Что означает BFL? -определения BFL
Вы ищете значения BFL? На следующем изображении вы можете увидеть основные определения BFL. При желании вы также можете загрузить файл изображения для печати или поделиться им со своим другом через Facebook, Twitter, Pinterest, Google и т. Д. Чтобы увидеть все значения BFL, пожалуйста, прокрутите вниз. Полный список определений приведен в таблице ниже в алфавитном порядке.
Основные значения BFL
На следующем изображении представлены наиболее часто используемые значения BFL. Вы можете записать файл изображения в формате PNG для автономного использования или отправить его своим друзьям по электронной почте.Если вы являетесь веб-мастером некоммерческого веб-сайта, пожалуйста, не стесняйтесь публиковать изображение определений BFL на вашем веб-сайте.Все определения BFL
Как упомянуто выше, вы увидите все значения BFL в следующей таблице. Пожалуйста, знайте, что все определения перечислены в алфавитном порядке.
Что означает BFL в тексте
В общем, BFL является аббревиатурой или аббревиатурой, которая определяется простым языком. Эта страница иллюстрирует, как BFL используется в обмена сообщениями и чат-форумах, в дополнение к социальным сетям, таким как VK, Instagram, Whatsapp и Snapchat. Из приведенной выше таблицы, вы можете просмотреть все значения BFL: некоторые из них образовательные термины, другие медицинские термины, и даже компьютерные термины. Если вы знаете другое определение BFL, пожалуйста, свяжитесь с нами. Мы включим его во время следующего обновления нашей базы данных. Пожалуйста, имейте в информации, что некоторые из наших сокращений и их определения создаются нашими посетителями. Поэтому ваше предложение о новых аббревиатур приветствуется! В качестве возврата мы перевели аббревиатуру BFL на испанский, французский, китайский, португальский, русский и т.
Двигатель 3.7 BFL на Ауди А8 Д3 | Festima.Ru
Вкладыши коренные Toyota Dyna 3B (новый) Марка: Toyota Модель: Dyna Двигатель: 3B, 11B, 13B, 13B-T, 14B Номер и производитель: M9490A DAIDO METAL Кросс-номера: 11701-56040-020, 1170156040020, 11701-56040-019, 1170156040019, 11701-56040-018, 1170156040018, 11701-56040-017, 1170156040017, 11701-56040-016, 1170156040016, 11701-56040-015, 1170156040015, 11701-56040-014, 1170156040014, 11701-56040-013, 1170156040013, 11701-56040-012, 1170156040012, 11701-56040-011, 1170156040011, 11701-56040-010, 1170156040010, 11701-56030-020, 1170156030020, 11701-56030-019, 1170156030019, 11701-56030-018, 1170156030018, 11701-56030-017, 1170156030017, 11701-56030-016, 1170156030016, 11701-56030-015, 1170156030015, 11701-56030-014, 1170156030014, 11701-56030-013, 1170156030013, 11701-56030-012, 1170156030012, 11701-56030-011, 1170156030011, 11701-56030-010, 1170156030010, 11701-56020-020, 1170156020020, 11701-56020-019, 1170156020019, 11701-56020-018, 1170156020018, 11701-56020-017, 1170156020017, 11701-56020-016, 1170156020016, 11701-56020-015, 1170156020015, 11701-56020-014, 1170156020014, 11701-56020-013, 1170156020013, 11701-56020-012, 1170156020012, 11701-56020-011, 1170156020011, 11701-56020-010, 1170156020010, 11701-56010-07, 117015601007, 11701-56010-020, 1170156010020, 11701-56010-019, 1170156010019, 11701-56010-018, 1170156010018, 11701-56010-017, 1170156010017, 11701-56010-016, 1170156010016, 11701-56010-015, 1170156010015, 11701-56010-013, 1170156010013, 11701-56010-012, 1170156010012, 11701-56010-011, 1170156010011, 11701-56010-0104, 11701560100104, 11701-56010-010, 1170156010010 Маркировка: 025 Артикул товара №282 Вкладыши коренные подходят: Toyota ToyoAce 5 поколение 1985 — 1995 (BU61, BU62, BU64, BU66, BU67, BU68, BU72, BU73, BU74, BU77, BU78, BU81, BU82, BU84, BU85, BU87, BU88, BU90, BU91, BU93, BU94, BU95, BU96, BU98) двигатель 11B (3.
Автозапчасти
74. «У них скорее всего трах марафон», «Вы как обезьяны в зоопарке»
Sexy_Soul, SuperSquirrel
Пашли творить всякую хуйню? Sexy_Soul 11:34 :0Зоопарк
Джисон долбаёб Sexy_Soul 11:40SuperSquirrel, Sexy_Soul
Ах ты сука :SuperSquirrel 11:41 Эцлввлоыко Sexy_Soul 11:41Зоопарк
Сохо сколопендра SuperSquirrel 11:43 Вантус вонючий Sexy_Soul 11:44 Придурок лампаголовый SuperSquirrel 11:44 Природное недоразумение Sexy_Soul 11:44 Недоношенный абортыш SuperSquirrel 11:45 *пытается вспомнит, как выглядит сколопендра* 🤔 IllusionYesNo 11:45 *пересланное сообщение* Сохо сколопендра ФУ БЛЯТЬ, ИДИТЕ НАХУЙ
…
Seungminmua11
baby 11:58
Ну вы и долбаёбы)
Bfl.baby 11:59
Продолжайте, я уже взял попкорн
Jeong-in_F-k 11:59
А я курочку
Bfl.baby 12:00
Вы 0хуели
Sexy_Soul 12:00
Джисооооооооооон
Oh_my.Blblblblbl 12:00
Чо
SuperSquirrelOh_my.Blblblblbl, SuperSquirrel
Если я скажу, что хочу на свидание, что ты мне скажешь в ответ? Oh_my.Blblblblbl 12:04 Что SuperSquirrel 12:05 Что Oh_my.
Blblblblbl 12:16
..
SuperSquirrel 12:17
Боже, Сан
SuperSquirrel 12:17
Всё вот ты, да опошлишь :00
SuperSquirrel, I’m_sexy_and_I_know_it
Привет SuperSquirrel 12:25 Хааааай I’m_sexy_and_I_know_it 12:29 Какие планы на будущее? SuperSquirrel 12:30 Много каких А что? I’m_sexy_and_I_know_it 12:31 Думаю над идеей собраться всем вместе в честь выписки Уёна SuperSquirrel 12:32 Ааааа I’m_sexy_and_I_know_it 12:32 Нуууу🤔🤔🤔 I’m_sexy_and_I_know_it 12:32 А сёдня какой день недели вообще? I’m_sexy_and_I_know_it 12:32 Вторник SuperSquirrel 12:32 В четверг у меня свиданка с Фелом I’m_sexy_and_I_know_it 12:33 А так свободен полностью буду только на выходных, в воскресенье, хотя с каких пор это считается выходным днём, пхпэжп I’m_sexy_and_I_know_it 12:34 Ну да SuperSquirrel 12:35 А чо ит ты вдруг занялся этим вопросом, а не друзья Уёна? I’m_sexy_and_I_know_it 12:35 Сан и настоял, чтобы я поговорил со всеми SuperSquirrel 12:36 Ааа I’m_sexy_and_I_know_it 12:37 Ясно тогда I’m_sexy_and_I_know_it 12:37 Заодно подарок подарим I’m_sexy_and_I_know_it 12:37 А Точно SuperSquirrel 12:40 Пэпжпззпзп I’m_sexy_and_I_know_it 12:41 Ну ты как Чан I’m_sexy_and_I_know_it 12:41 Да бля, бывает жвьатв SuperSquirrel 12:41 Ладно, спасибо SuperSquirrel 12:41 Не за что I’m_sexy_and_I_know_it 12:41 Пожалуйста I’m_sexy_and_I_know_it 12:41 Пхпхпх SuperSquirrel 12:42SuperSquirrel, Oh_my.
Blblblblbl
won9erlan9, Bfl.baby
Ёсан-и, привет есть какие-то варианты поздравлений в честь выписки Уёна? won9erlan9 15:56 Привет, хён~ Не знаю, я хочу отдельно с Уёном посидеть, чтобы без кого-либо Мне много что ему надо рассказать — Bfl.baby 16:01 Ааа, хорошо won9erlan9 16:02 Да и вообще я соскучился Я не мог даже чаще навещать его. Мне до сих пор кажется, что я виноват. Bfl.baby 16:03 Ты не виноват, успокойся ( Всё хорошо! won9erlan9 16:04 Да, наверное.. Bfl.baby 16:05 Так, не распускать нюни! won9erlan9 16:05 Хочешь, можешь сегодня ко мне приехать? won9erlan9 16:06 Хочу. Bfl.baby 16:07 ~~ won9erlan9 16:08 Тогда приготовлю что-нибудь Что ты хочешь? won9erlan9 16:08 Много чего Bfl.
~
won9erlan9 16:14
Зоопарк
Мне вот интересно DoctorWow 19:02 Где Уён и Хонджун? IllusionYesNo 19:07 Угу DoctorWow 19:08 Взылты BlackPrince 19:09 У них скорее всего трах марафон #DinDonbitch 19:10 lol ChangbinGrrr 19:11 lol Solar_boy 19:13 lol SuperSquirrel 19:13 lol YourBoyfriend 19Bedienungsanleitung AEG BFL 18 (Seite 1 von 2) (Deutsch, Englisch, Holländisch, Dänisch, Französisch, Italienisch, Portugiesisch, Spanisch, Polnisch, Türkisch, Schwedisch, Norwegisch, Finnisch)
Do not dispose of electric
tools together with
household waste material!
In observance of European
Directive 2002/96/EC on
waste electrical and
electronic equipment and its
implementation in accordance with
national law, electric tools that have
reached the end of their life must be
collected separately and returned to an
environmentally compatible recycling
facility.
Werfen Sie Elektrowerkzeuge nicht in
den Hausmüll! Gemäss Europäischer
Richtlinie 2002/96/EG über Elektro- und
Elektronik- Altgeräte und Umsetzung in
nationales Recht müssen verbrauchte
Elektrowerkzeuge getrennt gesammelt
und einer umweltgerechten
Wiederverwertung zugeführt werden.
Ne pas jeter les appareils électriques
dans les ordures ménagères !
Conformément à la directive européenne
2002/96/EG relative aux déchets
d‘équipements électriques ou
électroniques (DEEE), et à sa
transposition dans la législation
nationale, les appareils électriques
doivent être collectés à part et être
soumis à un recyclage respectueux de
l’environnement.
Non gettare le apparecchiature elettriche
tra i rifiuti domestici. Secondo la Direttiva
Europea 2002/96/CE sui rifiuti di
pparecchiature elettriche ed elettroniche
e la sua attuazione in conformità alle
norme nazionali, le apparecchiature
elettriche esauste devono essere
accolte separatamente, al fine di essere
reimpiegate in modo eco-compatibile.
¡No deseche los aparatos eléctricos
junto con los residuos domésticos! De
conformidad con la Directiva Europea
2002/96/CE sobre residuos de aparatos
eléctricos y electrónicos y su aplicación
de acuerdo con la legislación nacional,
las herramientas eléctricas cuya vida útil
haya llegado a su fin se deberán recoger
por separado y trasladar a una planta de
reciclaje que cumpla con las exigencias
ecológicas.
Não deite ferramentas eléctricas no lixo
doméstico! De acordo com a directiva
europeia 2002/96/CE sobre ferramentas
eléctricas e
electrónicas usadas e a transposição
para as leis nacionais, as ferramentas
eléctricas usadas devem ser recolhidas
em separado e encaminhadas a uma
instalação de reciclagem dos materiais
ecológica.
Geef elektrisch gereedschap niet met
het huisvuil mee! Volgens de Europese
richtlijn 2002/96/EG inzake oude
elektrische en lektronische apparaten
en de toepassing daarvan binnen de
nationale wetgeving, dient gebruikt
elektrisch gereedschap gescheiden te
worden ingezameld en te worden
afgevoerd naar een recycle bedrijf dat
voldoet aan de geldende milieu-eisen.
Elværktøj må ikke bortskaffes som
almindeligt affald! I henhold til det
europæiske direktiv 2002/96/EF om
bortskaffelse af elektriske og
elektroniske produkter og gældende
national lovgivning skal brugt lværktøj
indsamles separat og bortskaffes på en
måde, der skåner miljøet mest muligt.
Kast aldri elektroverktøy i
husholdningsavfallet! I henhold til EU-
direktiv 2002/96/EF om kasserte
elektriske og elektroniske produkter og
direktivets iverksetting i nasjonal rett, må
elektroverktøy som ikke lenger skal
brukes, samles separat og returneres til
et miljøvennlig gjenvinningsanlegg.
Elektriska verktyg får inte kastas i
hushållssoporna! Enligt direktivet
2002/96/EG som avser äldre elektrisk
och elektronisk utrustning och dess
tillämpning enligt nationell lagstiftning
ska uttjänta elektriska verktyg sorteras
separat och lämnas till miljövänlig
återvinning.
Älä hävitä sähkötyökalua tavallisen
kotitalousjätteen mukana! Vanhoja
sähkö- ja elektroniikkalaitteita koskevan
EU-direktiivin 2002/96/ETY ja sen
maakohtaisten sovellusten mukaisesti
käytetyt sähkötyökalut on toimitettava
ongelmajätteen keräyspisteeseen ja
ohjattava ympäristöystävälliseen
kierrätykseen.
Μην πετάτε τα ηλεκτρικά εργαλεία στον
κάδο οικιακών απορριµµάτων! Σύµφωνα
µε την ευρωπαϊκή οδηγία 2002/96/ΕΚ
περί ηλεκτρικών και ηλεκτρονικών
συσκευών και την ενσωµάτωσή της στο
εθνικό δίκαιο, τα ηλεκτρικά εργαλεία
πρέπει να συλλέγονται ξεχωριστά και να
πιστρέφονται για ανακύκλωση µε τρόπο
φιλικό προς το περιβάλλον.
Elektrikli el aletlerini evdeki çöp kutusuna
atmayýnýz! Kullanýlmýs elektrikli aletleri,
elektrik ve elektronikli eski cihazlar
hakkýndaki
2002/96/EC Avrupa yönergelerine göre
ve bu yönergeler ulusal hukuk
kurallarýna göre uyarlanarak, ayrý olarak
toplanmalý ve çevre sartlarýna uygun bir
sekilde tekrar degerlendirmeye
gönderilmelidir.
Elektrické náradí nevyhazujte do
komunálního odpadu! Podle evropské
smernice 2002/96/EG o nakládání s
použitými elektrickými a elektronickými
zarízeními a odpovídajících ustanovení
právních predpisu jednotlivých zemí se
použitá elektrická náradí musí sbírat
oddelene od ostatního odpadu a
podrobit ekologicky šetrnému
recyklování.
Elektrické náradie nevyhadzujte do
komunálneho odpadu! Podla európskej
smernice 2002/96/EG o nakladaní s
použitými elektrickými a elektronickými
zariadeniami a zodpovedajúcich
ustanovení právnych predpisov
jednotlivých krajín sa použité elektrické
náradie musí zbierat oddelene od
ostatného odpadu a podrobit ekologicky
šetrnej recyklácii.
Nie wyrzucaj elektronarzedzi wraz z
odpadami z gospodarstwa domowego!
Zgodnie z Europejska Dyrektywa
2002/96/WE w sprawie zuzytego sprzetu
elektrotechnicznego i elektronicznego
oraz dostosowaniem jej do prawa
krajowego, zuzyte elektronarzedzia
nalezy posegregowac i zutylizowac w
sposób przyjazny dla
srodowiska.
Az elektromos kéziszerszámokat ne
dobja a háztartási szemétbe!
A használt villamos és elektronikai
készülékekrol szóló 2002/96/EK irányelv
és annak a nemzeti jogba való átültetése
szerint az elhasznált elektromos
kéziszerszámokat külön kell gyujteni, és
környezetbarát módon újra kell
hasznosítani.“
Elektricnega orodja ne odstranjujte s
hišnimi odpadki! V skladu z Evropsko
direktivo 2002/96/EG o odpadni elektricni
in elektronski opremi in z njenim
izvajanjem v nacionalni zakonodaji je
treba elektricna orodja ob koncu njihove
življenjske dobe loceno zbirati in jih
predati v postopek okolju prijaznega
recikliranja.
Elektricne alate ne odlažite u kucne
otpatke! Prema Europskoj direktivi
2002/96/EG o starim elektricnim i
elektronickim strojevima i
preuzimanju u nacionalno pravo moraju
se istrošeni elektricni alati sakupljati
odvojeno i odvesti u pogon za reciklažu.
Neizmetiet elektroiekartas sadzives
atkritumos! Saskana ar Eiropas Direktivu
2002/96/EG par lietotajam
lektroiekartam, elektronikas iekartam un
tas ieklaušanu valsts likumdošana
lietotas ektroiekartas ir jasavac atseviški
un janogada otrreizejai parstradei videi
draudziga veida.
Neišmeskite elektros irengimu i buitinius
šiukšlynus! Pagal ES Direktyva 2002/96/
EG del naudotu irengimu, elektros
irengimu ir ju itraukimo i valstybinius
istatymus naudotus irengimus butina
suringti atskirai ir nugabenti antriniu
žaliavu perdirbimui aplinkai
nekenksmingu budu.
Ärge käidelge kasutuskõlbmatuks
muutunud elektrilisi tööriistu koos
olmejäätmetega! Vastavalt Euroopa
Parlamendi ja nõukogu direktiivile
2002/96/EÜ elektri- ja
elektroonikaseadmete jäätmete kohta
ning direktiivi nõuete kohaldamisele
liikmesriikides tuleb asutuskõlbmatuks
muutunud elektrilised tööriistad koguda
eraldi
ja keskkonnasäästlikult korduskasutada
või ringlusse võtta.
Не выбрасывайте электроинструмент
с бытовыми отходами! Согласно
Европейской директиве 2002/96/ЕС по
отходам от электрического и
электронного оборудования и
соответствующим нормам
национального права вышедшие из
употребления электроинструменты
подлежат сбору отдельно для
экологически безопасной утилизации.
Не изхвърляйте електроинструменти
при битовите отпадъци! Съобразно
Европейска директива 2002/96/ЕО за
стари електрически и електронни
уреди и нейното реализиране в
националното законодателство
изхабените електроинструменти
трябва да се събират отделно и да се
предават в пункт за екологосъобразно
рециклиране.
Nu aruncaţi scule electrice în gunoiul
menajer! Conform directivei europene nr.
2002/96/CE referitor la aparate electrice
şi electronice uzate precum şi la
transpunerea acesteia în drept naţional,
sculele electrice trebuiesc colectate
separat şi introduse într-un circit de
reciclare ecologic.
Copyright 2008
AEG Elektrowerkzeuge
Max-Eyth-Straße 10
D-71364 Winnenden
Germany
+49 (0) 7195-12-0
(10.08)
4931 2890 23
Please read the instructions carefully before
starting the machine.
Bitte lesen Sie die Gebrauchsanweisung vor
Inbetriebnahme sorgfältig durch.
Veuillez lire avec soin le mode d‘emploi avant la
mise en service
Leggere attentamente le istruzioni per l‘uso prima di mettere in
funzione l‘elettroutensile.
Lea las instrucciones detenidamente antes de conectar la
herramienta
Leia atentamente o manual de instruções antes de colocar a
máquina em funcionamento.
Graag instructies zorgvuldig doorlezen vóórdat u de machine in
gebruik neemt.
Læs brugsanvisningen nøje før ibrugtagning.
Les nøye gjennom bruksanvisningen før maskinen tas i bruk.
Läs instruktionen noga innan du startar maskinen.
Lue käyttöohjeet huolelleisesti, ennen koneen käynnistämistä.
Ðáñáêáëþ äéáâÜóôå ó÷ïëáóôéêÜ ôéò ïäçãßåò ÷ñÞóçò ðñéí áðü
ôçí Ýíáñîç ëåéôïõñãßáò.
Lütfen aleti çalıştırmadan önce kullanma kılavuzunu dikkatli
biçimde okuyun.
Před spuštěnám stroje si pečlivě pročtěte návod k používání.
Pred prvým použitím prístroja si pozorne prečítajte návod na
obsluhu.
Przed uruchomieniem elektronarzędzia zapoznać się uważnie z
treścią instrukcji.
Kérjük alaposan olvassa el a tájékoztatót mielőtt a gépet
használja.
Prosimo, da pred uporabo pozorno preberete to navodilo za
uporabo.
Molimo da pažljivo pročitate uputu o upotrebi prije puštanja u rad.
Pirms sākt lietot instrumentu, lūdzu, izlasiet lietošanas pamācību.
Prieš pradėdami dirbti su prietaisu, atidžiai perskaitykite jo
naudojimo instrukciją.
Palun lugege enne käikulaskmist kasutamisjuhend hoolikalt läbi.
Пожалуйста, внимательно прочтите инструкцию по
использованию перед началом любых операций с
инструментом.
Преди пускане на уреда в действие моля прочетете
внимателно инструкцията за използване.
Va rugăm citiţi cu atenţie instrucţiunile înainte de pornirea maşinii
Ве молиме внимателно прочитајте ги упатствата прд да ја
вклучите машината.
使用本机器之前请详细阅读使用说明书。
Remove the battery pack before starting
any work on the machine.
Vor allen Arbeiten an der Maschine den
Wechselakku herausnehmen
Avant tous travaux sur la machine retirer
l’accu interchangeable.
Prima di iniziare togliere la batteria dalla macchina.
Retire la batería antes de comenzar cualquier trabajo en
la máquina.
Antes de efectuar qualquer intervenção na máquina
retirar o bloco acumulador.
Voor alle werkzaamheden aan de machine de akku
verwijderen.
Ved arbejde inden i maskinen, bør batteriet tages ud.
Ta ut vekselbatteriet før du arbeider på maskinen
Drag ur batteripaket innan arbete utföres på maskinen.
Tarkista pistotulppa ja verkkojohto mahdollisilta
vauriolta. Viat saa korjata vain alan erikoismies.
Ðñéí áðü êÜèå åñãáóßá óôç ìç÷áíÞ áöáéñåßôå ôçí
áíôáëëáêôéêÞ ìðáôáñßá.
Aletin kendinde bir çalışma yapmadan önce kartuş
aküyü çıkarın.
Před zahájením veškerých prací na vrtacím šroubováku
vyjmout výměnný akumulátor.
Pred každou prácou na stroji výmenný akumulátor
vytiahnuť.
Przed przystąpieniem do jakichkolwiek prac na
elektronarzędziu należy wyjąć wkładkę akumulatorową.
Karbantartás, javítás, tisztítás, stb. előtt az akkumulátort
ki kell venni a készülékből.
Pred deli na stroju izvlecite izmenljivi akumulator.
Prije svih radova na stroju izvaditi bateriju za zamjenu.
Pirms mašīnai veikt jebkāda veida apkopes darbus, ir
jāizņem ārā akumulātors.
Prieš atlikdami bet kokius darbus įrenginyje, išimkite
keičiamą akumuliatorių.
Enne kõiki töid masina kallal võtke vahetatav aku välja.
Bûíüòå àêêóìóëÿòîð èç ìàøèíû ïåðåä
ïðîâåäåíèåì ñ íåé êàêèõ-ëèáî ìàíèïóëÿöèé.
Преди започване на каквито е да е работи по
машината извадете акумулатора.
Scoateţi acumulatorul înainte de a începe orice
intervenţie pe maşină.
Извадете го батерискиот склоп пред отпочнување на
каков и да е зафат врз машината.
在机器上进行任何修护工作之前，先拿出蓄电池。
BFL 18
Original instructions
Originalbetriebsanleitung
Notice originale
Istruzioni originali
Manual original
Manual original
Oorspronkelijke
gebruiksaanwijzing
Original brugsanvisning
Original bruksanvisning
Bruksanvisning i original
Alkuperäiset ohjeet
Πρωτότυπο οδηγιών χρήσης
Orijinal işletme talimatı
Původním návodem k používání
Pôvodný návod na použitie
Instrukcją oryginalną
Eredeti használati utasítás
Izvirna navodila
Originalne pogonske upute
Instrukcijām oriģinālvalodā
Originali instrukcija
Algupärane kasutusjuhend
Оригинальное руководство по
эксплуатации
Оригинално ръководство за
експлоатация
Instrucţiuni de folosire originale
Оригинален прирачник за работа
原始的指南
история развития, ASIC / Habr
Bitcoin-майнер от ASICMINER, производительностью ~2TH/s(источник)
Предыдущая часть.
В этот раз рассмотрим заключительную часть истории развития вычислительных систем, предназначенных для добычи биткоинов, а именно эпоху ASIC, поставившую крест на GPU и FPGA майнерах.
Butterfly Labs (BFL)
BFL были первой компанией анонсировавшей свой майнер на основе ASIC. Уверенность в успехе во многом была основана на предыдущих достижениях этой компании в области FPGA-майнеров.
В июне 2012 BFL начала принимать предзаказы на три типа майнеров: $149 за Jalapenos, производительностью 4.5 GH/s; $1299 за SC Singles при 60GH/s; и за $30K можно было предзаказать монструозный SC MiniRigs с производительностью1500GH/s.
При такой цене эти майнеры могли добывать в 20-50 раз больше биткоинов на доллар инвестиций, чем GPU или FPGA майнеры. Сумма предзаказов только за первый день привысила $250K и активность заказчиков еще долгое время оставалось высокой. Этого оказалось более чем достаточно, чтобы покрыть существенные расходы на проектирование микросхем и изготовление литографических масок для 65нм техпроцесса, которые оцениваются в $500K.
Каждый чип производства BFL содержит 16 полностью развернутых конвейеров для вычисления SHA256, что по производительности эквивалентно 16 mid-hi-end FPGA, умещенным в 1 ASIC. При этом размер чипа составлял всего лишь 10х10мм в BGA корпусе.
Но тут ВНЕЗАПНО!… Первоначально BFL планировала начать поставки майнеров в начале ноября. Однако сроки многократно сдвигались из-за задержек связанных с производством на фабрике, сборкой и проблемами самой BFL. Также, энергопотребление на уровне 0.8W на GH/s за месяц до появления внезапно подскочило до 1.2W, а корпус сменился с QFN на BGA.
Энергоэффективность микросхем в итоге стала их основной проблемой. Энергопотребление оказалось в 4-8 раз выше планируемого, что вынудило снизить тактовую частоту вдвое с 500MHz до 250MHz. Из-за этого также пришлось вносить изменения во всё оборудование, которое проектировалось под эти чипы. Например, майнер Jalapenos изначально должен был использовать единственный ASIC чип, но, для достижения заявленной производительности в 4.
5GH/s, потребовалось использование двух чипов. А итоговое энергопотребление составило ~6W на 1GH/s.
А еще оказалось, что только у 60% функционируют все 16 конвейеров, еще у 20% — 15 конвейеров, у 15% — 14, а оставшиеся 5% могут похвастаться лишь 12-13 работающими конвейерами.
Страсти в интернетах
Совершенно ожидаемо, что, в свете этих событий, на интернет-форумах развернулась нешуточная драма. Заказчики, которые профинансировали компанию миллионами долларов, требовали объяснений задержкам поставок. Разнообразные срывы сроков и уточнение спецификаций привели к тому, что клиенты получили первые образцы оборудования только в апреле 2013го. На пять месяцев позже запланированных сроков и почти год после момента фактической оплаты. Огромная задержка поставок существовала до августа 2013.
Клиенты BFL небезосновательно считали, что их покупки стремительно устаревают, даже еще до того, как они успели получить их в руки. Однако изначальные прогнозы относительно сроков разработки, изготовления и масштабных поставок были весьма оптимистичными с самого начала.
Особенно, если учесть, что это первый ASIC продукт для BFL. Фактические сроки оказались вполне типичными для данной индустрии, ведь, например, у Intel уходит около года с появления первых тестовых образцов и до начала поставок.
А вот что совсем нетипично, так это уровень прозрачности, который обеспечивала BFL для своих клиентов на протяжении этого времени. Возможно, это объясняется моделью финансирования, основанной на предзаказах. С другой стороны это привело к росту раздражения и злобы среди клиентов, с тревогой следящих за графиком сложности майнинга BTC и гадающих, не поставили ли они не на ту лошадку…
ASICMINER
Деятельность этой компании началась в июле, после того как BFL начала принимать предзаказы на свои майнеры. Компания была основана тремя гражданами Китая и одной из их мотиваций было создать конкуренцию для BFL и не дать той стать единственным поставщиком майнеров. Подход ASICMINER к ведению дел сильно отличался от использованного BFL, поскольку они не располагали тем доверием, что заработала последняя на поставках FPGA-майнеров.
Также примечательно, что сбор средств был проведен исключительно через интернет форумы. Основатели подробно излагали свои планы по разработке ASIC и отвечали на сотни вопросов от онлайн сообщества, многие из которых касались глубоко технических деталей их бизнес модели технических решений и финансовой благонадежности.
К 18 июля была зарегистрирована компания, юридически расположенная в городе Шенжень на юге Китая, был подписан контракт c производителем микросхем и получены технологические файлы, необходимые для того, чтобы начать проектирование микросхемы. Уже к 29 июля была готова первая версия дизайна, которая должна была обеспечить производительность 1.25GH/s на каждый чип, при техпроцессе 130нм, площади чипа 17.5 мм кв. и энергопотреблении 13.3W. Техпроцесс 130нм был выбран по причине низких капитальных затрат на разработку – приблизительно $150K. Согласно постам, использовался стандартный промышленный маршрут проектирования: Verilog, имитационное моделирование в VCS, синтез на основе Verdi, IC Compiler для трассировки и размещения, Calibre для проверки правил проектирования (DRC) и т.
д. Набор лицензий на эти средства стоил бы немалых денег где-нибудь в США или Европе, но в Китае и лицензии, как и рабочая сила, оказались гораздо дешевле.
В начале августа, когда была завершена первая итерация проектирования, размещения и трассировки, компании удалось привлечь средства через IPO, проведенное на онлайн-бирже GLBSE, осуществлявшей торги в bitcoin. Было предложено продавать 1 из 400 тыс. акций компании за 0.1 BTC, при этом акционерам отходило не более 200 тыс. акций. Бизнес план предполагал начать майнинг на своём собственном оборудовании с общей производительностью 12TH/s, а затем начать прямые продажи чипов или оборудования покупателям. Прибыль должна была распределяться между акционерами, пропорционально их доле в компании.
IPO завершилось 27 августа, всего было продано 163.962 акции, что на тот момент примерно равнялось $160К. Интересен тот факт, что голоса акционеров уже на этом этапе использовались для того, чтобы принять решение о конвертации 8000BTC, из собранных в ходе IPO, в привычную валюту, чтобы минимизировать риски связанные с курсом биткоина и необходимостью оплаты услуг фабрики-производителя чипов.
22 сентября была опубликована финальная спецификация чипа: 1.05V, 335MHz, 6×6 мм. и 4.2W на GH/s производительности. Дизайн чипа практически повторял открытый дизайн, используемый ранее для FPGA-майнеров, но с большей частотой, меньшим энергопотреблением и во много раз дешевле.
6го октября биржа GLBSE закрылась из-за взлома и разногласий среди её основателей. Поскольку информация об акционерах хранилась биржей анонимно, представители ASICMINER больше не знали кто их акционеры. Ситуацию усугубил и тот факт, что часть средств, привлеченных в ходе IPO, застряла на счетах биржи. Со временем, на основе электронной почты и других документов, удалось восстановить владельцев примерно 150 тыс. акций. На это ушло два месяца.
К 14 октября был запущен процесс производства и к 31 октября первые вафли добрались до стадии металлизации, за которой следует разрезание вафли на отдельные чипы. Однако фабрика задержала производство, в интересах других, более крупных заказов, и первые готовые чипы появились только 28 декабря.
14 февраля общая вычислительная мощность майнеров, которую ввёл в строй ASICMINER, достигла отметки 2TH/s. В дальнейшем мощность только увеличивалась, но не без всевозможных проблем.
Наконец компания приступила к прямым продажам оборудования. Сначала было продано около 60 «лезвий», чипы которых давали 10.7GH/s @ 83W при цене 50-75 биткоинов (примерно $5K-7.5K). Затем компания разработала майнер в стиле USB-стика под названием Block Erupter. Майнер, содержащий единственный ASIC чип, изначально продавался по 2BTC и стремительно падал в цене. Сейчас его можно найти на Amazon в районе $50-60.
USB-хаб с целым массивом Block Erupter’ов, каждый из которых дает 330 MH/s или примерно половину производительности GPU AMD 7970. (источник)
Avalon
Еще одна компания, которой удалось привлечь инвестиции путем прямых предпродаж через интернет. Её история не столь интересна, поэтому не буду тратить на неё много времени. ASIC выпускаемые этой компанией используют 110нм TSMC-техпроцесс, каждый чип размером 4х4 мм содержит единственный SHA256 конвейер, а типовая поставка представляет собой 300 чипов, смонтированых на поверхности трех «лезвий» в 4U форм-факторе.
Как и ASICMINER, компания расположена в Китае.
Первоначально заказы размещались на майнеры, производительностью 66GH/s @ 600W и ценой $1299. Затем появились майнеры в формате USB-stick. А сейчас компания ведет разработку ASIC на технологии 55nm.
Bitcoin Hardware Scaling
На текущий момент многим энтузиастам майнинга удалось предзаказать майнеры, которые будут изготовлены по технологии 28 и менее нанометров. Это вызывает закономерный вопрос – насколько чипы биткоин-майнеров масштабируются в соответствии с техпроцессом. Из-за проблем тёмного кремния, улучшения в производительности следующего поколения микросхем оказываются ограниченными энергоэффективностью на уровне ~1.4x на каждый шаг техпроцесса. Логика биткоин-майнера представляет собой едва ли не худший для тёмного кремния случай, еще более худший чем Multicore или GPU, по причине практически полного отсутствия накристальной памяти и высокой активности всех элементов схемы. Т.е. если, допустим, прогресс остановится на 10нм, то можно ожидать лишь ~6.
5х улучшения производительности, по сравнению с 65нм чипами. История когда BFL пришлось снижать частоту своих чипов из-за ограничений энергопотребления лишь еще раз показывает к чему сейчас приводят попытки вылезти за рамки «дозволенного» тёмным кремнием.
После того, как стремительная смена поколений майнеров перешла к переходу на ASIC, разница между последующими поколениями майнеров будет не настолько велика, чтобы быстро отправить на пенсию старое железо. Полная аналогия с ПК – если в середине 90х рост производительности превращал топовое железо в хлам за 2-3года, то сейчас и 5-летнее железо выглядит очень даже неплохо. Для производителей ASIC это будет означать погоню за энергоэффективностью, а не производительностью. А среди групп энтузиастов майнинга наибольшую выгоду получит тот, у кого будет доступ к наиболее дешевой электроэнергии. Уже сейчас известны случаи, когда скупалось старое оборудование для майнинга и возвращалось в строй, скажем, вблизи электростанций, где тарифы на электроэнергию намного ниже городских.
Оптимизация энергоэффективности
Чипы от BFL по технологии 65нм потребляют ~5.5W на GH/s. Для 130нм-ASICMINER и 110нм-Avalon чипов эти цифры составляют 8W и 9W соответственно. Согласно закону Деннарда, при переходе на 14нм можно ожидать 65/14 = 4.6x снижение энергопотребления, примерно до уровня 1W на GH/s.
Правда, т.к. первые поколения ASIC-майнеров ставили своей целью перейти от FPGA в эпоху ASIC, то, вероятно, есть огромный простор для дальнейших оптимизаций архитектуры и схемотехники с целью сократить энергопотребление, не ухудшив производительность и не увеличивая площадь. Среди таких оптимизаций может оказаться использование нескольких уровней напряжения, замена триггеров на latches или даже использование самосинхронной схемотехники, чтобы сэкономить энергию, которая тратится на тактирование. Согласно экспертным оценкам, есть еще по крайней мере четырехкратная возможность снижения энергопотребления в рамках используемого техпроцесса.
Помимо базовых оптимизаций существует много улучшений, характерных для тёмного кремния, и для которых ASIC-майнер отлично подходит.
Например, использование уровней напряжения, близких к порогу срабатывания (NTV – Near Threshold Voltage). Отсутствие статической памяти и необходимости передавать сигналы на большое расстояние внутри чипа позволяет ожидать здесь еще 5х снижения энергопотребления.
Также, поскольку аппаратная реализация SHA256 очень проста, то можно представить специализированный техпроцесс изготовления для майнеров, по аналогии с разными процессами, применяемыми для чипов памяти и логики сегодня.
Вместо заключения
Развитие bitcoin-майнеров привело к появлению специализированных решений на основе ASIC. Без всякой поддержки со стороны крупных компаний. Пользователи самоорганизовались, сами профинансировали разработку программной и аппаратной части, преодолели риски и недоверие, оценили бизнес-планы и справились с задачей создания дорогих чипов при невероятно малом бюджете. Это неслыханное дело в наше время, где оценка усилий по созданию микросхем последнего поколения начинается с отметки $100млн.
, а количество специализированных чипов падает год от года.
Какие из этого можно извлечь уроки? При каких условиях создание чипов под конкретную задачу действительно возможно? Несколько мыслей на этот счет.
Чипы, производимые на заказ, наиболее конкурентноспособны по сравнению с массовым производством, если проходят «концентрационный тест» — выгода от использования специализированного чипа должна заключаться в нем самом, а не других компонентах системы. В случае биткоина, прибыльность – прямая характеристики чипа. Лишь с несколькими дополнительными факторами, вроде цен на электричество.
Если вычисления обладают высоким параллелизмом, а специализированная реализация гораздо меньше чем эквивалентный ей код для системы общего назначения, то ASIC – хороший выбор для того, чтобы сделать скачок в производительности.
Как ни странно, но исследования, проводимые в университетах, сыграли весьма скромную роль в разработке ASIC-майнеров. Для этого есть объяснение. Во-первых, университетские исследования направлены на новейшие технологии производства, которые из-за своей нестабильности не подходят для быстрого использования.
Во-вторых, у университетов есть бесплатный доступ к САПР, стоимостью десятки миллионов долларов, лицензированным только для некоммерческого использования. Это означает, что выпускник университета просто не знает как делать «железо» дешево, не разорившись на лицензиях.
Время выхода на рынок обратно пропорционально новизне используемого техпроцесса. 130нм появится первым, 65нм появится потом. В тех случаях, где использование ASIC действительно дает выигрыш, нет большой разницы в том, какой техпроцесс используется. Зато очень важно время.
Инвестиционный капитал также не сыграл значительной роли. Во многом благодаря распространенному мнению, что «железные» стартапы слишком дороги и занимают слишком много времени. Пользователи смогли сами профинансировать проект, даже не прибегая и к помощи сайтов вроде kickstarter.
Машины для майнинга биткоинов имеют очень сильное и понятное людям объяснение своей ценности – «вы покупаете майнер и он приносит вам много денег». Кроме того, эта идея уже была проверена на предыдущих поколениях майнеров.
Две из компаний-разработчиков оказались из Китая и там же вели свою деятельность. Хоть Кремниевая Долина и известна тем, что стоит на острие прогресса, большая часть работы в условиях малых бюджетов выполняется в Азии. Дешевый доступ к рабочей силе и лицензиям играет важную роль. Маршрут проектирования, использованный ASICMINER, в США обошелся бы в $400K за лицензии на каждого разработчика.
Для того, чтобы добиться инноваций в железе, необходимо перепробовать множество новых идей, при малых затратах. Но современная полупроводниковая индустрия отошла от этого направления в сторону дорогих и очень дорогих чипов. В результате «полупроводниковые» стартапы практически не существуют, и практически нет областей, где можно было бы исследовать рискованные инновационные идеи. Не потому что нет идей, а потому, что уж очень дорого. В то же время сокращается спрос на hardware-engineer’ов на рынке труда, а молодые специалисты уходят в софтверные компании за более высокими зарплатами.Что-то с этим надо делать.
| 23 января 2022 23 Jan 2022—
|
| 23 января 2022 | Cordoba (COR) | LIM) | LA2436 | — | 09:20 | — | — | 13:10 | | Play | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 22 января 2022 — Ориентировочный вылет 16:55 | 22 января 2022 | Cusco (CUZ) | LIMA (LIM) | LA2014 | — | 21:55 | — | 23:15 | Оценочная вылет 16 :55 | Играть | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 22 января 2022 г. — Оценочный вылет 14:20 | 22 января 2022 | Lima (CUZ) | CUSCO (CUZ) | LA2015 | — | 9:20— | — | 6 20:35Оценочная вылет 14:20 | Play | | 3 | 22 января 2022 22 Jan 2022—
— | 0 22 января 2022 | Cajamarca (CJA) | Lima (Lim) | LA2297 | — | 16:15 | — | 9006 — | 7 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 22 января 2022 — Оценочный отъезд 09 :00 | 22 января 2022 | Лима (LIM) | Каджам Arca (CJA) | LA2296 | — | 8 14:00— | — | 2 15:15 | 5 | KML CSV Play | 21 января 2022 | 9 CANCUN (CUN)LIMA (LIM) | LA2457 | — | — | — | — | — | — | Play | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 21 января 2022 5: 02 приземлились 04:21 | 21 января 2022 | Cancun (CUN) | LIMA (LIM) | LA2457 | 5:02 | 5:10 | 23:19 | 04:30Приземлился 04:21 | KML CSV Играть | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 21 января 2022 5:07 5:07приземлились 21:45 | 21 января 2022 | Lima (Cun) | 9 Cancun (CUN)LA2456 | 5:07 | 16:35 | 16:38 | 22:00 | приземлился 21:45 | kml CSV Play | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 20 января 2022 1:31 1:58
| 20 января 2022 | Tumbes (TBP)LIMA (LIM) | La2335 | LA2335 | 1:31 | 21:25 | 21:28 | 21:05 | по суше 22:58 | KML CSV Play | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 20 января 2022 1:26 приземлились 20:26
| 9 20 января 2022 9 0020 Lima (LIM) | (TBP) | LA2334 | 1:40 | 18:40 | 18:00 | 19:00 | 3 20:31приземлились 20:26 | kml CSV Play | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
| 20 января 2022 1:18 30:42 | 20 января 2022 | Puerto Maldonado (PEM) | Lima (Lim) | LA2572 | 1:18 | 16:29 | 16:24 | 17:55 | постучал 17:42 | kml CSV Play | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 20 января 2022 1:16
| 20 января 2022 | Лима (LIM) | Пуэрто-Мальдонадо (PEM) | LA2573 | 1:16 | 14:05 | 14:12 | 15:45 | 15:28 | KML CSV Play | 0 | 4 19 Jan 2022 9 Cancun (Cun) | Lima (Lim) | LA2457 | LA2457 | — | — | — | — | — | 4 Play | — | — | — | — | — | 4 Unnown | 8 | 19 Jan 2022 4:47 4:34 | 1 19 Jan 2022 | Канкун (CUN) | Лима (LIM) | LA2457 | 90 004 4:4722:51 | 23:47 | 23:47 | 04:10 | приземлились 04:34 | kml CSV Play | 6 | 19 января 2022 5:02 приземлился 21:19 | 9 19 января 2022 | Lima (Cun) | 9 Cancun (CUN)LA2456 | 5:02 | 5:10 | 16:17 | 21:41 | приземлился 21:19 | kml CSV Play | 19 Jan 2022 | Lima (Cun) | 9 Cancun (CUN)LA2456 | — | — | — | — | — | Неизвестно | Играть | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 19 января 2022 | Сантьяго (S CL) | Lima (Lim) | LA2478 | — | — | — | — | — | Play | 2 | 19 Jan 2022 | Lima (LIM) | LA2478 | — | — | — | — | — | Play | 1 | 19 Jan 2022 3:28 21 | 19 Jan 2022 | Lima (Lim) | LA2478 | LA2478 | 3:28 | 4 10:4510:53 | 14:40 | 21 | KML CSV Play | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 19 января 2022 г. 2:58 2:58приземлился 08:57 | 19 Jan 2022 Lima (Lim) | 19 Santiago (SCL) | LA2479 | 2:58 | 2:58 | 05:58 | 09:15 | kml CSV Play | 9004 | 19 Jan 2022 Lima (Lim) 9 Сантьяго (SCL) | LA2479 | — | — | — | — | — | Unnown | 3 | 9004 0 18 января 2022 9 Cancun (Cun) | LIMA (LIM) | LA2457 | — | — | — | — | Неизвестно | Играть | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 19 января 2022 | 9 Cancun (CUN)LA2457 | LA2457 | — | —— | — | — | Play | 18 Январь 2022 5:02 5:02 Приземлился 04:23 | 18 Jan 2022 9 Cancun (CUN) | LIMA (LIM) | LA2457 | 5:02 | 23:10 | 23 : 20 | 04:30 | kml CSV Play | 9002 | 18 Jan 2022 | Lima (Lim) | 9 Cancun (Cun)LA2456 | — | — | — | — | Неизвестно | Играть | 9 0013 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 18 января 2022 4:49 4:49приземлились 21:35 | 18 января 2022 | Lima (Lim) | Cancun (CUN)LA2456 | 4:49 | 16:35 | 16:46 | 22:00 | 22:00 | приземлились 21:35 | KML CSV Play | 9004 | 9009 | Lima (Lim) | 9 Cancun (Cun )LA2456 | — | — | — | — | — | 4 Play | | 318 Jan 20221:28 30:02 | 18 января 2022 г. | Икитос (IQT) | Лима (LIM) | LA2231 | 1:28 | 9 0991 13:3513:34 | 15:20 | 30:02 | 9099 kml CSV Play | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 18 января 2022 1:30
| 18 Jan 2022 | Lima (Lim) | LA2230 | LA2230 | 1:30 | 10:30 | 10:35 | 12:20 | kml CSV Play | 17 0022 17 Jan 2022 1:16 1:16
| 17 января 2022 | Arequipa (AQP) | Lima (Lim) | LA2124 | 1:16 | 20:35 | 20:32 | 22:05 | Прилетел 21:48 | KML CSV Play | 2 | 17 Jan 2022 1:10 1:19 9:19 | 17 Jan 2022 | Lima (Lim) | Arequipa (AQP) | LA2125 | 1:10 | 17:55 | 18:09 | 19:20 | 19:20 | приземлился 19:19 | kml CSV Play | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 17 Jan 2022 4:35 15:02 | 17 Jan 2022 | Montevideo (MVD) | LIMA (LIM) | LA2421 | 4:35 | 10:05 | 10:27 | 15:05 | Приземлился 15:02 | KML CSV Играть | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 17 января 2022 7 4:10
|
90 007 
2022 
Гелинас, CABM и кафедра биохимии, Медицинская школа Роберта Вуда Джонсона, CABM, комната 137, 679 Hoes Lane, Piscataway, NJ 08854-5638, США
Мы показываем, что в живых клетках Bfl-1 избирательно взаимодействует с Bak и tBid, но не с Bax или Bid. Взаимодействие Bfl-1/Bak является функциональным, поскольку Bfl-1 подавляет индуцированный стауроспорином (STS) апоптоз в клетках дикого типа и Вах-дефицитных клетках, но не в клетках Bak-/-. Мы также показываем, что Bfl-1 косвенно блокирует активацию Bax, индуцированную фактором некроза опухоли-α (TNFα), через связь с tBid.Делеция С-конца снижала взаимодействие Bfl-1 с Bak и tBid и снижала его способность подавлять Bak- и tBid-опосредованную гибель клеток. Эти данные показывают, что Bfl-1 использует различные механизмы для подавления апоптоза в зависимости от стимула. Bfl-1 связывается с tBid, чтобы предотвратить активацию проапоптотических Bax и Bak, а также напрямую взаимодействует с Bak, чтобы противодействовать опосредованной Bak гибели клеток, подобно Mcl-1. Таким образом, часть защитной функции NF-κB заключается в индукции Mcl-1-подобной активности путем усиления Bfl-1.
Белки, содержащие только проапоптотический Bh4 (Bid, Bad, Bim, Puma, Noxa, Hrk, Bmf, Nbk/Bik), инициируют передачу сигналов апоптоза в ответ на вызывающие смерть стимулы. Многодоменные белки Bax и Bak являются важными эффекторами апоптоза, и клетки, лишенные обоих белков, невосприимчивы к апоптозу, индуцированному широким спектром стимулов.Напротив, антиапоптотические члены семейства Bcl-2 Bcl-2, Bcl-x L , Bfl-1/A1, Mcl-1 и Bcl-w защищают клетки от апоптоза. Некоторые белки, содержащие только Bh4, такие как tBid и Bim, запускают конформационную активацию Bax и Bak, в то время как другие, такие как Bad, Noxa и Bik, секвестрируют антиапоптотические члены семейства Bcl-2 и нейтрализуют их защитную активность (Letai et al. , 2002). ; Chen и др., 2005; Kuwana и др. , 2005). 
Во внешнем пути лиганды, такие как фактор некроза опухоли-α (TNFα), вызывают опосредованную рецептором смерти активацию каспазы-8, которая расщепляет Bid до его активной формы tBid. В свою очередь, tBid индуцирует конформационную активацию и олигомеризацию Bax и Bak, высвобождение митохондриального цито C , активацию каспазы и апоптоз (Perez and White, 2000; Wei et al., 2000). В то время как антиапоптотические Bcl-2 и Bcl-x L могут связываться как с Bid, так и с tBid, Mcl-1 ингибирует апоптоз, индуцированный рецептором смерти, путем селективного связывания с tBid, но не с Bid (Cheng et al. , 2001; Clohessy). и др. , 2006). Более того, Mcl-1 изолирует эндогенный Bak, но не Bax в здоровых клетках, и блокирует Bak-опосредованную гибель клеток, а Bcl-2 этого не делает (Cuconati et al. , 2003; Willis et al. , 2005). Аденовирусный гомолог Bcl-2 E1B 19K препятствует гибели клеток, связываясь непосредственно с Bax и Bak, но не с tBid или Bid (Oltvai et al.
, 1993; Перес и Уайт, 2000 г.; Куконати и др. , 2002; Cuconati and White, 2002), но как другие антиапоптотические члены семейства Bcl-2, такие как Bfl-1, блокируют апоптоз, не совсем ясно. 
Сообщалось, что человеческий Bfl-1 взаимодействует с Bid в временно трансфицированных клетках и с рекомбинантным tBid in vitro , но не с Bax или Bak (Werner et al. , 2002). Было описано, что Bfl-1/A1 связывается с Bax в двухгибридных дрожжах или путем совместной иммунопреципитации in vitro транслированных белков (Sedlak et al. , 1995; Zhang et al. , 2000). Другие исследователи не обнаружили связи между A1 мыши и Bax в котрансфицированных клетках, но A1 взаимодействовал с Bak в этих условиях (Holmgreen et al., 1999). Здесь мы исследовали связь Bfl-1 с эндогенными Bax, Bak, Bid и tBid в живых клетках и изучили, как эти взаимодействия связаны с его защитной активностью в ответ на внешние и внутренние стимулы, вызывающие смерть. 
Bfl-1 был помечен с N-конца зеленым флуоресцентным белком (GFP), поскольку коммерческие антитела не смогли успешно распознать Bfl-1 человека. GFP-Bfl-1 локализуется в митохондриях и околоядерной области, перекрывая эндогенный цито C (). В то время как TNFα провоцировал высвобождение цито C в экспрессирующих GFP клетках, цито C оставался митохондриально локализованным в GFP-Bfl-1-положительных клетках, что согласуется с его защитной активностью в отношении TNFα (Karsan et al. , 1996; Wang ). и другие., 1999; Зонг и др. , 1999). Мутант GFP-Bfl-1ΔC, лишенный С-концевых 24 аминокислот, распространялся по всей клетке, включая ядро, подобно GFP, но все еще подавлял TNFα-индуцированное высвобождение цито C . Высвобождение Cyto C и апоптоз критически зависят от конформационной активации и олигомеризации Bax и Bak, которые ингибируются антиапоптотическими Bcl-2 и Bcl-x L . Точно так же GFP-Bfl-1 и Bfl-1ΔC подавляли TNFα-индуцированную конформационную активацию Bax, как видно из антитела, специфичного к N-концу Bax, которое маскируется, когда Bax неактивен, и экспонируется при активации Bax (; Desagher et al.
., 1999; Перес и Уайт, 2000). Напротив, Bax активировался в окружающих клетках, в которых отсутствовала значительная экспрессия GFP-Bfl-1. Таким образом, Bfl-1 и Bfl-1ΔC подавляют активацию Bax в ответ на TNFα. 
Клетки также анализировали на флуоресценцию GFP ( b , e , h , l , p , t ). Цито С , цитохром С ; GFP, зеленый флуоресцентный белок; TNFα, фактор некроза опухоли-α. 
Клетки также анализировали на флуоресценцию GFP (—, -с-, —, —, -1-, —). Звездочками отмечены GFP-Bfl-1 или -Bfl-1 AC-положительные клетки, которые не показали активации Bax. 
, 1998). Хотя Bfl-1 и Bfl-1ΔC ко-иммунопреципитируются со сверхэкспрессированным FLAG-Bax (1), ни один из них не связан ни с эндогенным Bax, активированным TNFα/циклогексимидом (CHX), ни с неактивным Bax в клетках, обработанных CHX, несмотря на эффективную иммунопреципитацию Bax (2).Обратная иммунопреципитация эндогенного Bax с помощью GFP-Bfl-1 или 2×Myc-Bfl-1 также не удалась, в отличие от контрольной иммунопреципитации эндогенного Bax с помощью Bak (14). Т.о., хотя Bfl-1 может ассоциироваться со сверхэкспрессией Bax, комплексов с эндогенным Bax не наблюдалось, что свидетельствует о том, что он противодействует активации Bax, взаимодействуя с факторами, действующими выше каскада TNF α. 
( b ) Иммунопреципитация 2×Myc-Bfl-1 или -Bfl-1ΔC с эндогенным Bax в клетках HeLa, обработанных TNFα плюс CHX или только CHX, с использованием антител против Bax-loop и иммуноблоттинга с анти-Myc или -BaxN20 антитело. Lys: 1/10 вводного лизата. CHX, циклогексимид; GFP, зеленый флуоресцентный белок; TNFα, фактор некроза опухоли-α. 
( d ) Иммортализованные iBMK дикого типа, Bak-/-, Bax-/- и Bax-/-Bak-/- с двойным нокаутом, трансфицированные EGFP (заштрихованы), 2×Myc-Bfl-1 (черные), 2×Myc-Bfl-1ΔC (белый) или FLAG-Mcl-1 (точечный) обрабатывали STS в течение 24 ч или оставляли без обработки. Среднюю выживаемость в трех экспериментах определяли по исключению трипанового синего и нормализовали по эффективности трансфекции. CHX, циклогексимид; GFP, зеленый флуоресцентный белок; iBMK, бессмертная почка мышиного детеныша; STS, стауроспорин; TNFα, фактор некроза опухоли-α.
Взаимодействие Bfl-1ΔC с Bak было значительно слабее, чем у Bfl-1 ().Таким образом, Bfl-1 ассоциирует с неактивной и активной формами эндогенного Bak, тогда как сниженное взаимодействие Bfl-1ΔC, скорее всего, является результатом его делокализации из митохондрий. 
Как и в случае с Bfl-1, Bfl-1ΔC не способен подавлять апоптоз в клетках Bak-/-. Это показало, что селективное взаимодействие Bfl-1 с Bak, но не с Bax, коррелирует с подавлением Bak-, но не Bax-опосредованного апоптоза, подобно Mcl-1.
, 2005; Herold et al. , 2006). Результаты заметно отличались, когда мы исследовали ассоциацию Bfl-1 с эндогенным tBid в клетках, обработанных TNFα/CHX, чтобы способствовать процессингу Bid в tBid (). Хотя эндогенный tBid трудно обнаружить из-за его короткого периода полувыведения (Breitschopf et al., 2000), было ясно видно взаимодействие с 2×Myc-Bfl-1 или Bfl-1ΔC, особенно при более длительном воздействии. В поддержку функционального взаимодействия Bfl-1 и Bfl-1ΔC подавляли апоптоз, индуцированный tBid, хотя Bfl-1ΔC был несколько менее эффективен, чем Bfl-1 (12). Это показывает, что подобно его дифференциальному взаимодействию с эндогенным Bak, но не с Bax, Bfl-1 избирательно связывается с эндогенным tBid, но не с Bid, и предполагает, что это взаимодействие важно для подавления внешнего апоптотического каскада, инициируемого TNFα.
( a ) Иммунопреципитация/вестерн-блоттинг GFP-Bfl-1 или -Bfl-1ΔC со сверхэкспрессией Bid-Myc или tBid-Myc в клетках HeLa. ( b ) Коиммунопреципитация эндогенного Bid или tBid с 2×Myc-Bfl-1 или -Bfl-1ΔC в клетках HeLa, обработанных только TNFα/CHX или CHX. Показана более длительная экспозиция. Звездочками отмечены позиции эндогенных Bid и tBid; над Bid в лизатах появлялась неспецифическая полоса.( c ) GFP-Bfl-1 или -Bfl-1ΔC подавляют вызванную tBid гибель клеток в клетках MCF-7, котрансфицированных tBid-FLAG или pcDNA3 вместе с CMV-β-gal. Показано среднее из трех экспериментов. ( d ) Модель, иллюстрирующая избирательное взаимодействие Bfl-1 с tBid и Bak для подавления TNFα- и Bak-зависимого апоптоза, а также сходство его механизма действия с Mcl-1. CHX, циклогексимид; GFP, зеленый флуоресцентный белок; TNFα, фактор некроза опухоли-α. 
Мы демонстрируем, что в функциональном контексте живых клеток, где Bfl-1 ингибирует апоптоз, Bfl-1 избирательно связывается с эндогенными tBid и Bak, но не с Bid или Bax. В то время как Bfl-1 противодействовал активации Bax в ответ на внешнюю передачу сигнала о смерти с помощью TNFα, он не смог подавить Bax-опосредованную гибель клеток в ответ на внутреннюю передачу сигнала о смерти, которая не зависит от tBid в клетках Bak-/-, но эффективно блокировал STS-индуцированный апоптоз. в клетках Bax-/-, которые экспрессируют эндогенный Bak. Это указывает на то, что конститутивное взаимодействие Bfl-1 с Bak важно для подавления Bak-опосредованного апоптоза, тогда как его связь с tBid, скорее всего, ответственна за блокирование активации Bax в ответ на стимуляцию рецептора смерти.
, 2002; Grinberg et al. , 2002). Однако исследования нокаута показали, что tBid, скорее всего, действует путем активации Bax и Bak, поскольку клетки, лишенные обоих факторов, устойчивы к апоптозу (Wei et al. , 2001; Degenhardt et al., 2002). Наши данные подтверждают идею о том, что ассоциация Bfl-1 с tBid, скорее всего, ответственна за подавление активации Bax, поскольку Bfl-1 не смог связать эндогенный Bax в клетках, обработанных TNF. Это согласуется с сообщениями, показывающими, что, хотя Bcl-2 и Bcl-x L могут напрямую ассоциироваться с Bax, их взаимодействие с tBid наиболее важно для их защитной функции в каскаде TNF (Cheng et al. , 2001; Werner ). и др. , 2002; Yi и др. , 2003).
, 2005), хотя некоторые обнаружили иное (Certo et al. , 2006).Наш вывод о том, что Bfl-1 физически и функционально взаимодействует с Bak в живых клетках, отличается от других, которым не удалось увидеть взаимодействие между , транслируемым in vitro Bfl-1, и Bak в присутствии митохондрий печени мыши (Werner et al. , 2002). ). Поскольку рекомбинантный tBid был включен в эти анализы, а ассоциация tBid с Mcl-1 может вытеснять Bak из комплексов Mcl-1-Bak (Clohessy et al. , 2006), tBid также может диссоциировать Bfl-1 от Bak, тем самым препятствуя обнаружению комплексов Bfl-1-Bak в этих анализах.
Это может объяснить, почему в недавней работе с использованием Bfl-1ΔC-подобной формы A1, лишенной 20 C-концевых аминокислот, не удалось обнаружить взаимодействие с Bak (Chen et al. , 2005; Willis et al. , 2005). ). Ослабленная ассоциация Bfl-1ΔC с Bak может также прояснить, почему делеция C-конца Bfl-1 снижает его защитную активность в отношении p53-индуцированного апоптоза, в котором Bak играет важную роль (D’Sa-Eipper and Chinnadurai, 1998). В совокупности эти находки показывают, что эффективное взаимодействие Bfl-1/Bak может быть важным средством для Bfl-1 противодействовать внутренней передаче сигналов смерти, которая зависит от Bak и не передает сигналы через tBid.
, 2002, 2003; Clohessy и др. , 2006). Хотя Bfl-1 и Mcl-1 используют сходные средства для подавления апоптоза, они, вероятно, действуют неповторяющимся образом в разных клетках и в ответ на разные стимулы, поскольку они находятся под разным транскрипционным контролем, а Mcl-1 не является Мишень NF-κB (Michels et al., 2005). Bfl-1 сверхэкспрессируется во многих опухолях человека, в том числе в некоторых, в которых конститутивная активация NF-κB необходима для выживания и химиорезистентности. Таким образом, функциональное взаимодействие Bfl-1 с tBid и Bak может способствовать его роли в онкогенезе и резистентности к терапии. В совокупности эти исследования позволяют по-новому взглянуть на механизмы, с помощью которых Bfl-1 противодействует внешним и внутренним каскадам сигналов смерти, и позволяют предположить, что подходы к специфической блокировке взаимодействия Bfl-1 с tBid и/или Bak могут улучшить реакцию клеток, экспрессирующих Bfl-1. опухолевых клеток к противораковому лечению.
Это может быть важно, поскольку ингибирование Mcl-1 необходимо для сенсибилизации некоторых опухолей к низкомолекулярным миметикам Bh4 ABT-737, которые противодействуют Bcl-x L , Bcl-2 и Bcl-w (Konopleva et al. ). , 2006; Letai, 2006; van Delft и др. , 2006). Если Bfl-1 представляет собой NF-κB-индуцированный заменитель Mcl-1, антагонистическая функция Bfl-1 может быть необходима для терапии рака и, возможно, является одним из средств, с помощью которых ингибиторы NF-κB провоцируют апоптоз раковых клеток. 
Дж. Биол. Хим. 2000; 275:21648–21652. [PubMed] [Google Scholar] 
Дж. Биол. Хим. 2006; 281:5750–5759. [PubMed] [Google Scholar] 
Онкоген. 1998;16:3105–3114. [PubMed] [Google Scholar] 
, Сариг Р., Зальцман Ю., Фрумкин Д., Грамматикакис Н., Реувени Э. и др. tBID гомоолигомеризуется в митохондриальной мембране, вызывая апоптоз. Дж. Биол. Хим. 2002; 277:12237–12245. [PubMed] [Google Scholar] 
Дж. Биол. Хим. 1998; 273:10777–10783. [PubMed] [Google Scholar] 
Мол Ячейка. 2005; 17: 525–535. [PubMed] [Google Scholar] 
Дж. Биол. Хим. 1993; 268:25265–25268. [PubMed] [Google Scholar] 
Миметик Bh4 ABT-737 нацеливается на селективные белки Bcl-2 и эффективно индуцирует апоптоз через Bak/Bax, если Mcl-1 нейтрализуется.Раковая клетка. 2006; 10: 389–399. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 
Член семьи Bcl-2 секвестрирует Bfl-1/A1 укорочено, чтобы предотвратить его сотрудничество с проапоптотическим Bak или Бакс.Дж. Биол. Хим. 2002; 277: 22781–22788. [PubMed] [Google Scholar] 
Гомолог Bcl-2 для выживания Bfl-1/A1 является прямой мишенью транскрипции NF-κB, который блокирует апоптоз, индуцированный TNFα. . Гены Дев. 1999; 13: 382–387. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 
Такая досадная ошибка судейства оказала как внешнее, так и внутреннее давление на лигу, чтобы попытаться избежать подобных вопиющих пропущенных вызовов в будущем, и простым (хотя и ошибочным) решением было сделать фолы подлежащими пересмотру. 
). По сути, лига дала этому дополнению к своей сводке правил годовую пробную версию, и вопрос о том, станет ли оно постоянным правилом, будет решаться в 2020 году.
Большинство повторов объективны, и я имею в виду, что это линия». Пересек самолет или нет? Коснулся ли мяч земли или нет? Был ли он в двух футах или нет? Здесь задействовано много объективных линий, и это объективный обзор.
» 
«Они выиграли эти испытания 13 раз.Это 16 процентов успеха. Это может показаться мечтательным для Майка Томлина из «Стилерс», который провел сезоны 2017 и 18 годов, не справившись ни с одной задачей, но средний показатель лиги по всем обзорам повторов за 2019 год составил 47 процентов. 
Он остается таким же и в 2020 году. 
