hare CA, Dunphy G, Haga IR, Naik RJ, Atrih A, et al. IFI16 и cGAS сотрудничают в активации STING во время распознавания ДНК в кератиноцитах человека. Нац Коммуна . (2017) 8:14392. doi: 10.1038/ncomms14392
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
63. Дайнер Б.А., Лум К.К., Тоттчер Дж.Е., Кристеа И.М.Сенсоры вирусной ДНК IFI16 и циклическая GMP-AMP-синтаза обладают различными функциями в регуляции экспрессии вирусных генов, иммунной защиты и апоптотических реакций во время герпесвирусной инфекции. МБио . (2016) 7:e01553–16. doi: 10.1128/mBio.01553-16
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
64. Luecke S, Holleufer A, Christensen MH, Jonsson KL, Boni GA, Sorensen LK, et al. cGAS активируется ДНК в зависимости от длины. EMBO Реп. .(2017) 18:1707–15. doi: 10.15252/embr.201744017
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
65. Kaminski JJ, Schattgen SA, Tzeng TC, Bode C, Klinman DM, Fitzgerald KA. Синтетические олигодезоксинуклеотиды, содержащие супрессивные мотивы TTAGGG, ингибируют активацию воспаления AIM2. Дж Иммунол . (2013) 191:3876–83. doi: 10.4049/jimmunol.1300530
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
66. Steinhagen F, Zillinger T, Peukert K, Fox M, Thudium M, Barchet W, et al.Супрессивные олигодезоксинуклеотиды, содержащие мотивы TTAGGG, ингибируют активацию cGAS в моноцитах человека. Евро J Иммунол . (2018) 48: 605–11. дои: 10.1002/eji.201747338
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
67. Li T, Chen J, Cristea IM. Белок тегумента цитомегаловируса человека pUL83 ингибирует опосредованное IFI16 распознавание ДНК для уклонения от иммунитета. Микроб-хозяин клетки . (2013) 14:591–9. doi: 10.1016/j.chom.2013.10.007
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
68.Биолатти М., Делл’Осте В., Паутассо С., Гульези Ф., фон Эйнем Дж., Крапп С. и др. Белок тегумента цитомегаловируса человека pp65 (pUL83) подавляет выработку интерферона типа I, инактивируя ДНК-сенсор cGAS, не влияя на STING. Дж Вирол . (2018) 92:e01774–17. doi: 10.1128/ОВИ.01774-17
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
71. Антониос Д., Руссо П., Ларанж А., Кердин-Ромер С., Палларди М. Механизмы синтеза ИЛ-12 дендритными клетками человека, обработанными химическим сенсибилизатором NiSO4. Дж Иммунол . (2010) 185:89–98. doi: 10.4049/jimmunol.02
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
72. Jonsson KL, Laustsen A, Krapp C, Skipper KA, Thavachelvam K, Hotter D, et al. IFI16 необходим для распознавания ДНК в макрофагах человека, способствуя выработке и функционированию цГАМФ. Нац Коммуна . (2017) 8:14391. doi: 10.1038/ncomms14391
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
73. Hu Q, Frank I, Williams V, Santos JJ, Watts P, Griffin GE, et al.Блокада рецепторов прикрепления и слияния ингибирует инфицирование ВИЧ-1 ткани шейки матки человека. J Exp Med . (2004) 199:1065–75. doi: 10.1084/jem.20022212
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
74. Zhou Z, Barry de Longchamps N, Schmitt A, Zerbib M, Vacher-Lavenu MC, Bomsel M, et al. Эффективное проникновение ВИЧ-1 во внутреннюю крайнюю плоть опосредуется повышенным уровнем CCL5/RANTES, который рекрутирует Т-клетки и стимулирует образование конъюгатов с клетками Лангерганса. PLoS Pathog .(2011) 7:e1002100. doi: 10.1371/journal.ppat.1002100
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
75. Tjomsland V, Ellegard R, Kjolhede P, Wodlin NB, Hinkula J, Lifson JD, et al. Блокирование интегринов ингибирует инфицирование ВИЧ-1 иммунных клеток слизистой оболочки шейки матки свободными и опсонизированными комплементом вирионами. Евро J Иммунол . (2013) 43:2361–72. дои: 10.1002/eji.201243257
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
77.Бертрам К.М., Боттинг Р.А., Бахарлоу Х., Родс Дж.В., Рана Х., Грэм Дж.Д. и др. Идентификация ВИЧ, передающих CD11c(+) эпидермальных дендритных клеток человека. Нац Коммуна . (2019) 10:2759. doi: 10.1038/s41467-019-10697-w
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
78. Куше-Лоренко Д., Андерсон Г., Слоан Э., Орр А., Эверетт Р.Д. Вирусная убиквитинлигаза ICP0 не является ни достаточной, ни необходимой для деградации сенсора клеточной ДНК IFI16 во время инфекции, вызванной вирусом простого герпеса 1. Дж Вирол . (2013) 87:13422–32. doi: 10.1128/ОВИ.02474-13
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
79. Esclatine A, Taddeo B, Roizman B. Белок UL41 вируса простого герпеса опосредует селективную стабилизацию или деградацию клеточных мРНК. Proc Natl Acad Sci USA . (2004) 101:18165–70. doi: 10.1073/pnas.0408272102
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
80. Шэнь Г., Ван К., Ван С., Цай М., Ли М.Л., Чжэн С.Вирус простого герпеса 1 противодействует гадюке через белок отключения вириона-хозяина UL41. Дж Вирол . (2014) 88:12163–6. doi: 10.1128/ОВИ.01380-14
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
81. Zenner HL, Mauricio R, Banting G, Crump CM. Вирус простого герпеса 1 противодействует рестрикции тетерина за счет своей активности отключения вириона-хозяина. Дж Вирол . (2013) 87:13115–23. doi: 10.1128/ОВИ.02167-13
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
82.McCaskill JL, Ressel S, Alber A, Redford J, Power UF, Schwarze J, et al. Ингибирование широкого спектра респираторных вирусных инфекций с помощью имитаторов микроРНК, нацеленных на передачу сигналов p38 MAPK. Мол Тер Нуклеиновые Кислоты . (2017) 7: 256–66. doi: 10.1016/j.omtn.2017.03.008
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
83. Deschamps T, Kalamvoki M. Внеклеточные везикулы, высвобождаемые клетками, инфицированными вирусом простого герпеса 1, блокируют репликацию вируса в клетках-реципиентах STING-зависимым образом. Дж Вирол . (2018) 92:e01102–18. doi: 10.1128/ОВИ.01102-18
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
84. Skouboe MK, Knudsen A, Reinert LS, Boularan C, Lioux T, Perouzel E, et al. Агонисты STING обеспечивают противовирусную перекрестную связь между клетками человека и обеспечивают защиту от генитального герпеса у мышей. PLoS Pathog . (2018) 14:e1006976. doi: 10.1371/journal.ppat.1006976
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
85.Fang R, Wang C, Jiang Q, Lv M, Gao P, Yu X и др. NEMO-IKKβ необходимы для активации IRF3 и NF-kB в пути cGAS-STING. Дж Иммунол . (2017) 199:3222–33. doi: 10.4049/jimmunol.1700699
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
86. Эйб Т., Барбер Г.Н. Цитозольно-ДНК-опосредованная, STING-зависимая индукция провоспалительных генов требует канонической активации NF-kappaB через TBK1. Дж Вирол . (2014) 88:5328–41. doi: 10.1128/ОВИ.00037-14
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
87. Като К., Ишии Р., Гото Э., Ишитани Р., Токунага Ф., Нуреки О. Структурный и функциональный анализ распознавания ДНК и иммунной активации cGAS человека. ПЛОС ОДИН . (2013) 8:e76983. doi: 10.1371/journal.pone.0076983
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
88. Yan N, Regalado-Magdos AD, Stiggelbout B, Lee-Kirsch MA, Lieberman J. Цитозольная экзонуклеаза TREX1 ингибирует врожденный иммунный ответ на вирус иммунодефицита человека типа 1. Нат Иммунол . (2010) 11:1005–13. doi: 10.1038/ni.1941
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
90. Laguette N, Sobhian B, Casartelli N, Ringeard M, Chable-Bessia C, Segeral E, et al. SAMHD1 представляет собой рестрикционный фактор ВИЧ-1, специфичный для дендритных и миелоидных клеток, которому противодействует Vpx. Природа . (2011) 474: 654–7. doi: 10.1038/nature10117
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
91. Hertoghs N, van der Aar AM, Setiawan LC, Kootstra NA, Gringhuis SI, Geijtenbeek TB.Деградация SAMHD1 усиливает активное подавление созревания дендритных клеток ВИЧ-1. Дж Иммунол . (2015) 194:4431–7. doi: 10.4049/jimmunol.1403016
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
92. Kim ET, White TE, Brandariz-Nunez A, Diaz-Griffero F, Weitzman MD. SAMHD1 ограничивает вирус простого герпеса 1 в макрофагах, ограничивая репликацию ДНК. Дж Вирол . (2013) 87:12949–56. doi: 10.1128/ОВИ.02291-13
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
93.Решка Н, Чжоу С, Сонг Б, Содроски Дж.Г., Книпе Д.М. Белки обезьян TRIM5α снижают репликацию вируса простого герпеса. Вирусология . (2010) 398: 243–50. doi: 10.1016/j.virol.2009.11.041
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
94. Гонугунта В.К., Сакаи Т., Покатаев В., Ян К., Ву Дж., Доббс Н. и соавт. Опосредованная трафиком деградация STING требует сортировки на подкисленные эндолизосомы и может быть нацелена на усиление противоопухолевого ответа. Представитель ячейки .(2017) 21:3234–42. doi: 10.1016/j.celrep.2017.11.061
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
96. Aguirre S, Luthra P, Sanchez-Aparicio MT, Maestre AM, Patel J, Lamothe F, et al. Белок NS2B вируса денге нацелен на деградацию cGAS и предотвращает распознавание митохондриальной ДНК во время инфекции. Нат микробиол . (2017) 2:17037. doi: 10.1038/nmicrobiol.2017.37
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
97.Sun C, Schattgen SA, Pisitkun P, Jorgensen JP, Hilterbrand AT, Wang LJ, et al. Уклонение гамма-герпесвируса от распознавания врожденной цитозольной ДНК способствует установлению латентной инфекции. Дж Иммунол . (2015) 194:1819–31. doi: 10.4049/jimmunol.1402495
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
98. Wu JJ, Li W, Shao Y, Avey D, Fu B, Gillen J, et al. Ингибирование восприятия ДНК cGAS белком вириона герпесвируса. Микроб-хозяин клетки .(2015) 18:333–44. doi: 10.1016/j.chom.2015.07.015
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
99. Rasaiyaah J, Tan CP, Fletcher AJ, Price AJ, Blondeau C, Hilditch L, et al. ВИЧ-1 уклоняется от распознавания врожденным иммунитетом за счет рекрутирования специфического кофактора. Природа . (2013) 503:402–5. doi: 10.1038/nature12769
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
100. Harman AN, Lai J, Turville S, Samarajiwa S, Gray L, Marsden V, et al.ВИЧ-инфекция дендритных клеток нарушает путь индукции IFN через IRF-1 и ингибирует продукцию IFN 1 типа. Кровь . (2011) 118: 298–308. дои: 10.1182/кровь-2010-07-297721
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
101. Harman AN, Nasr N, Feetham A, Galoyan A, Alshehri AA, Rambukwelle D, et al. ВИЧ блокирует индукцию интерферона в дендритных клетках и макрофагах человека путем нарушения регуляции TBK1. Дж Вирол . (2015) 89:6575–84. дои: 10.1128/ОВИ.00889-15
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
102. Gringhuis SI, Hertoghs N, Kaptein TM, Zijlstra-Willems EM, Sarrami-Forooshani R, Sprokholt JK, et al. ВИЧ-1 блокирует сигнальный адаптер MAVS, чтобы избежать противовирусной защиты хозяина после обнаружения абортивной РНК ВИЧ-1 геликазой хозяина DDX3. Нат Иммунол . (2017) 18: 225–35. doi: 10.1038/ni.3647
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Клеточное программирование HSV-2 обеспечивает продуктивную ВИЧ-инфекцию в дендритных клетках
Front Immunol.2019; 10: 2889.
, ^1, ^† ^† ^‡, ^1,, ^†, ¹, ^1,, ², ¹, ³, ¹, ¹, ⁴, ⁴, ⁵ и ⁵ и ^1, ^*
^*
Elisa Crisci
¹
¹ Отдел молекулярной вирусологии, Департамент клинической и экспериментальной медицины, Линкёпингингский университет, Linköping, Sweden
Cecilia Svanberg
¹ Отделение молекулярной вирусологии, кафедра клинической и экспериментальной медицины, Университет Линчёпинга, Линчёпинг, Швеция
Rada Ellegård
¹ Отделение молекулярной вирусологии, кафедра клинической и экспериментальной медицины, Университет Линчёпинга, Линчёпинг, Швеция
Mohammad Khalid
¹ Отделение молекулярной вирусологии, кафедра клинической и экспериментальной медицины, Университет Линчепинга, Линчепинг, Швеция
909 05 2 Кафедра фармацевтики, Фармацевтический колледж, Университет короля Халида, Абха, Саудовская Аравия
Джулия Хеллблом
¹ Отделение молекулярной вирусологии, кафедра клинической и экспериментальной медицины, Университет Линчепинга, Линчепинг, Швеция
Кадзуки Окуяма
³ Отделение экспериментальной гематологии, кафедра клинической и экспериментальной медицины, Университет Линчепинга, Линчепинг, Швеция
Pradyot Bhattacharya
¹ Отделение молекулярной вирусологии, отделение клинической и экспериментальной медицины, Университет Линчёпинга, Линчёпинг, Швеция
Sofia Nyström
¹ Отделение молекулярной вирусологии, кафедра клинической и экспериментальной медицины, Университет Линчепинга, Линчёпинг, Швеция
Esaki M.Shankar
⁴ Отделение инфекционной биологии и медицинской микробиологии, факультет наук о жизни, Школа естественных наук, Центральный университет штата Тамил Наду, Тируварур, Индия
Кристина Эрикссон
⁵ Отделение ревматологии и исследований воспаления, университет Гётеборг, Гетеборг, Швеция
Мари Ларссон
¹ Отделение молекулярной вирусологии, кафедра клинической и экспериментальной медицины, Университет Линчёпинга, Линчёпинг, Швеция
¹ Отделение молекулярной вирусологии, кафедра клинической и экспериментальной медицины, Университет Линчепинга, Линчёпинг, Швеция
² Кафедра фармацевтики, Фармацевтический колледж, Университет короля Халида, Абха, Саудовская Аравия
³ Отделение экспериментальной гематологии, кафедра клинической и экспериментальной медицины, Университет Линчепинга, Линчёпинг, Швеция
⁴ Отдел Инфекционная биология и медицинская микробиология, факультет наук о жизни, Школа наук о жизни, Центральный университет Тамил Наду, Тируварур, Индия
⁵ Кафедра ревматологии и исследований воспалений, Гетеборгский университет, Гетеборг, Швеция
Под редакцией: Карла Г.Фэн, Университет Сиднея, Австралия
Рецензировал: Энтони Лоуренс Каннингем, Вестмидский институт медицинских исследований, Австралия; Brian McSharry, University College Cork, Ирландия
Эта статья была отправлена в Viral Immunology, раздел журнала Frontiers in Immunology
. University, Raleigh, NC, United States
†Эти авторы внесли одинаковый вклад в эту работу
Поступила в редакцию 13 августа 2019 г.; Принято 25 ноября 2019 г.
Copyright © 2019 Crisci, Svanberg, Ellegård, Khalid, Hellblom, Okuyama, Bhattacharya, Nyström, Shankar, Eriksson and Larsson.
Это статья с открытым доступом, распространяемая на условиях лицензии Creative Commons Attribution License (CC BY). Использование, распространение или воспроизведение на других форумах разрешено при условии указания оригинального автора(ов) и владельца(ей) авторских прав и при условии цитирования оригинальной публикации в этом журнале в соответствии с общепринятой академической практикой. Запрещается использование, распространение или воспроизведение без соблюдения этих условий.
Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.
Abstract
Генитальный герпес — это распространенная инфекция, передающаяся половым путем, вызываемая вирусом простого герпеса типа 2 (ВПГ-2). Генитальный герпес значительно усиливает приобретение и передачу ВИЧ-1, создавая микросреду, поддерживающую ВИЧ-инфекцию у хозяина. Дендритные клетки (ДК) представляют собой один из первых типов врожденных клеток, которые сталкиваются с ВИЧ-1 и ВПГ-2 в слизистой оболочке половых органов. Было показано, что инфекция ВПГ-2 модулирует ДК, делая их более восприимчивыми к ВИЧ-инфекции.Здесь мы исследовали потенциальные механизмы, лежащие в основе опосредованного ВПГ-2 усиления инфекции ВИЧ-1. Мы продемонстрировали, что присутствие ВПГ-2 усиливало продуктивную ВИЧ-1 инфекцию ДК и усиливало воспалительный и противовирусный ответы. Инфекция ВИЧ-1, усиленная ВПГ-2, требовала интактной ДНК ВПГ-2, но не активной репликации ДНК ВПГ-2. Кроме того, усиленная ВИЧ-инфекция ДК включала путь cGAS-STING. Интересно, что мы не смогли увидеть ни участия TLR2 или TLR3, ни подавления инфекции продукцией IFN-β.Кондиционирование HSV-2 в ДК с двойным воздействием снижало экспрессию белков IFI16, cGAS, STING и TBK1, что связано с передачей сигналов через путь STING. Двойное воздействие ВПГ-2 и ВИЧ-1 привело к снижению уровней нескольких факторов рестрикции ВИЧ-1, особенно SAMHD1, TREX1 и APOBEC3G. Активация пути STING в ДК при воздействии как ВПГ-2, так и ВИЧ-1, скорее всего, привела к протеолитической деградации факторов рестрикции ВИЧ-1 SAMHD1, TREX1 и APOBEC3G, что должно снять их нормальное ограничение ВИЧ-инфекции в ДК. .Это освободило их обычное ограничение ВИЧ-инфекции в DC. Мы показали, что репрограммирование HSV-2 клеточных сигнальных путей и уровней экспрессии белка в DC обеспечивает условия, при которых ВИЧ-1 может установить более продуктивную инфекцию в DC. В заключение следует отметить, что перепрограммирование ВПГ-2 открывает ДК для инфекции ВИЧ-1 и создает микросреду, способствующую передаче ВИЧ-1.
Ключевые слова: ВПГ-2, ВИЧ-1, коинфекция ВПГ-2 и ВИЧ-1, дендритные клетки, иммунные реакции, сенсоры ДНК поражает почти 37 миллионов человек во всем мире (1).Риск заражения ВИЧ-1 во время полового контакта в три раза выше у лиц, инфицированных вирусом генитального простого герпеса типа 2 (ВПГ-2) (2, 3), а наибольший риск наблюдается у лиц, столкнувшихся с ВПГ-2 недавно (4). Многие серопозитивные лица, инфицированные ВПГ-2, не знают о своем инфекционном статусе, и известно, что выделение вируса и эпителиальные микроязвы часто возникают у бессимптомных лиц. Кроме того, данные указывают на то, что противовирусное лечение неспособно полностью подавить инфекцию ВПГ-2 (5–7).Присутствие как ВИЧ-1, так и ВПГ-2 создает среду, в которой иммунные клетки, такие как дендритные клетки (ДК) и клетки Лангерганса (ЛК), могут подвергаться воздействию и кондиционироваться либо вирусами, либо факторами вирусного происхождения. Интересно, что присутствие как ВПГ-2, так и ВИЧ-1, по-видимому, в несколько раз увеличивает уровни ДНК ВИЧ в ДК (8), LC (9) и макрофагах (10).
Усугубление ВИЧ-инфекции присутствием ВПГ-2, по-видимому, имеет несколько объяснений, включая микроокружение, обусловленное инфильтрацией и персистенцией ВПГ-2-специфических CD4+ Т-клеток в слизистой оболочке (11).CD4+ Т-клетки из-за их экспрессии α4β7+ особенно восприимчивы к ВИЧ-инфекции (12–14). Кроме того, усиленная инфильтрация миелоидными ДК и плазмоцитоидными ДК (12), вероятно, способствует усилению инфекции слизистой за счет привлечения дополнительных клеток-мишеней ВИЧ. Причина усиления инфекции, помимо большего количества присутствующих иммунных клеток, может быть связана с активацией DCs, расположенных в слизистой оболочке (15). Активированные ДК продуцируют высокий уровень ФНО, который обуславливает микроокружение, а также соседние ДК и Т-клетки, делая их более восприимчивыми к ВИЧ-1 за счет увеличения их экспрессии CCR5 (8).Кроме того, HSV-2 может также прекондиционировать DC и T-клетки, обеспечивая патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (PAMP), что приводит к усилению ВИЧ-инфекции.
Микроокружение в месте инфекции обогащено множеством растворимых факторов, которые, вероятно, влияют на инфекцию ВИЧ-1 и ВПГ-2, включая компоненты системы комплемента (16–18). Вирионы ВИЧ-1 защищены от нормального лизиса, опосредованного комплементом, благодаря включению ингибирующих комплемент молекул, таких как CD55 и CD59, в их липидную мембрану (19), что приводит к опсонизации частиц ВИЧ-1 инактивированными фрагментами комплемента, такими как iC3b и C3d (20–22).Кроме того, вирионы, передаваемые половым путем, должны представлять собой частицы, опсонизированные комплементом и/или комплементарными антителами, при контакте с семенной жидкостью и/или выделениями шейки матки (19). Считается, что оба вируса используют эту часть механизма врожденного иммунитета для усиления тяжести инфекции и уклонения от комплемент-опосредованного лизиса вирионов (18, 20, 21, 23).
Активация врожденного иммунитета является важным компонентом механизмов противовирусной защиты. До сих пор значительно меньше известно о врожденном клеточном программировании, генерируемом HSV-2 в DC, которое, вероятно, усиливает ВИЧ-инфекцию.И ВПГ-2, и ВИЧ распознаются набором рецепторов распознавания образов (PRR) в организме хозяина. Толл-подобный рецептор (TLR) 2, TLR3, TLR9 и некоторые внутрицитоплазматические сенсоры, такие как отсутствующие в меланоме 2 (AIM2), интерферон-гамма-индуцируемый белок 16 (IFI16) и белок 5, ассоциированный с дифференцировкой меланомы (MDA5), ранее были показаны. для распознавания ВПГ в различных типах клеток мыши и/или человека (24, 25). Раннее распознавание HSV-1 в первичных клетках человека, например, макрофагах, включает два внутриклеточных пути восприятия нуклеотидов для индукции IFN I типа и воспалительных факторов.При этом MDA5/MAVS имеет первостепенное значение для индукции IFN типа I, тогда как путь TLR2, по-видимому, играет менее важную роль в ранних врожденных ответах (24). Недавние открытия установили участие врожденных сенсоров IFI16 и синтазы цГМФ-АМФ (цГАС) в защите хозяина от ДНК-вирусов, таких как ВПГ (26). Определение ДНК ВПГ с помощью IFI16 активирует механизм воспаления и ответы IFN-β в некоторых типах клеток (26). В фибробластах, инфицированных HSV-1, ДНК HSV-1 воспринимается как IFI16, так и cGAS (27).IFI16 и cGAS стимулируют путь STING, что приводит к активации TBK1 и IRF3, что приводит к продукции IFN-β (28). ВИЧ-1 распознается TLR, RIG-1-подобными рецепторами, NOD2, IFI16 и cGAS (29–31). Мы обнаружили, что передача сигналов в ДК, происходящих из моноцитов ВИЧ-инфицированного человека, включает путь TLR8 с последующей активацией сигнальных каскадов p38 MAPK, ERK, NF-kB, IRF1 и IRF7, тогда как опсонизированные комплементом вирионы обладали способностью подавлять эти и активируют сигнальные пути Lyn, PI3K, IRF3 (20).
В свете повышенного уровня ВИЧ-инфекции и выделения вируса на слизистой оболочке половых органов у лиц, серопозитивных к ВПГ-2 (2, 3, 5–7), а также того факта, что ВИЧ-1 становится мишенью для ДК во время передачи половым путем, мы стремились расшифровать индуцированное HSV-2 клеточное программирование, лежащее в основе усиленной инфекции DCs ВИЧ-1. Прекондиционирование ДК человека ВПГ-2 перед воздействием ВИЧ-1 повышало воспалительный и противовирусный ответы, а также уровень ВИЧ-инфекции в ДК. Мы обнаружили, что множественные сигнальные пути были активированы на уровне транскрипции как в свободных, так и в комплементарных опсонизированных ВПГ-2/ВИЧ-1 ДК, подвергшихся воздействию.Усиление инфекции ВИЧ-1 зависело от активации пути STING и требовало распознавания структурно интактной ДНК ВПГ-2. Кондиционирование HSV-2 как свободным, так и комплементарным опсоном в ДК с двойным воздействием снижало уровни белков IFI16, cGAS, TBK1 и IRF3, которые участвуют в пути STING. Кроме того, активация пути STING в ДК, инфицированных HSV-2/ВИЧ-1, приводила к снижению уровней нескольких факторов рестрикции ВИЧ, например, SAMHD1, TREX1 и APOBEC3G, что снижало их клеточную рестрикцию инфекции ВИЧ-1 в ДЦ.Наша работа показала, что репрограммирование, опосредованное ВПГ-2, повышает способность ВИЧ инфицировать ДК и создает благоприятную микросреду для инфицирования и передачи ВИЧ.
Материалы и методы.
Реактивы. Рекомбинантный человеческий GM-CSF (Genzyme) (100 ЕД/мл) и 300 ЕД/мл рекомбинантного человеческого IL-4 (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота, США) использовали для размножения DC
in vitro .
ДК, полученные из моноцитов, и культура клеток THP1
Были собраны цельная кровь здоровых добровольцев или лейкоцитарная пленка из банка крови университетской больницы Линчепинга (этические разрешения M173-07 и M75-08/2008). Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) отделяли центрифугированием в градиенте плотности с использованием Ficoll-Hypaque (Amersham Pharmacia Biotech, Пискатауэй, Нью-Джерси, США) и инкубировали в чашках для клеточных культур (BD, Европа) в течение 1 ч при 37°C, чтобы обеспечить адгезию DC-предшественники и иметь возможность отбрасывать неприлипшие клетки.Прогениторы дифференцировали в незрелые ДК, происходящие из моноцитов (далее именуемые незрелыми ДК), путем добавления 100 ЕД/мл GM-CSF и 300 ЕД/мл IL-4 в день 0, 2 и 4 культивирования. После этого DC оценивали на экспрессию маркеров CD14 и CD83 в качестве контроля качества перед использованием в экспериментах. В некоторых экспериментах использовали клетки THP1 дикого типа или THP1-Dual™ KO-STING (Invivogen, Франция). Клетки THP1 культивировали в соответствии с инструкциями производителя, активировали с использованием форбол-12-миризата-13-ацетата (ФМА, 10 мкг/мл) и инкубировали за 2 дня до инфицирования клеток и обрабатывали так же, как описано ниже для ДК.
Размножение и титрование вируса
Вирусный штамм HSV-2 был приготовлен в клетках почек африканской зеленой мартышки (GMK), культивированных в среде DMEM с добавлением 10% инактивированной нагреванием (HI) FCS, как описано ранее (32). Штамм 333 ВПГ-2 использовали либо как инфекционный, либо как γ-облученный (30 мин) инактивированный вирус. HIV-1BaL/SUPT1-CCR5 CL.30 (лот 4235, 4238, 4313 и 4366) был получен с использованием хронически инфицированных культур клеточной линии ACVP/BCP (№ 204), первоначально полученных путем инфицирования SUPT1-CCR5 CL.30 клеток (любезно подаренных доктором Дж. Хокси, Университет Пенсильвании) с инфекционным запасом ВИЧ-1BaL (Программа исследований и эталонных реагентов NIH AIDS, каталог № 416, партия № 59155). Вирус очищали и концентрировали, как описано ранее (33), и аликвоты замораживали. Все препараты вируса проверяли на инфекционность.
Создание репортерного вируса GFP CCR5-Tropic
Провирусную конструкцию NLENG1-IRES использовали для создания NLENG1-IRES-70 путем замены ENV на YU-2 ENV, как описано в другом месте (34, 35).Провирусная конструкция была щедро подарена доктором Дэвидом Н. Леви (Нью-Йоркский университет, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк, США). Клетки HEK-293T культивировали в среде DMEM, содержащей 10% HI FCS, и при слиянии ~70% клетки трансфицировали провирусной конструкцией NLENG1-IRES-70 с использованием метода CaPO ₄. Через 8 ч после трансфекции среду заменяли средой DMEM с добавлением 1% HI FCS. GFP-ВИЧ собирали на следующий день путем сбора супернатанта, а клеточный дебрис удаляли осаждением при 2500 об/мин в течение 5 мин.Вирусные запасы разделяли на аликвоты и замораживали при -80°C.
Опсонизация ВПГ-2 и ВИЧ
Комплементарную опсонизацию ВПГ-2, ВИЧ и GFP-ВИЧ проводили путем инкубации вирионов с равным объемом человеческой сыворотки (HS) (этические разрешения M173-07 и M75 -08/2008). Для опсонизации использовали разные ГВ; Серонегативные HSV-1 и HSV-2 использовали для опсонизации вируса HSV-2 (называемого CHSV), а серонегативные HS на ВИЧ и HSV-2 использовали для опсонизации вирусов HIV-1 или GFP-HIV-1 (называемых CHIV). и CHIV-GFP).ГС тестировали на антитела к ВПГ с использованием наборов HerpeSelect® 1 ELISA IgG и HerpeSelect® 2 ELISA IgG (Focus Diagnostics, Cypress, CA, USA). Свободные вирусы HSV-2, HIV-1 и GFP-HIV-1 (обозначаемые как HSV, HIV и GFP-HIV) разводили до той же концентрации, что и опсонизированный вирус. Отрицательный контроль, т.е. макет, обрабатывали культуральной средой. Все группы вирусов инкубировали в течение 1 ч при 37°С и использовали в экспериментах по коинфекции.
ВПГ-2 и ВИЧ-инфекция ДК
Незрелые ДК (10 ⁶ клеток/мл) были инфицированы псевдо-, (30 нг/мкл) ВИЧ или CHIV в виде одиночной инфекции.HIV/HSV или CHIV/CHSV использовались в двух установках: прямая и отсроченная коинфекция. В группе с отсроченным введением HSV-2 и CHSV 1 MOI добавляли к ДК на 2 часа, после чего клетки промывали перед добавлением ВИЧ и CHIV на 4, 6 или 22 часа. В установке прямого коинфицирования оба типа вируса добавляли к ДК одновременно на 3 часа, промывали и затем инкубировали в течение дополнительных 21 часа во всех установках. ДК культивировали в среде с 1% плазмы человека. ДК собирали, промывали и лизировали буфером для лизиса Bioline RLY (Bioline, Великобритания) для выделения РНК или фиксировали 4% параформальдегидом (PFA) в течение 10 мин при 4°C для иммунного фенотипирования методом проточной цитометрии.
Для изучения уровня продуктивной ВИЧ-инфекции проводили две установки коинфекции и собирали супернатанты на 1, 4, 7 и 10 день. После сбора супернатанта клетки ресуспендировали. в 10% FBS перед добавлением IL-4 и GM-CSF. Уровень p24 ВИЧ определяли с помощью лабораторного анализа ELISA p24 (36). Кроме того, продуктивную ВИЧ-инфекцию оценивали с использованием репортерного CCR5-тропного вируса GFP с использованием той же экспериментальной установки, которая была описана ранее для других вирусов.DC были инфицированы GFP-ВИЧ в течение 3 и 5 дней, прежде чем процент положительных клеток GFP был проанализирован с помощью проточной цитометрии.
Экстракция общей РНК, обратная транскрипция и количественная ПЦР
Суммарную РНК из ДК, подвергшихся воздействию различных условий, экстрагировали с использованием коммерческого набора Isolate II RNA Mini или Micro Kit (Bioline, UK), а общую кДНК получали с помощью обратной транскриптазы SuperScript III Набор для синтеза кДНК First Strand (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США). Количественную оценку транскриптов генов проводили с использованием набора SensiFAST SYBR® Hi-ROX (Bioline, Великобритания) и системы CFX96 Touch Real-Time (BIO-RAD Inc.). Праймеры, нацеленные на β-актин и GAPDH, использовали в качестве генов домашнего хозяйства для сравнения, как описано другими (37). Праймеры были приобретены у CyberGene AB (Стокгольм, Швеция). Чтобы компенсировать различия между планшетами, значения были нормализованы, как описано ранее (38).
ELISA и Cytometric Bead Array
Уровни белков TNF (Mabtech, Швеция) и IFN-β (набор VeriKine; PBL Assay Science, США) оценивали в супернатантах культур ДК примерно через 20 ч после инфицирования с помощью ELISA в соответствии с протоколы производителей.Цитометрические матрицы шариков (BD Biosciences, Стокгольм, Швеция) использовали для измерения уровней цитокинов и хемокинов в клеточных супернатантах и для измерения уровней фосфорилированного белка в лизатах ДК (BD Biosciences, Стокгольм, Швеция) в соответствии с протоколами производителя.
Проточная цитометрия
Качество незрелых ДК оценивали путем окрашивания PE-конъюгированными антителами против CD83 и CD14 человека (BD, Европа). ДК использовали, если их чистота была >95%, а их экспрессия CD14 и CD83 <10%.Экспрессию антигенов HSV-2 в подвергшихся воздействию HSV-2 DC осуществляли с помощью поликлонального антитела против HSV-2 (B0116, Dako, Дания). Воздействие инфекции на различные белки оценивали путем окрашивания PE-Cy7-конъюгированным антителом к человеческому APOBEC3G (Abcore, США), Alexa Fluor 647-конъюгированным антителом к SAMHD1 человека (Bioss Inc. США), Alexa Fluor 647-конъюгированным анти- TREX1 человека, антитела против IRF3 человека, PE-конъюгированные антитела против NAK/TBK1 человека, IFI16 человека (Abcam, Великобритания), CF150 человека (cGAS) (Thermofisher Scientific) и PE-конъюгированные антитела против STING человека ( БД Европа).Неконъюгированные антитела окрашивали конъюгированными вторичными антикроличьими антителами (DAKO). Образцы окрашенных DC оценивали с помощью проточной цитометрии (FACS Canto II, BD) и анализировали с помощью FlowJo (Treestar, Ashland, OR, USA).
Лиганды и ингибиторы
В экспериментах использовали следующие лиганды и ингибиторы TLR: лиганд TLR2 PAM (5 мкг/мл), лиганд TLR3 Poly I:C (40 мкг/мл), 2’3′-cGAMP, ( 10 мкг/мл), Poly dA:dT (0,5 мкг/мл), HSV-60 Naked DNA (10 мкг/мл), олигонуклеотид A151 ODN TTAGGG (1–3 мкМ) (Invivogen, Франция), человеческий pp65 (UL83) рекомбинантный белок (10–15 мкг/мл) (Miltenyi Biotec, Швеция), рекомбинантный белок Е7 вируса папилломы человека типа 18 (10–20 мкг/мл) (SMS-gruppen, Дания) и ацикловир (20–50 мкМ) (SIGMA). ).Ацикловир добавляли за 1 ч до добавления вируса, инкубировали с вирусом в течение 2 ч, отмывали, пополняли и затем оставляли в культуре на протяжении всей инкубации. Внутриклеточную доставку cGAMP, Poly dA:dT, голой ДНК HSV-60, олигонуклеотида A151, белка UL83 и белка E7 осуществляли с использованием коммерческой системы DOTAP (SIGMA). Вкратце, различные лиганды и ингибиторы смешивали с забуференным HEPES физиологическим раствором и DOTAP в течение 30 минут при комнатной температуре, инкубировали в течение 2 часов при 37°C с ДК и промывали перед заражением.ДОТАП сам по себе служил в качестве контроля эффекта системы доставки.
RNAseq
РНК (5 нг) подвергали амплификации всего транскриптома с использованием набора NuGEN’s Ovation RNA-Seq V2 (Сан-Карлос, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, кДНК амплифицировали из тотальной РНК с использованием изотермической амплификации с одним праймером (SPIA). Образцы амплифицированной кДНК впоследствии очищали с использованием набора MinElute Reaction Cleanup Kit (Qiagen; Валенсия, Калифорния, США). Образцы кДНК фрагментировали на более мелкие фрагменты, затупляли на концах и лигировали с индексированными (со штрих-кодом) адаптерами и амплифицирули с использованием набора Ultralow System V2 в соответствии с протоколом производителя.Окончательное распределение размера библиотеки определяли с использованием Agilent Bioanalyzer 2100. Пять библиотек от пяти разных доноров секвенировали на платформе Illumina NextSeq500 (Сан-Диего, Калифорния, США). Файлы FASTQ были загружены в UPPMAX, а их качество проверено с помощью fastQC (39). Trimmomatic (40) был использован для удаления адаптеров и некачественных оснований, а затем чтения были картированы с эталонным геномом человека hg19 с использованием STAR (41). Количество для каждого гена было рассчитано с использованием featureCounts (42). Данные были нормализованы, а дифференциально экспрессированные гены определены с использованием R/DeSeq2 (43).Анализ путей был выполнен с помощью анализа пути изобретательности (Qiagen), R-анализа, анализа обогащения онтологии генов (GO) (Geneontology.org) и пользовательских списков генов.
Статистический анализ
GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) использовали для анализа всех данных, кроме RNAseq. Для проверки статистической значимости использовали повторные измерения ANOVA с последующим апостериорным тестом Бонферрони или двусторонним парным тестом t . Результаты считались статистически значимыми, если p < 0.05. Все эксперименты проводились не менее четырех раз с использованием клеток, полученных от разных доноров крови. Когда экспериментальные значения были нормализованы, среднее значение свободного вируса или имитатора было установлено равным 1. Результаты количественной ПЦР были нормализованы для различий между планшетами, как описано ранее (38). Вкратце, каждое значение вычиталось из среднего значения всех значений, а затем полученные значения делились на среднее значение ложного или свободного вируса в зависимости от различных экспериментов.
Результаты
Кондиционирование ДК человека, вызванное ВПГ-2, сделало их более восприимчивыми к ВИЧ-инфекции
В настоящее время очевидно, что инфицирование ВПГ-2 половых путей предрасполагает к ВИЧ-инфекции и повышенному выделению вируса на слизистых оболочках (2, 3). , 5–7).Тем не менее механизмы, лежащие в основе повышенной инфекции, остаются неоднозначными. Здесь мы оценили роль ДК в усилении инфекции, оценив эффекты предварительного воздействия ВПГ-2 на ВИЧ-инфекцию человеческих ДК, происходящих из моноцитов, и роль опсонизации вирусов комплементом. Уровни транскриптов мРНК gag ВИЧ были значительно повышены в ДК с двойным воздействием ВПГ/ВИЧ по сравнению с уровнями, индуцированными только ВИЧ, как через 6, так и через 24 часа (). Связанное с ВПГ-2 усиление ВИЧ-инфекции согласуется с выводами Marsden et al.(8). Более того, ДК, подвергшиеся воздействию опсонизированного комплементом ВПГ-2, давали более высокий уровень тирозинкиназы (ТК) как в ДК с двойной, так и с одиночной экспозицией по сравнению со свободным вирусом, как показано ранее, но не было никаких изменений в инфекции ВПГ-2 при измерении по экспрессии ТК. в ДК с двойным воздействием ВИЧ / ВПГ по сравнению с ДК с одиночным воздействием ВПГ-2 (дополнительная фигура 1). Продуктивная ВИЧ-инфекция также была значительно повышена в клетках с двойным воздействием ВПГ/ВИЧ, что было измерено по проценту GFP-ВИЧ-положительных DC с помощью проточной цитометрии и конфокальной микроскопии на 3 и 5 день после воздействия (), а также по уровням p24 ВИЧ в культуре. супернатанты день 4 и день 1-9 ().Опсонизация вирионов существенно не изменила уровень ВИЧ-инфекции в клетках, инфицированных HSV/ВИЧ (10). Следует отметить, что присутствие ВПГ-2 усиливало ВИЧ-инфекцию, как тогда, когда ДК были предварительно кондиционированы ВПГ-2 до заражения ВИЧ, так и когда ВПГ-2 и ВИЧ вводились в ДК одновременно. В нормальных условиях только небольшая часть ДК будет продуктивно инфицирована ВИЧ (18), и то же самое относится и к ВПГ-2 (18). Тем не менее, все ДК в культурах подвергаются воздействию вирусов и подвергаются их влиянию либо косвенно, либо прямо, а также в отсутствие продуктивной инфекции (18, 36).Количество ДК, которые поддерживают продуктивную инфекцию как ВИЧ, так и ВПГ-2, невелико, и это было показано Marsden et al. представлять только 1% клеток. В нашей системе мы определили, что уровень ДК с продуктивной ВИЧ-инфекцией и положительным антигеном ВПГ-2 должен составлять 5% для ДК, подвергшихся воздействию свободного ВИЧ/ВПГ, и ~12% для ДК, подвергшихся воздействию опсонизированного комплементом CHIV/CHSV (), что может отражают то, что не все клетки, положительные по антигену HSV-2, продуктивно инфицированы, а некоторые клетки имеют абортивную инфекцию HSV (44–46).Данные для прямой и отсроченной коинфекции дали очень похожие данные, поэтому представленные и проведенные в дальнейшем эксперименты относятся к установке отсроченной коинфекции. В совокупности наши данные ясно демонстрируют, что воздействие ВПГ-2 повышает способность ВИЧ продуктивно инфицировать DC, что побудило нас выяснить основной механизм, ответственный за усиление ВИЧ-инфекции.
Кондиционирование дендритных клеток человека ВПГ-2 сделало их более восприимчивыми к ВИЧ-продуктивной ВИЧ-инфекции. Дендритные клетки подвергали воздействию свободного HSV-2 (HSV) или комплемент-опсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 ч, затем промывали и инфицировали свободным ВИЧ, либо ВИЧ-1 BaL, либо GFP-меченым CCR5, тропным ВИЧ-1 (GFP-ВИЧ) или комплементарным. опсонизированный ВИЧ (CHIV) в течение 6 или 22 часов.ВПГ-2-положительные ДК измеряли с использованием поликлональных антител против ВПГ-2, а затем вторичных антител, конъюгированных с флуорохромом (A). Данные нормированы на свободный вирус, который устанавливается за единицу. (B) GFP-ВИЧ-положительные клетки оценивали с помощью проточной цитометрии через 3 и 5 дней после заражения ВИЧ или с помощью конфокальной микроскопии (40×) через 5 дней после заражения. Продуктивно инфицированные GFP-ВИЧ клетки (зеленые), окрашенные окрашиванием ядер с помощью DAPI (синий).Размерная полоса = 20 мкм. (C) Высвобождение р24 ВИЧ-1 продуктивно инфицированными ДК определяли с помощью ИФА с 1-го по 9-й день после инфицирования ВИЧ. (D) Процент положительных по GFP ВИЧ и положительных по антигену HSV-2 DC, измеренный с помощью проточной цитометрии через 24 часа после заражения. * р < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Различное клеточное программирование было индуцировано в ДК различными условиями инфицирования ВИЧ и ВПГ-2 воздействие ВИЧ противдвойной контакт с ВПГ-2 и ВИЧ. Анализ транскриптома продемонстрировал активацию и участие различных наборов путей в одиночных и двойных инфицированных ДК соответственно. ДК, подвергшиеся воздействию двойного вируса, активировали или подавляли значительно больше генов, чем ДК, подвергшиеся воздействию только ВИЧ и CHIV (1). Это продемонстрировало, что воздействие как ВПГ, так и ВИЧ было более мощным активатором ДК, чем один ВИЧ, и что дополнительная опсонизация вирионов подавляла активацию ДК. Затем наш анализ обогащения генов четко установил, что каждое из различных вирусных состояний приводит к уникальным паттернам экспрессии генов в различных сигнальных путях (дополнительная фигура 2).Условия CHIV и CHIV/CHSV имели менее обогащенные пути по сравнению со свободными вирусными группами (). Гены в сигнальных путях интерлейкина и JAK / STAT были обогащены как ВИЧ, CHIV, так и ВИЧ / ВПГ с двойным воздействием ДК, но только ВИЧ / ВПГ имел значительное обогащение (дополнительная фигура 2). Недавно было показано, что убиквитин-протеасомный путь играет важную роль в вирусном патогенезе (47). Гены, участвующие в этом пути, были значительно обогащены в свободных DC и подверженных воздействию ВИЧ / ВПГ, но только ограниченное количество генов было обогащено в группах, подвергшихся воздействию комплемента (дополнительная фигура 2).Анализ обогащения генов со сниженными уровнями экспрессии после ВИЧ-инфекции показал, что гены пути биосинтеза холестерина были значительно обогащены в ДК, подвергшихся воздействию CHIV, а гены, участвующие в метаболизме пиримидина, были обогащены в ДК, подвергшихся воздействию как ВИЧ / ВПГ, так и CHIV / CHSV (Дополнительное Фигура 2). Более конкретный, углубленный анализ обогащения генов с упором на воспаление, противовирусные и иммунные реакции выявил картину значительно обогащенных путей, отчетливо различающихся для каждого типа инфекционного состояния, хотя между группами было некоторое совпадение (; дополнительная фигура 2) .Например, активированные гены в каскаде JAK-STAT были значительно обогащены для всех групп, кроме CHIV (дополнительная фигура 2).
Клеточное программирование дендритных клеток при одиночной инфекции ВИЧ и двойной инфекции ВИЧ/ВПГ. Дендритные клетки подвергали воздействию HSV-2 (HSV) или комплементопсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 часов, а затем инфицировали ВИЧ или комплементопсонизированным ВИЧ (CHIV) в течение 24 часов. Было выполнено полное секвенирование транскриптома. (A) Анализы количества генов со значительной активацией или подавлением экспрессии с оценкой общих, двух-, четырех- и восьмикратных изменений по сравнению с имитацией (B) р ≥ 0.05 с упором на воспалительные и противовирусные пути/факторы. (C) Анализ обогащения генов генов, значительно активизированных в три раза или выше, с p ≥ 0,05. Анализ обогащения GO был выполнен с набором данных путей PANTHER. Термины со статистической значимостью в любом списке генов показаны в виде гистограммы с накоплением. * р < 0,05, ** р < 0,005, *** р < 0,0005. Ось Y = количество перечисленных генов, участвующих в указанном пути PANTHER.Ref = ожидаемый номер гена из ссылки (полные гены человека в базе данных). 18 , 20), и наш анализ транскриптома ясно продемонстрировал активацию и участие нескольких воспалительных путей. HSV/HIV или CHSV/CHIV индуцируют различные паттерны экспрессии генов в ДК для воспалительных генов по сравнению с одиночной инфекцией ВИЧ или CHIV (1).Более того, группы с опсонизированным комплементом имели более низкие уровни транскрипции многих воспалительных факторов (4). Только ВИЧ, HSV/HIV и CHSV/CHIV активировали несколько воспалительных факторов, таких как IL-6, TNF, CXCL1 и CCL20, с максимальной экспрессией, активированной в группах коинфицированных. Опсонизация комплемента снижала транскрипцию нескольких факторов, таких как CCL1, CCL5, CCL8 и IL-1β, поскольку они были ниже в опсонизированных группах по сравнению со свободным вирусом. CCL21, CCL28 и IL34 активировались только в группах с двойным воздействием.Несколько генов имели более высокие уровни экспрессии генов в группе CHIV и включали CXCR3 и IL-10. Затем мы проверили характер экспрессии некоторых воспалительных факторов с помощью количественной ПЦР и трансляции с помощью ELISA или массива гранул цитокинов на основе потока. Сам по себе HSV был ведущим индуктором TNF и CCL3, тогда как ВИЧ-1 был более мощным для индукции CXCL8 и IL-1β (дополнительная фигура 3). HSV/HIV и CHSV/CHIV приводили к более высоким уровням экспрессии мРНК TNF, CXCL8 и CCL3 по сравнению со свободным и опсонизированным комплементом ВИЧ (4).Уровни мРНК IL-1β были одинаковыми в ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ и ВИЧ/ВПГ (), тогда как уровни белка были выше в ДК, подвергшихся двойному воздействию (). Секреция TNF и хемокинов CCL3 и CCL5 соответствовала характеру экспрессии мРНК и/или данным транскриптома (данные не показаны). Уровни белка других воспалительных факторов, таких как CXCL10, были ниже в ДК, подвергшихся воздействию обоих вирусов, по сравнению с одним ВИЧ (1). Эти расхождения между уровнями белка и данными транскриптома могут быть объяснены посттранскрипционной регуляцией и/или протеолитической деградацией (48-50).Транскрипция воспалительных факторов активируется несколькими сигнальными путями, включая путь MAPK p38, а двойное воздействие значительно повышало уровень фосфорилированного p38 с тенденцией к тому, что опсонизация вирионов снижала фосфорилирование p38 (4). Фосфорилирование JNK демонстрировало аналогичный характер активации MAPK p38, но существенных различий не было (данные не показаны), что могло быть связано с моментом времени, выбранным для измерения.
Воспалительные пути были сильно активированы в подвергшихся воздействию ВПГ/ВИЧ ДК при транскрипции мРНК. (A) Дендритные клетки подвергали воздействию свободного HSV-2 или комплемент-опсонизированного вируса (CHSV-2) в течение 2 часов, а затем инфицировали ВИЧ или комплемент-опсонизированным ВИЧ (CHIV) в течение 22 часов. Тепловая карта по воспалительным факторам со значительным повышением или понижением уровня регуляции в одной или нескольких группах DC ВИЧ, CHIV, HSV-2/HIV или CHSV-2/CHIV по сравнению с ложно обработанными DC из экспрессии мРНК RNA seq (B) уровни IL-1β, TNF, CCL3, CXCL8 определяли методом ПЦР. Данные были нормализованы к фиктивному набору, равному 1. (C) Уровни белка секретируемых цитокинов оценивали с помощью ELISA для TNF и матрицы гранул цитокинов для IL-1β, CCL5 и CXCL10. (D) Уровень фосфорилирования MAPK p38 оценивали в лизатах DC, подвергшихся воздействию HSV-2 или CHSV-2 в течение 2 часов с последующим воздействием ВИЧ или CHIV в течение 4 часов с помощью массива фосфопротеиновых гранул. * р < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н =5–8.
Воздействие ВИЧ/ВПГ вызывало более высокую экспрессию нескольких противовирусных факторов, включая IFN-β, в ДК по сравнению с воздействием только ВИЧ как только ВИЧ, так и как ВПГ, так и ВИЧ.Здесь мы оценили факторы, участвующие в активации и регуляции клеточной противовирусной защиты (4). Характер многих противовирусных факторов, индуцированных в ДК, был сходным между ВИЧ и ДК с двойным вирусом, и в целом более низкий уровень активации противовирусных факторов в группах комплемента. Несколько генов TRIM, гены IFN типа I, гены SOCS и гены IRF активировались в свободном ВИЧ и ДК с двойной экспозицией, при этом самые высокие уровни транскрипции в основном обнаруживались в ДК с двойной экспозицией.Многие противовирусные гены были активированы в ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ/ВПГ и ВГЧ/ВГС, в то время как было обнаружено, что несколько антивирусных генов активировались только в ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ, и включают IFITM3, SOCS5 и TBK1 для свободного ВИЧ и IFITM3 для CHIV (). Затем мы подтвердили наличие некоторых из этих противовирусных факторов на уровне мРНК и белка. Одиночное воздействие ВПГ и двойное воздействие ВПГ/ВИЧ повысило уровни экспрессии мРНК IFN-β и MX1 по сравнению с однократным воздействием ВИЧ (дополнительная фигура 4), что ясно показывает, что ВПГ является компонентом, ответственным за сильные противовирусные ответы.Кроме того, секреция IFN-β была выше в образцах, подвергшихся двойному воздействию, с самыми высокими уровнями, индуцированными ВПГ/ВИЧ (4). Интересно, что уровни IFN-β не коррелировали отрицательно с уровнями ВИЧ-инфекции, что позволяет предположить, что IFN-β оказывал ограниченное влияние на инфекцию даже при высоких уровнях IFN-β, наблюдаемых в DC с двойным воздействием. Петля обратной связи IFN-β индуцирует активацию STAT1 и транскрипцию регулируемых IFN генов (ISG). Наши данные ясно показали, что воздействие на ДК ВИЧ вызывало значительно более высокое фосфорилирование STAT1 через 6 часов по сравнению с CHIV, HSV/HIV и CHSV/CHIV (1).Кроме того, ВИЧ и ВПГ/ВИЧ также значительно активировали несколько ISG, включая IFITM1, RSAD2 и ISG15 (15).
Противовирусные факторы и пути были сильно активированы в дендритных клетках, подвергшихся воздействию ВПГ/ВИЧ. Дендритные клетки подвергали воздействию HSV-2 или опсонизированного комплементом вируса (CHSV-2) в течение 2 часов с последующей инфекцией ВИЧ или опсонизированным комплементом ВИЧ (CHIV) в течение 22 часов. (A) Тепловая карта из данных секвенирования РНК антивирусных факторов, значительно повышающих или понижающих регуляцию при одном или нескольких состояниях инфекции ВИЧ, CHIV, HSV-2/ВИЧ или CHSV-2/CHIV по сравнению с ДК, подвергнутыми имитации лечения ( B) Уровни экспрессии мРНК IFN-β и MXA были получены с помощью ПЦР.Данные были нормализованы к ложному набору как 1. (C) Уровни секретируемого IFN-β оценивали с помощью ELISA. (D) Уровень фосфорилирования STAT1 оценивали в лизатах DC, подвергшихся воздействию HSV-2 или CHSV-2 в течение 2 часов с последующим воздействием ВИЧ или CHIV в течение 4 часов с помощью массива фосфопротеиновых гранул. * р < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Усиление ВИЧ-инфекции ВПГ-2 в ДК Требуется интактная структура ДНК ВПГ-2. для доставки интактной доступной двухцепочечной ДНК вирионами мы использовали ацикловир и γ-облученный инактивированный HSV-2 (51).В отсутствие репликации ДНК ВПГ-2 γ-облученный инактивированный ВПГ-2 не повышал уровень ВИЧ-инфекции и уровни экспрессии TNF и IFN-β (), что ясно указывает на то, что повышенная ВИЧ-инфекция DCs является зависит от наличия доступной и/или интактной ДНК ВПГ-2. Инактивация HSV-2 γ-облучением вызывает повреждение ДНК, которое может сделать вирусную ДНК менее реактивной с внутриклеточными PRR, повлиять на транспорт ДНК в ядро и/или повлиять на высвобождение ДНК из вирусного капсида.Мы использовали ингибитор репликации ВПГ-2 ацикловир, чтобы проверить, достаточно ли присутствия интактной ДНК ВПГ-2 в ДК для усиления ВИЧ-инфекции или требуется ли активная репликация ДНК ВПГ-2. Ингибирование активной репликации ДНК ВПГ-2 в ДК мало влияло на ВИЧ-инфекцию и IFN-β, но уменьшало ответ IFN-β, однако эти результаты не были статистически значимыми (1). Чтобы дополнительно установить роль двухцепочечной ДНК, мы доставили HSV60, последовательность двухцепочечной ДНК длиной 60 п.н. из HSV-1 с использованием DOTAP в DC.Внутриклеточная двухцепочечная ДНК значительно усиливала инфекцию FHIV и CHIV по сравнению с одним только ВИЧ (1). В совокупности усиленная ВИЧ-инфекция и повышенная продукция IFN-β в ДК с двойным воздействием требовали присутствия двухцепочечной ДНК ВПГ-2 в ее естественной конфигурации, что позволяет предположить, что активация внутриклеточных PRR, таких как ДНК-сенсоры, может лежать в основе усиления ВПГ-2. ВИЧ-инфекции ДК.
Интактная дцДНК ВПГ необходима для усиления ВИЧ-инфекции в ДК. (A) Дендритные клетки подвергали воздействию инфекционного или гамма-облученного ВПГ-2 (γ-HSV-2) или комплементопсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 ч, затем промывали и инфицировали ВИЧ или комплементопсонизированным ВИЧ (CHIV) в течение 22 ч .Уровни экспрессии мРНК транскрипта gag ВИЧ-1, TNF и IFN-β определяли с помощью ПЦР. (B) ДК предварительно обрабатывали ацикловиром (20–50 мкМ) в течение 1 ч, а затем подвергали воздействию HSV или CHSV в течение 2 ч, затем промывали и инфицировали ВИЧ или CHIV в течение 22 ч с добавлением ацикловира в культуру. Уровни экспрессии генов транскрипта gag ВИЧ-1, TNF и IFN-β определяли с помощью ПЦР. (C) ДК обрабатывали HSV60 или без него, доставленным с помощью DOTAP, после чего подвергали воздействию HSV или CHSV в течение 2 часов, затем промывали и инфицировали ВИЧ или CHIV в течение 22 часов с добавлением ацикловира в культуру.Уровни экспрессии генов транскрипта gag ВИЧ-1, TNF и IFN-β определяли с помощью ПЦР. Данные были нормализованы к набору ВИЧ, равному 1, для транскрипта gag ВИЧ-1 и фиктивному набору, равному 1, для TNF и IFN-β. * р < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Внутриклеточные PAMP, полученные из HSV, являются основными факторами, участвующими в усилении ВИЧ-инфекции DC
Активация cGAS/STING может имитировать эффекты, наблюдаемые после инфицирования HSV-2.Известно, что TLR2 и TLR3 вовлечены в инфекцию ВПГ-2 (52, 53). Стимуляция TLR2 одновременно с ВИЧ-инфекцией не влияла на экспрессию gag ВИЧ по сравнению с только ВИЧ (1). Нацеливание на TLR3 дало лишь незначительное увеличение экспрессии кляпа ВИЧ по сравнению с резко повышенным уровнем экспрессии кляпа ВИЧ в DC, подвергшихся воздействию как HSV-2, так и ВИЧ (12). В то время как воспалительные реакции на агонист TLR3 отдельно и агонист TLR3 в комбинации с ВИЧ были выше, чем воспалительные реакции на один ВИЧ, ни TNF, ни IL1-β не приближались к уровням, наблюдаемым при двойном воздействии HSV-2 (данные не представлены).Увидев, что TLR2 показан как важный фактор индуцируемой HSV-2 клеточной активации (52, 54), мы исследовали влияние ингибирования пути TRL2 с помощью антагонистического лиганда TLR2 на ВИЧ-инфекцию. Наши результаты исключают участие передачи сигналов TLR2 в усиление ВИЧ-инфекции (дополнительная фигура 5). Принимая во внимание, что несколько межклеточных сенсоров, вовлеченных в инфекцию ВПГ, например, IFI16 и cGAS, которые объединяют свои сигнальные пути при активации STING (28, 48, 55), мы исследовали влияние активации STING на ВИЧ-инфекцию.Исследовали уровни ВИЧ-инфекции в ДК после экзогенной и эндогенной стимуляции цГАМФ, активатором STING через цГАС. Экзогенно доставленный cGAMP оказывал незначительное влияние на уровень ВИЧ-инфекции, тогда как эндогенно доставляемый cGAMP, то есть доставляемый в цитозоль через DOTAP, значительно усиливал ВИЧ-инфекцию до уровней, сходных с DCs, подвергшимися воздействию ВИЧ/ВПГ (11). Это указывает на то, что путь cGAS/STING, чувствительный к внутриклеточной ДНК, является одним из путей, участвующих в опосредованном HSV-2 усилении ВИЧ-инфекции в ДК.ВИЧ-инфекция в сочетании с эндогенным cGAMP, т. е. cGAMP, доставленным в цитозоль, индуцировала более высокие уровни экспрессии IFN-β в ДК по сравнению с ВИЧ отдельно и ВИЧ в сочетании с экзогенно доставленным cGAMP (12). Более высокие уровни IFN-β, экспрессируемые ДК, подвергшимися воздействию ВПГ/ВИЧ, по сравнению с уровнями, индуцированными ВИЧ в сочетании с эндогенным цГАМФ, указывают на то, что другие сигнальные пути/факторы могут быть вовлечены в противовирусный ответ в дополнение к пути цГАМФ/STING. Примечательно, что высокие уровни IFN-β, вызванные двойным воздействием, не препятствовали заражению ВИЧ в ДК, поскольку воздействие как cGAMP, так и ВИЧ/ВПГ вызывало высокие уровни рвотного рефлекса ВИЧ (1).
Внутриклеточные нуклеотиды, полученные из ВПГ-2, являются основными факторами, участвующими в усилении ВИЧ-инфекции в ДК. (A) Незрелые DC подвергались воздействию TLR2 или агонистов TLR3 отдельно или в комбинации с ВИЧ в течение 16 часов или подвергались воздействию HSV-2 (HSV) в течение 2 часов, а затем ВИЧ в течение 16 часов. Транскрипт gag ВИЧ, экспрессию IL1-β, TNF и IFN-β оценивали с помощью количественной ПЦР. (B) cGAMP вводили напрямую или доставляли через DOTAP в DC отдельно или вместе с ВИЧ в течение 16 часов, или DC подвергали воздействию HSV в течение 2 часов с последующим воздействием ВИЧ в течение 16 часов.Транскрипт gag ВИЧ, экспрессию IL1-β, TNF и IFN-β оценивали с помощью ПЦР. Данные транскрипта gag ВИЧ были нормализованы к набору ВИЧ как 1, а данные TNF, IL1-β, IFN-β были нормализованы к фиктивному набору как 1. * p < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Двойное воздействие ВПГ/ВИЧ на дендритные клетки активировало и впоследствии снизило уровни белков сенсоров цитозольной ДНК и факторов, участвующих в их сигнальных путях
Было оценено влияние ВПГ-2 на межклеточные сенсоры в дендритных клетках.Анализ транскриптома показал, что экспрессия сенсоров цитозольной ДНК и РНК AIM2, MB21D1 (cGAS), IFIh2, DDX58 (RIG1) и ZBP1 (DAI) была сильно повышена, а IFI16 был слегка повышен в ДК, подвергшихся воздействию только ВИЧ, и в Двойные открытые DC. Экспрессия MAVS, DDX41 и DHX9 снижалась или не изменялась при различных состояниях ВИЧ и ВПГ/ВИЧ (1). Некоторые вирусы, включая вирусы герпеса, обладают способностью регулировать факторы клеточных врожденных и адаптивных ответов путем вмешательства в передачу сигнала или деградацию белков.Например, ICP27 HSV1 ингибирует экспрессию IFN I типа в макрофагах человека путем взаимодействия с STING/TBK1 (56). Литическая реактивация герпесвируса, ассоциированного с саркомой Капоши, вызывает деградацию IFI16 (25), а STING расщепляется протеазой вируса денге (57). Более того, стимуляция врожденных сигнальных путей, например, STING, TBK1 и IRF3, может привести к подавлению белков после активации противовирусных реакций патогенами (58–60). В свете этого мы оценили уровни белка нескольких ДНК-сенсоров и сигнальных молекул в ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ, ВПГ или ВИЧ/ВПГ, соответственно, и обнаружили, что только ВПГ и двойное воздействие вируса значительно снижали экспрессию ДНК-сенсоров IFI16. , и cGAS, оба активатора STING-пути, что ясно указывает на то, что это был в первую очередь эффект, полученный от HSV (1).Не было никаких существенных различий в эффектах, наблюдаемых с опсонизацией или без нее. Затем мы исследовали экспрессию белка факторов пути STING и не обнаружили значительного влияния на белок STING, даже если существовала четкая тенденция к снижению белка STING для ВИЧ/ВПГ, но нижележащий фактор STING TBK1 был значительно снижен, а наблюдалась тенденция к снижению экспрессии IRF3 в ДК с двойным воздействием по сравнению с одним только ВИЧ (). В совокупности эти данные указывают на то, что протеолитическая деградация этих белков индуцируется в первую очередь ВПГ и может происходить в ДК, подвергшихся воздействию ВПГ-2, либо в результате прямого воздействия вирусных белков, либо из-за вирусной активации путей, включающих эти факторы, что впоследствии приводит к к их деградации (58).
ВПГ-2 ВИЧ-инфекция ДК индуцировала активацию и деградацию сенсоров цитозольной ДНК. Дендритные клетки подвергали воздействию свободного HSV-2 (HSV) или комплементопсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 часов, а затем инфицировали ВИЧ или комплементопсонизированным ВИЧ (CHIV) в течение 22 часов. (A) Тепловая карта по противовирусным факторам, значительно повышающая или понижающая регуляцию в одной или нескольких группах DC ВИЧ, CHIV, HSV/HIV или CHSV/CHIV DC по сравнению с DC, обработанными имитацией, с помощью РНК seq. (B) Уровни IFI16 и cGAS в ДК при различных условиях инфекции путем окрашивания клеток и анализа с помощью проточной цитометрии. (C) Уровни STING, TBK1 и IRF3 в ДК при различных условиях инфекции путем окрашивания клеток и анализа с помощью проточной цитометрии. *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Активация пути STING была необходима для усиленной ВИЧ-инфекции DCs, индуцированной HSV-2
Путь STING активируется восходящими сенсорами ДНК, такими как cGAS и IFI16, оба реализуются в цитозольном распознавании ДНК HSV (27, 61). Кроме того, недавние данные указывают на сотрудничество между IFI16 и cGAS в активации STING (62), при этом IFI16 и cGAS играют разные роли в противовирусных реакциях против вирусов герпеса (63).Примечательно, что в других исследованиях утверждается, что cGAS является основным сенсором двухцепочечной ДНК, ответственным за активацию пути STING/TBK/IRF3 (29, 64). Здесь мы оценили роль cGAS/IFI16 в усилении ВИЧ-инфекции в ДК, обусловленных ВПГ-2, с использованием ингибирующего олигодезоксинуклеотида A151 (65). Первоначально предполагалось, что внутриклеточный A151 ингибирует IFI16, но недавние открытия показали, что он также влияет на активность cGAS (65, 66). Ингибирующий олигодезоксинуклеотид A151 немного увеличивал ВИЧ-инфекцию, оцениваемую по транскрипту gag в ранний момент времени (8 ч) в ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ и ВПГ/ВИЧ.Через 24 часа не было различий между обработанными и необработанными ДК с двойной экспозицией A151 (). Интересно, что ингибирующий олигодезоксинуклеотид A151 снижал экспрессию мРНК IFN-β в условиях HSV/HIV как через 8, так и через 24 часа (). Чтобы подтвердить цитозольный результат A151, мы также проверили эффект цитозольной доставки белка герпеса UL83, который обладает способностью вмешиваться в функции IFI16 (67) и cGAS (68), в ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ или ВПГ/ВИЧ. UL83 показал тот же профиль, что и A151, для кляпа ВИЧ и экспрессии транскрипта мРНК IFN-β (дополнительная фигура 6).Данные показали, что ингибирования cGAS/IFI16 ингибирующим олигодезоксинуклеотидом A151 или UL83 было недостаточно для подавления усиленной ВИЧ-инфекции, но удалось снизить, но не полностью подавить ответ IFN-β, поэтому мы не могли исключить остаточную активность. этих путей в ДК. Для дальнейшего изучения роли пути STING в усилении инфекции и усилении противовирусного ответа в DC с двойным воздействием мы нацелились на белок STING, используя рекомбинантный белок HPV 18 E7, который, как известно, ингибирует этот путь, связывая и блокируя STING (69, 70).Внутриклеточно доставленный E7 успешно снижал экспрессию транскрипта gag и IFN-β в ДК с двойной инфекцией. Однако снижение было незначительным для кляпа, но можно было увидеть тенденцию (). Затем, чтобы проверить и усилить роль STING, мы оценили роль пути STING, используя клеточную линию THP1, лишенную sting из-за нокаута STING с помощью siRNA, и обнаружили снижение экспрессии gag в клетках, подвергшихся воздействию ВИЧ/ВПГ, но не нашли четких доказательств этого в CHSV/CHIV (), что может быть связано с низким уровнем CR3 у THP1.Взятые вместе, наши результаты показывают, что путь STING участвует в усилении ВИЧ-инфекции в DC, подвергшихся воздействию HSV-2.
Путь STING был вовлечен в усиленную ВИЧ-инфекцию DC, подвергшихся воздействию HSV-2. Ингибирующий IFI16/cGAS олигонуклеотид A151 доставляли внутриклеточно с помощью DOTAP в DC. Затем клетки подвергали воздействию свободного HSV-2 (HSV) или комплемент-опсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 часов до заражения ВИЧ или комплемент-опсонизированного ВИЧ (CHIV) в течение (A) 6 часов (B) или 22 часов. (B) Ингибитор белка STING Белки HPV 18 E7 доставляли внутриклеточно с помощью DOTAP в DC. Затем клетки подвергали воздействию свободного HSV или CHSV в течение 2 часов перед заражением ВИЧ или CHIV в течение 22 часов. Транскрипт gag ВИЧ и экспрессию IFN-β оценивали с помощью количественной ПЦР. (C) Клетки THP1 с нокаутом STING или клетками дикого типа подвергались воздействию свободного HSV-2 или комплементопсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 часов, затем инфицировались ВИЧ или комплементопсонизированным ВИЧ (CHIV) в течение 22 часов. Транскрипт gag ВИЧ и экспрессию IFN-β оценивали с помощью количественной ПЦР.Данные кляпа ВИЧ были нормализованы к набору свободных вирусов как 1, а данные IFN-β были нормализованы к набору фиктивных вирусов как 1. * p < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Усиление ВИЧ-инфекции в ДК, обусловленных ВПГ-2, вероятно, было связано со снижением уровней регуляторных факторов ВИЧ как следствие активации пути cGAS-STING
Профили транскриптома ясно продемонстрировали комбинаторные эффекты ВПГ-2 и воздействие ВИЧ на многие основные регуляторы ВИЧ-инфекции в ДК, включая SAMHD1, TREX, APOBEC3G, PPIA (циклофилин А) и BST2 (тетерин) ().Экспрессия генов большинства регуляторных факторов ВИЧ была увеличена в ДК, инфицированных ВИЧ отдельно или в сочетании с ВПГ-2, по сравнению с контролем, тогда как экспрессия SAMHD1 была снижена. Кроме того, BST2 был немного снижен в группе CHIV/CHSV. Инфекция ВПГ-2 может модулировать экспрессию нескольких белков (25, 71), а активация противовирусных и врожденных путей может влиять на экспрессию и уровни белков, поэтому мы изучили влияние воздействия ВПГ-2 на уровни белков регуляторов ВИЧ. в ДК.Уровни белка SAMHD1, APOBEC3G и TREX1 были значительно ниже в одиночных HSV и CHSV и в ДК с двойным воздействием HSV/HIV и CHIV/CHSV по сравнению с ложно обработанными клетками. ВИЧ и ВПЧ не влияли на эти факторы или оказывали минимальное влияние (). Затем мы оценили, зависело ли снижение регуляторных факторов ВИЧ от внутриклеточной активации пути cGAS-STING с помощью двухцепочечной ДНК, полученной из HSV-2, с использованием cGAMP, который продуцируется после активации cGAS двухцепочечной ДНК (61, 72). ДК, подвергшиеся воздействию как цитозольного цГАМФ, так и ВИЧ, имели более низкие уровни белка как SAMHD1, так и TREX1 по сравнению с ДК, подвергшимися воздействию только ВИЧ.В случае APOBEC3G на экспрессию не влиял cGAMP, что указывает на более сложную активацию и/или протеолиз, индуцированную факторами, полученными из HSV-2, по сравнению с одним cGAMP (). Эти результаты демонстрируют, что путь cGAS-STING, активируемый интактной ДНК HSV-2, способствует опосредованному HSV-2 усилению ВИЧ-инфекции в ДК за счет снижения количества нескольких ключевых регуляторных факторов ВИЧ.
Активация пути STING в ДК с двойной инфекцией снизила уровни белков нескольких факторов рестрикции ВИЧ.Дендритные клетки подвергали воздействию свободного HSV-2 или комплементопсонизированного вируса (CHSV) в течение 2 часов, а затем инфицировали ВИЧ или комплементопсонизированным ВИЧ (CHIV) в течение 22 часов. (A) Тепловая карта из данных транскриптома РНК seq внутриклеточных сенсоров, значительно повышающая или понижающая регуляция в одном или нескольких состояниях инфекции ВИЧ, CHIV, HSV/ВИЧ или CHSV/CHIV по сравнению с ложно обработанными ДК. (B) Уровни SAMHD1, ABOBEC3G и TREX1 в ДК при различных условиях инфекции оценивали путем окрашивания клеток и анализировали с помощью проточной цитометрии. (C) cGAMP вводили экзогенно или доставляли внутриклеточно через DOTAP в DC, после чего DC оставляли без воздействия или подвергали воздействию вместе с ВИЧ в течение 16 часов. Кроме того, одна группа ДК подвергалась воздействию ВПГ в течение 2 часов, а затем ВИЧ или ВПЧ в течение 16 часов. Уровни SAMHD1, ABOBEC3G и TREX1 оценивали путем окрашивания клеток и анализировали с помощью проточной цитометрии. * р < 0,05; ** р < 0,005; *** р < 0,0005. Н = 5–8.
Обсуждение
Более глубокое понимание факторов, влияющих на ВИЧ-инфекцию, имеет большое значение, и было показано, что ранее существовавшая инфекция и/или воспаление слизистой оболочки половых органов повышают риск заражения ВИЧ.В случае ВПГ-2 риск заражения ВИЧ-инфекцией возрастает в три раза (2, 9, 14). Во время первичной ВИЧ-инфекции слизистых оболочек ВПГ-2, как инфекционные, так и нейтрализованные вирусы, а также остатки отмирающих инфицированных клеток будут влиять на локальные врожденные и адаптивные иммунные реакции. ДК, расположенные в слизистой оболочке, являются одними из первых клеток-мишеней для ВИЧ. Здесь мы стремились установить эффекты, вызванные кондиционированием DCs HSV-2 до заражения ВИЧ. Мы обнаружили более высокую восприимчивость и уровень продуктивной ВИЧ-инфекции в ДК, подвергшихся воздействию ВПГ-2, что зависело от структурно интактной ДНК ВПГ-2 в ДК.Примечательно, что высокие уровни продукции IFN-β, вызванные в ДК воздействием ВПГ-2, не смогли контролировать инфекцию, поскольку IFN-β увеличивался параллельно с увеличением ВИЧ-инфекции в ДК с двойным воздействием. Эффект HSV-2 на репликацию ВИЧ в ДК не зависел от TLR2, TLR3 или IFI16, все три PRR, которые, как известно, активируются вирусом герпеса (55), а скорее от активации пути cGAS-STING и последующего снижения белка. уровни нескольких ключевых регуляторов ВИЧ-инфекции, т.е. TREX1, SAMHD1 и ABOBEC3G, что может быть связано с протеолитической деградацией.
ДК, расположенные в слизистой оболочке, считаются мишенью для ВИЧ-1, что было показано на макаках, инфицированных ВИО, и на слизистой оболочке шейки матки и крайней плоти in vitro моделей (73–75). Первоначальное взаимодействие вируса-хозяина в слизистой оболочке также включает активацию системы комплемента (19), и как врожденный, так и адаптивный иммунитет находятся под влиянием системы комплемента, и комплемент может быть вовлечен в патогенез хронических заболеваний (76). Вирионы, передаваемые при половой передаче в ДК, должны быть комплементарными и/или комплементарными антителами, опсонизированными частицами, наблюдаемыми при контакте с семенной жидкостью и/или секретами шейки матки (19).Результат нашего исследования с использованием дендритных клеток, полученных из моноцитов, которые мы считаем хорошей моделью для in vivo дендритных клеток тканей/слизистых оболочек, наблюдая аналогичные результаты для свободной и комплементарной опсонизированной инфекции ВИЧ-1 и для инфекции ВПГ-2 в ДК слизистой оболочки шейки матки. [(75) и Svanberg et al. работа в процессе]. ДК, происходящие из моноцитов, которые мы использовали, по-видимому, похожи на недавно определенные эпидермальные ДК CD11c+, которые являются мишенью для ВИЧ-инфекции (77). Эпидермальные CD11c+ DC и клетки Лангерганса могут играть важную роль в передаче ВИЧ-1 половым путем (8, 77).Тот факт, что лишь несколько процентов ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ и ВПГ-2, продуктивно инфицированы обоими вирусами (8), ясно указывает на то, что усиленная ВИЧ-инфекция ДК требовала воздействия только вирионов ВПГ-2 или ДНК, полученной из вируса. Это создаст среду, в которой ранее существовавшая инфекция ВПГ-2 привлекает и обеспечивает больше клеток-мишеней для ВИЧ, например, Т-клетки CD4 и ДК (2, 8, 9), а также среду с микрообластями с ВПГ-2, провоспалительные цитокины и ДНК ВПГ-2, высвобождаемые умирающими клетками.В совокупности все эти факторы обуславливают предкондиционирование ДК слизистых оболочек и делают их более восприимчивыми к продуктивной ВИЧ-инфекции.
Первоначальный анализ транскриптома показал, что все состояния инфекции имеют разные профили экспрессии с некоторым сходством между состояниями со свободными вирусами, т. е. ВИЧ и ВИЧ/ВПГ, и между вирусами с комплементарной опсонизацией, т. е. CHIV и CHIV/CHSV. Многочисленные пути, участвующие в противовирусных и воспалительных реакциях, были сильно затронуты в ДК, инфицированных свободным ВИЧ или комплемент-опсонизированным или неопсонизированным ВПГ/ВИЧ, тогда как комплемент-опсонизированные вирусы в целом активировали меньшее количество путей.Эффективное подавление активации ДК с помощью опсонизированного комплементом ВИЧ должно быть в первую очередь связано с подавлением врожденных и адаптивных путей, опосредованных передачей сигналов рецептора комплемента 3 (CR3), задействованных инактивированным фрагментом C3b на поверхности вируса (20). Прекондиционирование ДК с помощью ВПГ-2 с последующей ВИЧ-инфекцией явно потенцировало активацию ДК по сравнению с одной только ВИЧ-инфекцией. Это должно зависеть в первую очередь от сильной и продолжительной активации, вызванной ВПГ-2, поскольку сам по себе ВИЧ вызывает слабую и более временную активацию ДК.
Наблюдалась массивная активация транскрипции воспалительных и противовирусных факторов в ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ/ВПГ, однако это не полностью отражалось на уровне белка без каких-либо изменений или даже со снижением уровня некоторых белков. Это соответствует нашим предыдущим наблюдениям для ДК, инфицированных ВПГ-2 (18). Это несоответствие может быть вызвано несколькими причинами, такими как посттранскрипционная модификация, деградация белками, происходящими от ВПГ-2 (25, 56), и/или целенаправленная протеолитическая деградация белков, участвующих в клеточных процессах, вследствие активации вирусами клеточного стресса, такого как аутофагия и постпатогенная активация, подавление факторов.Вирусы герпеса обладают широким спектром стратегий уклонения от врожденного иммунного восприятия и повышения собственной выживаемости. Общие стратегии, используемые вирусами герпеса, заключаются в ингибировании или деградации белков, участвующих в противовирусных иммунных реакциях (25, 48, 78). Некоторые белки ВПГ и вирусные некодирующие РНК могут модулировать экспрессию белка, например, предполагается, что белок UL41, кодируемый ВПГ, обладает способностью вызывать быстрое и избирательное отключение синтеза белка в клетке-хозяине для нескольких белков, включая гадюку, и тетерин (79–82).
Было показано, что множественные PRR участвуют в клеточном распознавании и защите от вирусов герпеса (55), когда мы протестировали TLR2 и TLR3, мы не обнаружили, что ни один из этих TLR не участвует в повышенной ВИЧ-инфекции, наблюдаемой в ДК, обусловленных ВПГ-2. . Вместо этого недавние сообщения указывают на активацию пути STING и его важную роль в противовирусной защите против HSV (83, 84). певческий каскад STING может пересекаться как с TBK1/IRF3, так и с NFκB путем (85–87). В активации STING участвуют несколько ДНК-сенсоров, таких как IFI16, DDX41 и cGAS, но накопленные данные ясно показали, что cGAS-сенсор необходим для большинства типов клеток.Это верно, даже если существует взаимодействие в активации STING между IFI16 и cGAS в кератиноцитах (62), и IFI16 способствует продукции cGAS cGAMP в макрофагах человека (72). Все наши данные указывают на активацию пути cGAS STING в ДК с двойной инфекцией. Когда дело доходит до повышенного уровня ВИЧ-инфекции, мы можем исключить участие IFI16, поскольку блокирование этого фактора не привело к снижению ВИЧ-инфекции, в то время как прямое нацеливание на STING помогло сделать то же самое. Опять же, мы не можем исключить участие IFI16 в обнаружении двойной инфекции и сотрудничество этого сенсора с cGAS в активации противовирусных ответов IFN-β, поскольку блокировка IFI16 снижала ответ IFN-β.Важная роль IFI16 в восприятии внутриклеточной ДНК ранее была показана в макрофагах человека посредством усиления продукции и функции cGAMP (72).
ВИЧ-инфекция ДК жестко регулируется и ограничивается набором противовирусных факторов, таких как SAMHD1, APOBEC3G, TRIM5α, SLFN11 и IFITM, которые проявляют свои эффекты на разных этапах цикла репликации ВИЧ (88–90). Эти факторы контролируют или подавляют способность ВИЧ индуцировать продуктивную инфекцию SAMHD1 как основного супрессивного фактора ВИЧ (90, 91).SAMHD1 ингибирует ранние стадии ВИЧ-инфекции, ограничивая синтез вирусной кДНК за счет истощения дезоксинуклеотидтрифосфатов (dNTP) (90), а деградация SAMHD1 с помощью VPX ВИЧ-2 приводит к усилению инфекции DC и продукции IFN I типа (91). ВИЧ использует 3′-репарирующую экзонуклеазу 1 хозяина (TREX1), наиболее распространенную 3′-5′ ДНКазу в клетках, для связывания и деградации избытка цитозольной дцДНК ВИЧ-1 и, таким образом, ограничения ответа IFN I типа (88). Было показано, что в дополнение к ограничению ВИЧ-инфекции SAMHD1 и TRIM5α также участвуют в регуляции инфекции HSV-1 путем ограничения репликации ДНК (92, 93).Мы обнаружили высокую степень протеолитической деградации нескольких факторов рестрикции ВИЧ-1, включая SAMHD1, IFI16, TREX1 и APOBEC3G (88–90), в ДК с двойным воздействием. Субоптимальные уровни нескольких ключевых рестрикционных факторов могут объяснить потерю контроля ДК над ВИЧ-инфекцией и усиление продуктивной ВИЧ-инфекции в ДК. Интересно, что активация пути cGAS-STING в ДК параллельно с воздействием ВИЧ индуцировала деградацию SAMHD1 и TREX1, но не APOBEC3G.Более того, внутриклеточная активация пути cGAS-STING с помощью cGAMP оказывала такое же влияние на репликацию ВИЧ и выработку цитокинов, как и предварительное кондиционирование с помощью HSV-2, что указывает на существенную роль этого пути в клеточной модуляции HSV-2 функций DC. Активация пути STING в ДК, подвергшихся воздействию как ВИЧ, так и ВПГ-2, должна впоследствии привести к накоплению большего количества нуклеотидов в цитозоле из-за более низких уровней 3′-5′-экзонуклеазы TREX1 и фосфогидролазы SAMHD1, которые должны поддерживать вирусная репликация.Отсутствие деградации APOBEC3G экзогенной активацией STING cGAMP указывает на то, что в этом были задействованы другие процессы/факторы, индуцированные HSV-2, и какие именно факторы еще предстоит установить, но они могут включать факторы, полученные из HSV, или факторы, активированные воздействием вируса. Например, открытие Marsden et al. тот факт, что TNF, продуцируемый DC, подвергшимися воздействию HSV-2, был вовлечен в усиленную ВИЧ-инфекцию сторонних DC (8), указывает на то, что TNF может быть одним из факторов, участвующих в распространении ВИЧ-инфекции в DC.
Многие цитозольные ДНК-сенсоры и кофакторы, т. е. IFI16, cGAS, STING, TBK1 и IRF3, важные для распознавания вирусных PAMP, также подвергались деградации в ДК с двойным воздействием ВИЧ и ВПГ-2, но не в ВИЧ экспонированные ДК, демонстрирующие прямое и/или косвенное участие ВПГ-2 в этом процессе. Снижение количества некоторых белков, участвующих в пути STING, например, IFI16, cGAS, STING, TBK1 и IRF3, вероятно, было связано с вирусной активацией пути STING (58, 94) и/или прямой деградацией белками вирусного происхождения (95). .Чтобы разобраться в этом, необходимы будущие исследования, изучающие фосфорилирование и локализацию этих белков. Некоторые белки ДНК-вируса могут расщеплять или разрушать сенсоры ДНК. Например, сенсор dsDNA IFI16, который активирует ответы IFN-β и образует инфламмасому, деградирует в клетках, инфицированных HSV-1, путем нацеливания на протеасомы ICP0 (48) и в клетках с литической саркомой Капоши, ассоциированной с герпесвирусной инфекцией (25). STING и cGAS также являются обычными мишенями для ДНК-вирусных белков, которые разрушают эти факторы или препятствуют их последующей передаче сигналов (57, 70, 96-98).В ДК с двойным воздействием уровни цГАС были ниже по сравнению с неинфицированными или одиночными ВИЧ-инфицированными клетками, что должно снижать продукцию цГАМФ и активацию STING в результате клеточной регуляции и контроля этого фактора после активации ( 56). Несколько вирусов обнаруживаются и регулируются путем STING, включая ВПГ-1, ВПГ-2 и ВИЧ-1 (29, 56). ДНК ВИЧ-1 можно обнаружить с помощью cGAS и пути STING (29), однако этому противодействует и предотвращается капсид ВИЧ-1 за счет рекрутирования клеточных белков, т.е.g., циклофилин А и TRIM5α (99). HSV-1 противодействует пути STING-cGAS с помощью нескольких белков, включая ICP27, который может ингибировать экспрессию IFN типа I, воздействуя на сигнальный комплекс STING (56). Ясно, что и ВИЧ, и ВПГ-2 регулируются STING-путем и развили стратегии для установления инфекции путем подавления активации STING и последующего ответа IFN I типа.
Мы обнаружили и ранее показали (20), что в ДК, происходящих из моноцитов, воздействие только ВИЧ-1 действительно вызывает всплеск низкого уровня IFN-β, этот ответ является временным и слабым по сравнению со многими другими вирусами, включая ВПГ-2 (18).Мы считаем, что этот вывод соответствует предыдущим исследованиям Harman et al. и Gringhuis et al. которые демонстрируют, что ВИЧ-1 обладает способностью с помощью нескольких механизмов препятствовать выработке IFN-β и избегать противовирусной защиты хозяина (100–102). Двойное воздействие индуцировало высокий уровень противовирусного фактора IFN-β и последующего ISG, такого как MX1 и MX2, в DC через активацию ДНК HSV-2 пути STING. Высокий уровень продукции IFNβ в двойных свободных и комплементарно опонизированных ДК, подвергшихся воздействию ВИЧ/ВПГ, не смог блокировать ВИЧ-инфекцию, но ясно, что он подавлял инфекцию, видя, что ВИЧ-инфекция была еще больше повышена в ДК, где IFN-β был подавлен. путем ингибирования ДНК-сенсора IFI16.Это продемонстрировало уравновешивающее действие пути STING, играющего роль как в усилении ВИЧ-инфекции, так и в контроле уровня инфекции путем активации IFN I типа. Ранее мы установили, что ВИЧ-1 может индуцировать продукцию IFN-β в ДК зависимым от IRF1/7 образом, тогда как комплемент опсонизировал ВИЧ, активируя IRF3, но это не приводило к продукции IFN-β или вызывало очень низкую продукцию (20). Вероятно, это связано с индуцированной CR3 супрессией вирусом, подвергнутым комплементарной опсонизации, и с тем, что супрессия CR3 IFN-β подавляется сильной активацией, которую HSV-2 индуцирует в DC.
Мы ясно продемонстрировали, что зависимое от HSV-2 усиление ВИЧ-инфекции требует интактной двухцепочечной ДНК HSV-2, но не активной репликации ДНК HSV. Клеточная поддержка продуктивной ВИЧ-инфекции должна осуществляться за счет регуляции и протеолитической деградации факторов рестрикции ВИЧ, т. е. SAMHD1, APOBEC3G, IFI16 и TREX1. Механизм, ответственный за протеолитическую деградацию белков SAMHD1, TREX1 и APOBEC3G, по-видимому, облегчается активацией пути STING, который, насколько нам известно, до сих пор не описан, и эффектом одного или нескольких белков HSV-2. .Деградация нескольких регуляторных факторов ВИЧ, наблюдаемая, когда мы активировали STING через путь cGAMP-cGAS путем добавления экзогенного cGAMP, подтверждает роль пути STING в деградации этих белков в ДК, подвергшихся воздействию двойного ВИЧ-ВПГ. Кроме того, противовирусные и воспалительные пути, активируемые одним ВИЧ или двойным воздействием ВИЧ/ВПГ, имели различную форму в присутствии или отсутствии молекул комплемента. Эти данные показали, что внутриклеточное репрограммирование ВПГ-2 усиливает способность ВИЧ инфицировать ДК и обеспечивает кондиционированное микроокружение, благоприятное для передачи ВИЧ и установления инфекции.
Заявление об этике
Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Шведским советом по этике. Разрешения на этические вопросы M173-07 и M75-08/2008. Письменное информированное согласие на участие в этом исследовании не требовалось в соответствии с национальным законодательством и институциональными требованиями.
Авторские вклады
Исследования, разработанные EC, CS и ML. EC, RE, CS, PB, MK, JH и SN провели исследование. KE предоставила новые реагенты и аналитические инструменты.KO, EC, RE, CS, KE, ES и ML проанализировали данные. EC, KE, CS, ES и ML написали статью. ML руководил проектом.
Конфликт интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Вычисления для RNAseq были выполнены на ресурсах, предоставленных SNIC через Упсальский многопрофильный центр передовых вычислительных наук (UPPMAX) в рамках проекта b2015293.
Сноски
Финансирование. Эта работа поддержана: AI52731, Шведским исследовательским советом, Шведским фондом исследований врачей против СПИДа, Шведским агентством по международному сотрудничеству в целях развития, SIDA SARC, VINNMER for Vinnova, Исследовательским фондом университетской больницы Линчепинга, CALF, Шведским медицинским обществом. , и Совет медицинских исследований Юго-Восточной Швеции для ML.
Ссылки
2. Freeman EE, Weiss HA, Glynn JR, Cross PL, Whitworth JA, Hayes RJ.Инфекция, вызванная вирусом простого герпеса 2, увеличивает риск инфицирования ВИЧ у мужчин и женщин: систематический обзор и метаанализ продольных исследований. СПИД. (2006) 20:73–83. 10.1097/01.aids.0000198081.09337.a7 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]3. Уолд А., Линк К. Риск заражения вирусом иммунодефицита человека у лиц, инфицированных вирусом простого герпеса 2 типа: метаанализ. J заразить дис. (2002) 185:45–52. 10.1086/338231 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]6. Schiffer JT, Swan DA, Corey L, Wald A. Быстрая вирусная экспансия и короткий период полувыведения лекарства объясняют неполную эффективность современных противовирусных агентов, направленных против вируса простого герпеса 2.Противомикробные агенты Chemother. (2013) 57:5820–9. 10.1128/AAC.01114-13 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]7. Шиффер Дж.Т., Свон Д.А., Магарет А., Шакер Т.В., Уолд А., Кори Л. Математическое моделирование предсказывает, что повышенное выделение ВПГ-2 у ВИЧ-1 инфицированных людей происходит из-за плохого иммунологического контроля в ганглиях и слизистой оболочке половых органов. ПЛОС ОДИН. (2016) 11:e0155124. 10.1371/journal.pone.0155124 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]8. Марсден В., Донахи Х., Бертрам К.М., Харман А.Н., Наср Н., Кеошкериан Э. и др.. Дендритные клетки, инфицированные вирусом простого герпеса типа 2, продуцируют TNF-альфа, который усиливает экспрессию CCR5 и стимулирует продукцию ВИЧ соседними инфицированными клетками. Дж Иммунол. (2015) 194:4438–45. 10.4049/jimmunol.1401706 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]9. де Йонг М.А., де Витте Л., Тейлор М.Е., Гейтенбек Т.Б. Вирус простого герпеса типа 2 повышает восприимчивость к ВИЧ-1, влияя на функцию клеток Лангерганса. Дж Иммунол. (2010) 185:1633–41. 10.4049/jimmunol.0
7 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]10.Sartori E, Calistri A, Salata C, Del Vecchio C, Palu G, Parolin C. Инфекция вируса простого герпеса типа 2 увеличивает проникновение вируса иммунодефицита человека типа 1 в первичные макрофаги человека. Вирол Дж. (2011) 8:166. 10.1186/1743-422X-8-166 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]11. Реббапрагада А., Вачихи С., Петтенгелль С., Сандерджи С., Хуибнер С., Яоко В. и др. . Отрицательная синергия слизистых оболочек между Herpes simplex типа 2 и ВИЧ в женских половых путях. СПИД. (2007) 21:589–98. 10.1097/QAD.0b013e328012b896 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]12. Чжу Дж., Хладик Ф., Вудворд А., Клок А., Пэн Т., Джонстон С. и др. . Сохранение клеток, положительных по рецептору ВИЧ-1, после реактивации ВПГ-2 является потенциальным механизмом повышенного заражения ВИЧ-1. Нат Мед. (2009) 15:886–92. 10.1038/nm.2006 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]13. Martinelli E, Tharinger H, Frank I, Arthos J, Piatak M, Jr, Lifson JD, et al. . Инфекция ВПГ-2 дендритных клеток амплифицирует высокочувствительные клетки-мишени ВИЧ-1.PLoS Патог. (2011) 7:e1002109. 10.1371/journal.ppat.1002109 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]14. Goode D, Truong R, Villegas G, Calenda G, Guerra-Perez N, Piatak M, et al. . Увеличение экспрессии альфа4бета7, вызванное ВПГ-2, коррелирует с повышенной восприимчивостью к вагинальной инфекции SHIV (SF162P3). PLoS Патог. (2014) 10:e1004567. 10.1371/journal.ppat.1004567 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]15. де Йонг М.А., де Витте Л., Аудхофф М.Дж., Гринхейс С.И., Галлай П., Гейтенбек Т.Б.Агонисты TNF-альфа и TLR повышают восприимчивость к передаче ВИЧ-1 клетками Лангерганса человека ex vivo . Джей Клин Инвест. (2008) 118:3440–52. 10.1172/JCI34721 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]16. Булал Х., Чомонт Н., Хеффнер-Кавайон Н., Казачкин М.Д., Белек Л., Хочини Х. Опсонизация ВИЧ-1 комплементом спермы усиливает инфекцию эпителиальных клеток человека. Дж Иммунол. (2002) 169:3301–6. 10.4049/jimmunol.169.6.3301 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]17. Рейс Мачадо Дж., Да Силва М.В., Кавеллани К.Л., Дос Рейс М.А., Монтейру М.Л., Тейшейра Вде П. и соавт.. Мукозальный иммунитет в женских половых путях, ВИЧ/СПИД. Биомед Рез Инт. (2014) 2014:350195. 10.1155/2014/350195 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]18. Крисчи Э., Эллегард Р., Нистром С., Рондал Э., Серрандер Л., Бергстром Т. и др. . Опсонизация комплемента способствует инфицированию дендритных клеток человека вирусом простого герпеса 2 типа. Дж Вирол. (2016) 90:4939–50. 10.1128/ОВИ.00224-16 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]19. Штойбер Х., Банки З., Вилфлингседер Д., Дирих М.П.Взаимодействие комплемента с ВИЧ на всех этапах вирусного патогенеза. вакцина. (2008) 26:3046–54. 10.1016/j.vaccine.2007.12.003 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]20. Эллегард Р., Крисчи Э., Бургенер А., Шовалл С., Бирс К., Уэстмакотт Г. и др. . Опсонизация комплемента ВИЧ-1 приводит к снижению противовирусного и воспалительного ответа в незрелых дендритных клетках через CR3. Дж Иммунол. (2014) 193:4590–601. 10.4049/jimmunol.1401781 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]21. Байтай З., Спет С., Эрдей А., Дирих М.П.Передний край: продуктивная инфекция ВИЧ-1 дендритных клеток через рецептор комплемента типа 3 (CR3, CD11b/CD18). Дж Иммунол. (2004) 173:4775–8. 10.4049/jimmunol.173.8.4775 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]22. Saifuddin M, Parker CJ, Peeples ME, Gorny MK, Zolla-Pazner S, Ghassemi M, et al. . Роль связанных с вирионом гликозилфосфатидилинозитол-связанных белков CD55 и CD59 в устойчивости к комплемента клеточных линий и первичных изолятов ВИЧ-1. J Эксперт Мед. (1995) 182:501–9. 10.1084/джем.182.2.501 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]23. Булал Х., Чомонт Н., Рекена М., Насреддин Н., Саиди Х., Легофф Дж. и др. . Опсонизация ВИЧ комплементом усиливает инфицирование дендритных клеток и перенос вируса на CD4 Т-клетки зависимым от CR3 и DC-SIGN образом. Дж Иммунол. (2007) 178:1086–95. 10.4049/jimmunol.178.2.1086 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]24. Melchjorsen J, Rintahaka J, Soby S, Horan KA, Poltajainen A, Ostergaard L, et al. . Раннее врожденное распознавание вируса простого герпеса в первичных макрофагах человека опосредуется через MDA5/MAVS-зависимый и MDA5/MAVS/независимый от РНК-полимеразы III пути.Дж Вирол. (2010) 84:11350–8. 10.1128/ОВИ.01106-10 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]25. Рой А., Датта Д., Икбал Дж., Писано Г., Гджиши О., Ансари М.А. и др. . Сенсор ДНК ядерного врожденного иммунитета IFI16 деградирует во время литической реактивации герпесвируса, ассоциированного с саркомой Капоши (KSHV): роль IFI16 в поддержании латентности KSHV. Дж Вирол. (2016) 90:8822–41. 10.1128/ОВИ.01003-16 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]26. Датта Д., Датта С., Веттил М.В., Рой А., Ансари М.А., Икбал Дж. и др.. BRCA1 регулирует опосредованное IFI16 ядерное врожденное распознавание ДНК вируса герпеса и последующую индукцию врожденных воспалительных ответов и ответов интерферона-β. PLoS Патог. (2015) 11:e1005030. 10.1371/journal.ppat.1005030 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]27. Orzalli MH, Broekema NM, Diner BA, Hancks DC, Elde NC, Cristea IM, et al. . cGAS-опосредованная стабилизация IFI16 способствует врожденной передаче сигналов во время инфекции, вызванной вирусом простого герпеса. Proc Natl Acad Sci USA. (2015) 112:E1773–81. 10.1073/pnas.1424637112 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]28. Хансен К., Прабакаран Т., Лауссен А., Йоргенсен С.Е., Рахбек С.Х., Дженсен С.Б. и др. . Listeria monocytogenes индуцирует экспрессию IFNβ через IFI16-, cGAS- и STING-зависимый путь. EMBO J. (2014) 33:1654–66. 10.15252/embj.201488029 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]29. Gao D, Wu J, Wu YT, Du F, Aroh C, Yan N и др. . Циклическая GMP-AMP-синтаза является врожденным иммунным сенсором ВИЧ и других ретровирусов.Наука. (2013) 341:903–6. 10.1126/science.1240933 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]30. Якобсен М.Р., Бак Р.О., Андерсен А., Берг Р.К., Дженсен С.Б., Тенчуан Дж. и др. . IFI16 определяет формы ДНК цикла репликации лентивируса и контролирует репликацию ВИЧ-1. Proc Natl Acad Sci USA. (2013) 110:E4571–80. 10.1073/pnas.1311669110 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]31. Башни Г.Дж., Нурсадеги М. Взаимодействие между ВИЧ-1 и клеточно-автономной врожденной иммунной системой.Клеточный микроб-хозяин. (2014) 16:10–8. 10.1016/j.chom.2014.06.009 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]32. Schon E, Harandi AM, Nordstrom I, Holmgren J, Eriksson K. Вакцинация дендритными клетками защищает мышей от летального исхода, вызванного инфекцией вируса простого генитального герпеса 2 типа. J Reprod Immunol. (2001) 50:87–104. 10.1016/S0165-0378(00)00094-2 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]33. Россио Дж.Л., Эссер М.Т., Сурьянараяна К., Шнайдер Д.К., Бесс Дж.В., младший, Васкес Г.М. и соавт. . Инактивация инфекционности вируса иммунодефицита человека 1 типа с сохранением конформационной и функциональной целостности белков поверхности вириона.Дж Вирол. (1998) 72:7992–8001. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]34. Кутч О., Бенвенист Э.Н., Шоу Г.М., Леви Д.Н. Прямой и количественный одноклеточный анализ реактивации вируса иммунодефицита человека типа 1 из латентного периода. Дж Вирол. (2002) 76:8776–86. 10.1128/ОВИ.76.17.8776-8786.2002 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]35. Леви Д.Н., Альдрованди Г.М., Кутч О., Шоу Г.М. Динамика рекомбинации ВИЧ-1 в его естественных клетках-мишенях. Proc Natl Acad Sci USA. (2004) 101:4204–9. 10.1073/pnas.0306764101 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]36. Тьомсланд В., Эллегард Р., Че К., Хинкула Дж., Лифсон Дж. Д., Ларссон М. Опсонизация комплемента ВИЧ-1 усиливает поглощение дендритными клетками и включает семейства эндоцитарных лектиновых и интегриновых рецепторов. ПЛОС ОДИН. (2011) 6:e23542. 10.1371/journal.pone.0023542 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]37. Vandesompele J, De Preter K, Pattyn F, Poppe B, Van Roy N, De Paepe A, et al. . Точная нормализация количественных данных ОТ-ПЦР в реальном времени путем геометрического усреднения нескольких генов внутреннего контроля.Геном биол. (2002) 3:0034. 10.1186/gb-2002-3-7-research0034 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]39. Babraham-биоинформатика FastQC: инструмент контроля качества для высокопроизводительных данных о последовательностях. Кембридж: Babraham-Биоинформатика; (2017). [Google Академия] 41. Добин А., Дэвис К.А., Шлезингер Ф., Дренков Дж., Залески С., Джа С. и соавт. . STAR: сверхбыстрый универсальный выравниватель RNA-seq. Биоинформатика. (2013) 29:15–21. 10.1093/bioinformatics/bts635 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]42.Liao Y, Smyth GK, Shi W. featureCounts: эффективная программа общего назначения для сопоставления считываний последовательностей с геномными признаками. Биоинформатика. (2014) 30:923–30. 10.1093/bioinformatics/btt656 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]43. Лав М.И., Хубер В., Андерс С. Модерированная оценка изменения кратности и дисперсии для данных секвенирования РНК с помощью DESeq2. Геном биол. (2014) 15:550. 10.1186/s13059-014-0550-8 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]44. Goldwich A, Prechtel AT, Muhl-Zurbes P, Pangratz NM, Stossel H, Romani N, et al.. Вирус простого герпеса типа I (HSV-1) реплицируется в зрелых дендритных клетках, но может передаваться только в зависимости от межклеточного контакта. Дж. Лейкок Биол. (2011) 89:973–9. 10.1189/jlb.0310180 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]45. Abaitua F, Hollinshead M, Bolstad M, Crump CM, O’Hare P. Сигнал ядерной локализации в белке герпесвируса VP1-2 необходим для инфекции через капсидный путь к ядерной поре. Дж Вирол. (2012) 86:8998–9014. 10.1128/ОВИ.01209-12 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]46.Миклоска З., Босняк Л., Каннингем А.Л. Незрелые дендритные клетки, происходящие из моноцитов, продуктивно инфицируются вирусом простого герпеса 1 типа. J Virol. (2001) 75:5958–64. 10.1128/ОВИ.75.13.5958-5964.2001 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]47. Гао Г., Луо Х. Убиквитин-протеасомный путь при вирусных инфекциях. Может J Physiol Pharmacol. (2006) 84:5–14. 10.1139/y05-144 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]48. Орзалли М.Х., ДеЛука Н.А., Книпе Д.М. Индукция ядерного IFI16 передачи сигналов IRF-3 во время герпесвирусной инфекции и деградация IFI16 вирусным белком ICP0.Proc Natl Acad Sci USA. (2012) 109:E3008–17. 10.1073/pnas.1211302109 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]49. Liu Y, Li M, Zhang D, Zhang M, Hu Q. Гликопротеин gD HSV-2 нацелен на домен CC тетерина и способствует деградации тетерина через лизосомальный путь. Вирол Дж. (2016) 13:154. 10.1186/s12985-016-0610-7 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]50. Ushijima Y, Luo C, Kamakura M, Goshima F, Kimura H, Nishiyama Y. Вирус простого герпеса UL56 взаимодействует с убиквитинлигазой семейства Nedd4 и регулирует зуд.Вирол Дж. (2010) 7:179. 10.1186/1743-422X-7-179 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]51. Стефаниду М., Рамос И., Мас Касулло В., Трепанье Дж. Б., Розенбаум С., Фернандес-Сесма А. и др. . Вирус простого герпеса 2 (ВПГ-2) предотвращает созревание дендритных клеток, индуцирует апоптоз и запускает высвобождение провоспалительных цитокинов: возможная связь с синергией ВПГ-ВИЧ. Дж Вирол. (2013) 87:1443–53. 10.1128/ОВИ.01302-12 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]52. Сато А., Линехан М.М., Ивасаки А.Двойное распознавание вирусов простого герпеса TLR2 и TLR9 в дендритных клетках. Proc Natl Acad Sci USA. (2006) 103:17343–8. 10.1073/pnas.0605102103 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]53. Свенссон А., Танбак П., Нордстром И., Падюков Л., Эрикссон К. Полиморфизмы в Toll-подобном рецепторе 3 придают естественную устойчивость к инфекции вируса простого герпеса человека 2 типа. Джей Ген Вирол. (2012) 93:1717–24. 10.1099/vir.0.042572-0 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]54. Триантафилу К., Эрилмазлар Д., Триантафилу М.Индуцированная вирусом простого герпеса 2 активация в вагинальных клетках включает Toll-подобные рецепторы 2 и 9 и сенсоры ДНК DAI и IFI16. Am J Obstet Gynecol. (2014) 210:122.e1–10. 10.1016/j.ajog.2013.09.034 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]56. Christensen MH, Jensen SB, Miettinen JJ, Luecke S, Prabakaran T, Reinert LS, et al. . HSV-1 ICP27 нацеливается на активируемую TBK1 сигнальную сому STING, чтобы ингибировать вирус-индуцированную экспрессию IFN I типа. EMBO J. (2016) 35:1385–99. 10.15252/embj.201593458 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]57.Агирре С., Маэстре А.М., Паньи С., Патель Дж.Р., Сэвидж Т., Гутман Д. и др. . DENV ингибирует продукцию IFN I типа в инфицированных клетках путем расщепления STING человека. PLoS Патог. (2012) 8:e1002934. 10.1371/journal.ppat.1002934 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]58. Конно Х., Конно К., Барбер Г.Н. Циклические динуклеотиды запускают ULK1 (ATG1) фосфорилирование STING для предотвращения устойчивой передачи сигналов врожденного иммунитета. Клетка. (2013) 155:688–98. 10.1016/j.cell.2013.09.049 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]59.Хиггс Р., Ни Габханн Дж., Бен Ларби Н., Брин Э.П., Фицджеральд К.А., Джеффрис К.А. Убиквитинлигаза E3 Ro52 негативно регулирует продукцию IFN-бета после узнавания патогена посредством полиубиквитин-опосредованной деградации IRF3. Дж Иммунол. (2008) 181:1780–6. 10.4049/jimmunol.181.3.1780 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]60. Cui J, Li Y, Zhu L, Liu D, Songyang Z, Wang HY и др. . NLRP4 негативно регулирует передачу сигналов интерферона типа I, нацеливаясь на киназу TBK1 для деградации через убиквитинлигазу DTX4.Нат Иммунол. (2012) 13:387–95. 10.1038/ni.2239 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]61. Tao J, Zhou X, Jiang Z. cGAS-cGAMP-STING: три мушкетера в восприятии и передаче сигналов цитозольной ДНК. Жизнь ИУБМБ. (2016) 68:858–70. 10.1002/iub.1566 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]62. Almine JF, O’Hare CA, Dunphy G, Haga IR, Naik RJ, Atrih A, et al. . IFI16 и cGAS сотрудничают в активации STING во время распознавания ДНК в кератиноцитах человека. Нац коммун. (2017) 8:14392. 10.1038/ncomms14392 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]63.Дайнер Б.А., Лум К.К., Тотчер Дж.Е., Кристи ИМ. Сенсоры вирусной ДНК IFI16 и циклическая GMP-AMP-синтаза обладают различными функциями в регуляции экспрессии вирусных генов, иммунной защиты и апоптотических реакций во время герпесвирусной инфекции. МБио. (2016) 7:e01553–16. 10.1128/mBio.01553-16 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]64. Luecke S, Holleufer A, Christensen MH, Jonsson KL, Boni GA, Sorensen LK, et al. . cGAS активируется ДНК в зависимости от длины. Представитель EMBO (2017) 18:1707–15.10.15252/embr.201744017 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]65. Камински Дж. Дж., Шаттген С. А., Ценг Т. С., Боде С., Клинман Д. М., Фитцджеральд К. А. Синтетические олигодезоксинуклеотиды, содержащие супрессивные мотивы TTAGGG, ингибируют активацию воспаления AIM2. Дж Иммунол. (2013) 191:3876–83. 10.4049/jimmunol.1300530 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]66. Steinhagen F, Zillinger T, Peukert K, Fox M, Thudium M, Barchet W, et al. . Супрессивные олигодезоксинуклеотиды, содержащие мотивы TTAGGG, ингибируют активацию cGAS в моноцитах человека.Евр Дж Иммунол. (2018) 48: 605–11. 10.1002/eji.201747338 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]67. Ли Т, Чен Дж, Кристи ИМ. Белок тегумента цитомегаловируса человека pUL83 ингибирует опосредованное IFI16 распознавание ДНК для уклонения от иммунитета. Клеточный микроб-хозяин. (2013) 14:591–9. 10.1016/j.chom.2013.10.007 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]68. Биолатти М., Делл’Осте В., Паутассо С., Гульези Ф., фон Эйнем Дж., Крапп С. и др. . Белок тегумента цитомегаловируса человека pp65 (pUL83) подавляет выработку интерферона типа I, инактивируя ДНК-сенсор cGAS, не влияя на STING.Дж Вирол. (2018) 92:e01774–17. 10.1128/ОВИ.01774-17 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]69. Чен К., Сунь Л., Чен З.Дж. Регуляция и функция cGAS-STING пути распознавания цитозольной ДНК. Нат Иммунол. (2016) 17:1142–9. 10.1038/ni.3558 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]70. Лау Л., Грей Э.Э., Брюнет Р.Л., Стетсон Д.Б. Онкогены вируса ДНК опухоли противодействуют пути распознавания ДНК cGAS-STING. Наука. (2015) 350: 568–71. 10.1126/science.aab3291 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]71.Антониос Д., Руссо П., Ларанж А., Кердин-Ромер С., Палларди М. Механизмы синтеза IL-12 дендритными клетками человека, обработанными химическим сенсибилизатором NiSO4. Дж Иммунол. (2010) 185:89–98. 10.4049/jimmunol.02 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]72. Jonsson KL, Laustsen A, Krapp C, Skipper KA, Thavachelvam K, Hotter D, et al. . IFI16 необходим для распознавания ДНК в макрофагах человека, способствуя выработке и функционированию цГАМФ. Нац коммун. (2017) 8:14391. 10.1038/ncomms14391 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]73.Hu Q, Frank I, Williams V, Santos JJ, Watts P, Griffin GE и др. . Блокада рецепторов прикрепления и слияния ингибирует инфицирование ВИЧ-1 ткани шейки матки человека. J Эксперт Мед. (2004) 199:1065–75. 10.1084/jem.20022212 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]74. Zhou Z, Barry de Longchamps N, Schmitt A, Zerbib M, Vacher-Lavenu MC, Bomsel M, et al. . Эффективное проникновение ВИЧ-1 во внутреннюю крайнюю плоть опосредуется повышенным уровнем CCL5/RANTES, который рекрутирует Т-клетки и стимулирует образование конъюгатов с клетками Лангерганса.PLoS Патог. (2011) 7:e1002100. 10.1371/journal.ppat.1002100 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]75. Тьомсланд В., Эллегард Р., Кьолхеде П., Водлин Н. Б., Хинкула Дж., Лифсон Дж. Д. и соавт. . Блокирование интегринов ингибирует инфицирование ВИЧ-1 иммунных клеток слизистой оболочки шейки матки свободными и опсонизированными комплементом вирионами. Евр Дж Иммунол. (2013) 43:2361–72. 10.1002/eji.201243257 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]76. Рейс Э.С., Мастеллос Д.С., Хаджишенгаллис Г., Ламбрис Д.Д. Новое понимание иммунных функций комплемента.Нат Рев Иммунол. (2019) 19: 503–16. 10.1038/s41577-019-0168-x [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]77. Бертрам К.М., Боттинг Р.А., Бахарлоу Х., Родс Дж.В., Рана Х., Грэм Дж.Д. и др. . Идентификация ВИЧ, передающих CD11c(+) эпидермальных дендритных клеток человека. Нац коммун. (2019) 10:2759. 10.1038/s41467-019-10697-w [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]78. Куше-Лоренко Д., Андерсон Г., Слоан Э., Орр А., Эверетт Р.Д. Вирусная убиквитинлигаза ICP0 не является ни достаточной, ни необходимой для деградации сенсора клеточной ДНК IFI16 во время инфекции, вызванной вирусом простого герпеса 1.Дж Вирол. (2013) 87:13422–32. 10.1128/ОВИ.02474-13 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]79. Эсклатин А., Таддео Б., Ройзман Б. Белок UL41 вируса простого герпеса опосредует селективную стабилизацию или деградацию клеточных мРНК. Proc Natl Acad Sci USA. (2004) 101:18165–70. 10.1073/pnas.0408272102 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]80. Шэнь Г., Ван К., Ван С., Цай М., Ли М.Л., Чжэн С. Вирус простого герпеса 1 противодействует гадюке через белок отключения вириона-хозяина UL41.Дж Вирол. (2014) 88:12163–6. 10.1128/ОВИ.01380-14 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]81. Зеннер Х.Л., Маурисио Р., Бантинг Г., Крамп К.М. Вирус простого герпеса 1 противодействует рестрикции тетерина за счет своей активности отключения вириона-хозяина. Дж Вирол. (2013) 87:13115–23. 10.1128/ОВИ.02167-13 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]82. McCaskill JL, Ressel S, Alber A, Redford J, Power UF, Schwarze J, et al. . Ингибирование широкого спектра респираторных вирусных инфекций с помощью имитаторов микроРНК, нацеленных на передачу сигналов p38 MAPK.Молекулярные нуклеиновые кислоты. (2017) 7: 256–66. 10.1016/j.omtn.2017.03.008 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]83. Deschamps T, Kalamvoki M. Внеклеточные везикулы, высвобождаемые инфицированными вирусом простого герпеса 1 клетками, блокируют репликацию вируса в клетках-реципиентах STING-зависимым образом. Дж Вирол. (2018) 92:e01102–18. 10.1128/ОВИ.01102-18 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]84. Скоубо М.К., Кнудсен А., Рейнерт Л.С., Буларан С., Лиу Т., Перузель Э. и др. . Агонисты STING обеспечивают противовирусную перекрестную связь между клетками человека и обеспечивают защиту от генитального герпеса у мышей.PLoS Патог. (2018) 14:e1006976. 10.1371/journal.ppat.1006976 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]85. Fang R, Wang C, Jiang Q, Lv M, Gao P, Yu X и др. . NEMO-IKKβ необходимы для активации IRF3 и NF-kB в пути cGAS-STING. Дж Иммунол. (2017) 199:3222–33. 10.4049/jimmunol.1700699 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]86. Эйб Т., Барбер Г.Н. Цитозольно-ДНК-опосредованная, STING-зависимая индукция провоспалительных генов требует канонической активации NF-kappaB через TBK1. Дж Вирол.(2014) 88:5328–41. 10.1128/ОВИ.00037-14 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]87. Като К., Ишии Р., Гото Э., Ишитани Р., Токунага Ф., Нуреки О. Структурный и функциональный анализ ДНК-сенсорной и иммунной активации cGAS человека. ПЛОС ОДИН. (2013) 8:e76983. 10.1371/journal.pone.0076983 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]88. Yan N, Regalado-Magdos AD, Stiggelbout B, Lee-Kirsch MA, Lieberman J. Цитозольная экзонуклеаза TREX1 ингибирует врожденный иммунный ответ на вирус иммунодефицита человека типа 1.Нат Иммунол. (2010) 11:1005–13. 10.1038/ni.1941 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]89. Альтфельд М., Гейл М. мл. Врожденный иммунитет против инфекции ВИЧ-1. Нат Иммунол. (2015) 16: 554–62. 10.1038/ni.3157 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]90. Лагетт Н., Собхиан Б., Касартелли Н., Рингард М., Чабл-Бессия С., Седжерал Э. и др. . SAMHD1 представляет собой рестрикционный фактор ВИЧ-1, специфичный для дендритных и миелоидных клеток, которому противодействует Vpx. Природа. (2011) 474: 654–7. 10.1038/nature10117 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]91.Hertoghs N, van der Aar AM, Setiawan LC, Kootstra NA, Gringhuis SI, Geijtenbeek TB. Деградация SAMHD1 усиливает активное подавление созревания дендритных клеток ВИЧ-1. Дж Иммунол. (2015) 194:4431–7. 10.4049/jimmunol.1403016 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]92. Ким Э.Т., Уайт Т.Э., Брандарис-Нуньес А., Диас-Грифферо Ф., Вайцман М.Д. SAMHD1 ограничивает вирус простого герпеса 1 в макрофагах, ограничивая репликацию ДНК. Дж Вирол. (2013) 87:12949–56. 10.1128/ОВИ.02291-13 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]93.Решка Н, Чжоу С, Сонг Б, Содроски Дж.Г., Книпе Д.М. Белки обезьян TRIM5α снижают репликацию вируса простого герпеса. Вирусология. (2010) 398: 243–50. 10.1016/j.virol.2009.11.041 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]94. Гонугунта В.К., Сакаи Т., Покатаев В., Ян К., Ву Дж., Доббс Н. и др. . Опосредованная трафиком деградация STING требует сортировки на подкисленные эндолизосомы и может быть нацелена на усиление противоопухолевого ответа. Cell Rep. (2017) 21:3234–42. 10.1016/j.celrep.2017.11.061 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]96.Агирре С., Лутра П., Санчес-Апарисио М.Т., Маэстре А.М., Патель Дж., Ламот Ф. и др. . Белок NS2B вируса денге нацелен на деградацию cGAS и предотвращает распознавание митохондриальной ДНК во время инфекции. Нат микробиол. (2017) 2:17037. 10.1038/nmicrobiol.2017.37 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]97. Sun C, Schattgen SA, Pisitkun P, Jorgensen JP, Hilterbrand AT, Wang LJ, et al. . Уклонение гамма-герпесвируса от распознавания врожденной цитозольной ДНК способствует установлению латентной инфекции.Дж Иммунол. (2015) 194:1819–31. 10.4049/jimmunol.1402495 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]98. Wu JJ, Li W, Shao Y, Avey D, Fu B, Gillen J и др. . Ингибирование восприятия ДНК cGAS белком вириона герпесвируса. Клеточный микроб-хозяин. (2015) 18:333–44. 10.1016/j.chom.2015.07.015 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]99. Rasaiyaah J, Tan CP, Fletcher AJ, Price AJ, Blondeau C, Hilditch L, et al. . ВИЧ-1 уклоняется от распознавания врожденным иммунитетом за счет рекрутирования специфического кофактора.Природа. (2013) 503:402–5. 10.1038/nature12769 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]100. Харман А.Н., Лай Дж., Тервилл С., Самараджива С., Грей Л., Марсден В. и др. . ВИЧ-инфекция дендритных клеток нарушает путь индукции IFN через IRF-1 и ингибирует продукцию IFN 1 типа. Кровь. (2011) 118: 298–308. 10.1182/blood-2010-07-297721 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]101. Харман А.Н., Наср Н., Фитхэм А., Галоян А., Альшехри А.А., Рамбуквелле Д. и соавт. . ВИЧ блокирует индукцию интерферона в дендритных клетках и макрофагах человека путем нарушения регуляции TBK1.Дж Вирол. (2015) 89:6575–84. 10.1128/ОВИ.00889-15 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]102. Gringhuis SI, Hertoghs N, Kaptein TM, Zijlstra-Willems EM, Sarrami-Forooshani R, Sprokholt JK, et al. ВИЧ-1 блокирует сигнальный адаптер MAVS, чтобы избежать противовирусной защиты хозяина после обнаружения абортивной РНК ВИЧ-1 геликазой хозяина DDX3. Нат Иммунол. (2017) 18: 225–35.